第一部分人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞及Tip血管內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定目的：探討人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離與培養(yǎng)方法,擬證實(shí)人外周血是內(nèi)皮祖細(xì)胞除了骨髓以外的另一個(gè)理想來源。并在一定的體外培養(yǎng)條件下將外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化為Tip血管內(nèi)皮細(xì)胞,研究其生物學(xué)活性,不僅為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究提供所需的細(xì)胞來源,還為干細(xì)胞源性血管新生機(jī)制提供可靠的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。方法：采用Ficoll密度梯度離心法分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞,將其重懸于EGM-2-MV培養(yǎng)基中培養(yǎng),每日于倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)形態(tài)及內(nèi)皮祖細(xì)胞集落形成形態(tài),每隔3-4天換一次液,培養(yǎng)7天后收集貼壁細(xì)胞,根據(jù)內(nèi)皮祖細(xì)胞特性,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)內(nèi)皮祖細(xì)胞特異性抗原CD34、CD133及VEGFR等表面標(biāo)志物以鑒定培養(yǎng)誘導(dǎo)后細(xì)胞主要為內(nèi)皮祖細(xì)胞。培養(yǎng)至21天時(shí)倒置相差顯微鏡下觀察Tip血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài),并收集該時(shí)期的貼壁細(xì)胞進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)Tip血管內(nèi)皮細(xì)胞中vWF、eNOS等血管內(nèi)皮細(xì)胞系特異性基因的表達(dá)情況。結(jié)果：分離獲得的外周血單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)4天后多數(shù)呈貼壁生長(zhǎng),7天后形成梭狀的內(nèi)皮樣細(xì)胞,部分細(xì)胞積聚成團(tuán)形成克隆集落,流式細(xì)胞儀鑒定... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁(yè)數(shù)】：51 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
主要縮略詞
中文摘要
Abstract
引言
第一部分
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第二部分
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
特色與創(chuàng)新
綜述
    參考文獻(xiàn)
碩士期間發(fā)表論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]半乳糖凝集素-3對(duì)干細(xì)胞源性Tip血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力的影響[J]. 李珊姍,楊鏞,楊國(guó)凱,萬嘉,馬振桓,李國(guó)劍,陸平,楊光.  中華實(shí)驗(yàn)外科雜志. 2012 (12)
[2]細(xì)胞-動(dòng)物缺血缺氧模型建立及特點(diǎn)[J]. 謝海亮,楊鏞.  中國(guó)血管外科雜志(電子版). 2012(03)
[3]Galectin-3對(duì)外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞源性血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力的影響[J]. 李珊姍,楊鏞.  中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志. 2012(07)
[4]SDF-1/CXCR4調(diào)控Tip內(nèi)皮細(xì)胞成血管效應(yīng)的研究進(jìn)展[J]. 杜玲娟,楊鏞.  中國(guó)血管外科雜志(電子版). 2011(03)
[5]外周血干細(xì)胞移植治療血栓閉塞性脈管炎[J]. 楊國(guó)凱,楊鏞,何曉明,羅開元,萬嘉,楊光,李國(guó)劍,馬震寰,陸平.  中國(guó)微創(chuàng)外科雜志. 2009(09)
[6]人自體干細(xì)胞移植在重癥肢體缺血血流重建中的療效與評(píng)價(jià)[J]. 楊鏞,陸平,何曉明,楊國(guó)凱,羅開元,段志泉,時(shí)德.  中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志. 2009(02)
[7]Adult endothelial progenitor cells from human peripheral blood maintain monocyte/macrophage function throughout in vitro culture[J]. Shi Ju Zhang~1 Hao Zhang~1 Ying Jie Wei~1 Wen Jun Su~1 Zhong Kai Liao~1 Mai Hou~1 Jian Ye Zhou~1 Sheng Shou Hu~1 Research Center for Cardiovascular Regenerative Medicine,Ministry of Health,and Department of Cardiovascular Surgery,Cardiovascular Institute and Fu-Wai Hospital,PUMC and CAMS,167 Beilishi Road.West District,Beijing 10003 7 China.  Cell Research. 2006(06)
[8]阻抑正常骨髓基質(zhì)SDF-1作用對(duì)HL-60細(xì)胞生物學(xué)性質(zhì)的影響[J]. 魏立,孔佩艷,陳幸華,彭賢貴,常城,曾東風(fēng),劉紅,劉林,王慶余,張怡.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2004(23)



本文編號(hào)：3474605