目的探究予以外源性鼠源r-GDF11及AAV轉(zhuǎn)染主動脈下調(diào)GDF11表達對C57BL-6小鼠動脈血管鈣化進程的影響;探究GDF11是否通過Smad2/3信號通路影響C57BL-6小鼠動脈鈣化。方法1.C57BL-6小鼠動脈鈣化模型的建立:實驗采用12周齡C57BL-6雄性小鼠,適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,予以維生素D3（Vit D3）·無水乙醇溶液肌注、尼古丁·花生油懸濁液灌胃,分別飼養(yǎng)3、5、7、9周,通過Von Kossa-蘇木素-伊紅染色觀察并比較4組中主動脈彈性纖維斷裂情況、血管內(nèi)膜及中膜鈣化程度,免疫組化觀察鈣化標志蛋白BMP2、RUNX2分布情況,從而建立起成熟、穩(wěn)定的時長依賴的C57BL-6小鼠鈣化梯度模型。2.腹腔注射外源性鼠源r-GDF11,觀察上調(diào)GDF11對C57BL-6小鼠動脈血管鈣化進程的影響:取5周齡C57BL-6小鼠30只,隨機均分成5組,適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,分別每天予以腹腔注射生理鹽水、溶媒緩沖液、低濃度外源重組小鼠源GDF11（r-GDF11）,中濃度r-GDF11,高濃度r-GDF11,預(yù)處理7周,之后誘導(dǎo)鈣化7周,眼球采血后分離其主動脈,觀察并比較5組之間Vo... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

五組小鼠主動脈切片并VonKossa·HE染色

30圖1五組小鼠主動脈切片并VonKossa·HE染色。橫切×100，縱切×50Fig1.VKstainingofaortasectionsinfivegroupsofmice.Transect×100,Rip×50.2.1.2免疫組化觀察小鼠主動脈鈣化標志蛋白BMP2、RUNX2及GDF11的分布免疫組化中，空白組及3周組未見明顯鈣化標志蛋白BMP2及RUNX2分布，提示幾乎無鈣化；5周組已可見少量棕黃色BMP2及RUNX2分布于動脈內(nèi)膜及中膜區(qū)域，提示鈣化有所加重；7周組及9周組可見大量棕黃色BMP2及RUNX2分布于動脈內(nèi)膜及中膜中，提示鈣化程度嚴重。（見圖2）圖2五組小鼠主動脈鈣化標志蛋白BMP2及RUNX2免疫組化×50Fig2.ImmumohistochemicaltodetectBMP2andRUNX2ofaortasectionsinfivegroupsofmice.×50

312.2予以C57BL-6小鼠不同濃度外源性r-GDF11后誘導(dǎo)鈣化2.2.1VonKossa·HE染色觀察小鼠主動脈鈣化程度對五組C57BL-6小鼠不同濃度r-GDF11腹腔注射7周后誘導(dǎo)鈣化，解剖后將動脈血管VonKossa·HE染色，可見空白組及溶媒組動脈內(nèi)膜及中膜大量黑褐色鈣鹽沉積，內(nèi)膜欠光滑，中膜彈力纖維斷裂明顯，無連續(xù)性；低濃度組內(nèi)膜及中膜仍可見黑褐色鈣鹽沉積，但中膜彈力纖維較為完整；中濃度及高濃度組內(nèi)膜及中膜幾乎未見黑褐色鈣鹽沉積，內(nèi)膜光滑，中膜彈力纖維完整，連續(xù)。該結(jié)果提示：r-GDF11濃度越高，小鼠誘導(dǎo)鈣化后動脈鈣化程度越輕（見圖3）圖3五組小鼠主動脈切片并VonKossa·HE染色。橫切×100，縱切×50Fig3.VKstainingofaortasectionsinfivegroupsofmice.Transect×100,Rip×50.2.2.2免疫組化觀察小鼠主動脈鈣化標志蛋白BMP2、RUNX2及GDF11的分布對五組C57BL-6小鼠主動脈行免疫組化檢測GDF11蛋白，在空白組及溶媒組中，黃褐色GDF11表達較為明顯，且分布于內(nèi)膜與中膜內(nèi)；在低濃度組中，黃褐色GDF11表達較空白組及溶媒組增多，內(nèi)膜及中膜均有所分布；在中濃度組及高濃度組中，黃褐色GDF11大量表達，遍布于主動脈整個組織中。免疫組化檢測鈣化標志蛋白BMP2及RUNX2，在空白組及溶媒組中，可見黃褐色鈣化標志蛋白BMP2及RUNX2表達明顯，遍布于主動脈內(nèi)膜與中膜；在低濃度組中，鈣化標志蛋白BMP2

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3449591