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發(fā)布時間:2021-10-16 15:35
  研究背景:血管平滑肌細胞是動脈血管壁的主要細胞成分,對維持血管正常功能起重要作用。在動脈粥樣硬化斑塊形成過程中,血管平滑肌細胞的增殖、凋亡受機械應(yīng)力、氧化型低密度脂蛋白、NO、活性氧簇及細胞成分能等多種因素共同影響。血管平滑肌細胞不協(xié)調(diào)的增殖及凋亡不僅促進了加快粥樣硬化斑塊長,而且與斑塊不穩(wěn)定和支架內(nèi)再狹窄密切相關(guān)。前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin 9,pcsk9)是涉及常染色體顯性遺傳性高膽固醇血癥的第三個基因。主要表達于肝、腸、腎、腦等多組織器官,并且在動脈粥樣硬化斑塊、血管平滑肌、內(nèi)皮細胞、單核巨噬細胞中均可檢測到其表達。最新研究發(fā)現(xiàn),PCSK9不僅在膽固醇的動態(tài)平衡中扮演關(guān)鍵角色,而且在炎癥反應(yīng)、細胞遷移、凋亡中均有重要作用。運用RNA干擾技術(shù)沉默PCSK9基因,可抑制由oxLDL誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細胞、臍靜脈血管內(nèi)皮細胞的凋亡。而對于PCSK9基因沉默后對血管平滑肌細胞增殖、凋亡的作用及其機制國內(nèi)外未見報導(dǎo)。目的:運用siRNA技術(shù)沉默PCSK9基因,觀察其對血管平滑肌細胞增殖及凋亡的影響并探討可能的... 

【文章來源】:湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】:63 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

siRNA抑制PCSK9基因?qū)ρ芷交〖毎鲋臣暗蛲龅挠绊? src='http://image.cnki.net/getimage.ashx?id=1016314915.nh0001'  style='max-width:500px'></p><br> 圖1傳代培養(yǎng)4天后血管平滑肌細胞生長形態(tài)(X?1〇()倍)??<br><p align='center'><img src='http://image.cnki.net/getimage.ashx?id=1016314915.nh0002' alt='蛋白,轉(zhuǎn)染,平滑肌,細胞' style='max-width:500px'></p><br> ?碩士學(xué)位論文???PCSK9?—???P?-actin?——????—?*?"—■>—-?—????—-????圖6.?Western?blot檢測PCSK9蛋白表達??12?r??1?????w?[X??W?0?8?-??1〇6?-??Qlfl]??|?0?4?■?木?木??0?2?-??〇?—?—?—?—?—?—?—?—1—?—???:i?b?c??i?e??圖7?PCSK9蛋白表達相對表達率??注:a?空臼對照組、b?陰性轉(zhuǎn)染組、c?80nmol/L?siRNA-l?組、d?80nmol/L?siRNA-2?組、e?80nmol/L?siRNA-3??組(n=3,?了士s,?*?P<0.05與空白對照組相比)??3.3?siRNA抑制PCSK9基因?qū)ρ芷交〖毎鲋车挠绊懀??消化收集細胞以每孔3xl04個細胞密度接種于96孔板中,10%胎牛血清??DMEM/F12培養(yǎng)液200u?1培養(yǎng)24小時,換無血清、無雙抗DMEM/F12繼續(xù)培??養(yǎng)24h使細胞同步化。將PCSK9siRNA-2轉(zhuǎn)染入血管平滑肌細胞,轉(zhuǎn)染6小時后,??棄去上清,開始實驗,設(shè)計三組分別為:a空白對照組(未加PDGF+轉(zhuǎn)染試劑)、??b?陰性對照組(10ng/mlPDGF+轉(zhuǎn)染陰性?PCSK9siRNA)、c?實驗組(10ng/mlPDGF??+轉(zhuǎn)染PCSK9siRNA-2);每組6個孔。分別于12、24、36、48、60小時用MTT??14?? <br><br><p align='center'><img src='http://image.cnki.net/getimage.ashx?id=1016314915.nh0003' alt='轉(zhuǎn)染,陰性,蛋白,平滑肌' style='max-width:500px'></p><br> ?碩士學(xué)位論文???PCSK9?—???P?-actin?——????—?*?"—■>—-?—????—-????圖6.?Western?blot檢測PCSK9蛋白表達??12?r??1?????w?[X??W?0?8?-??1〇6?-??Qlfl]??|?0?4?■?木?木??0?2?-??〇?—?—?—?—?—?—?—?—1—?—???:i?b?c??i?e??圖7?PCSK9蛋白表達相對表達率??注:a?空臼對照組、b?陰性轉(zhuǎn)染組、c?80nmol/L?siRNA-l?組、d?80nmol/L?siRNA-2?組、e?80nmol/L?siRNA-3??組(n=3,?了士s,?*?P<0.05與空白對照組相比)??3.3?siRNA抑制PCSK9基因?qū)ρ芷交〖毎鲋车挠绊懀??消化收集細胞以每孔3xl04個細胞密度接種于96孔板中,10%胎牛血清??DMEM/F12培養(yǎng)液200u?1培養(yǎng)24小時,換無血清、無雙抗DMEM/F12繼續(xù)培??養(yǎng)24h使細胞同步化。將PCSK9siRNA-2轉(zhuǎn)染入血管平滑肌細胞,轉(zhuǎn)染6小時后,??棄去上清,開始實驗,設(shè)計三組分別為:a空白對照組(未加PDGF+轉(zhuǎn)染試劑)、??b?陰性對照組(10ng/mlPDGF+轉(zhuǎn)染陰性?PCSK9siRNA)、c?實驗組(10ng/mlPDGF??+轉(zhuǎn)染PCSK9siRNA-2);每組6個孔。分別于12、24、36、48、60小時用MTT??14?? <br><br>【參考文獻】:<br>期刊論文<br>[1]廣東漢族人PCSK9基因E670G位點多態(tài)性與冠心病相關(guān)性研究[J]. 孟艷輝,劉忠民.  熱帶醫(yī)學(xué)雜志. 2011(02)<br>
[2]血管平滑肌細胞在動脈粥樣硬化中的作用[J]. 莊瑜,劉俊,肖明第.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展. 2009(17)<br>
[3]血管平滑肌細胞凋亡與動脈粥樣硬化研究進展[J]. 董志華,翟桂蘭.  心血管病學(xué)進展. 2009(02)<br>
[4]pcsk9 siRNA對oxLDL誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細胞凋亡的影響[J]. 劉錄山,謝閔,姜志勝,楊瓊,潘利紅,武春艷,唐志晗,唐朝克,危當(dāng)恒,王佐.  生物化學(xué)與生物物理進展. 2009(03)<br>
[5]血小板源性生長因子-B與血管平滑肌細胞增殖[J]. 張遠起,陳小東,李建文.  廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2008(01)<br>
<br>博士論文<br>[1]急性心肌梗死及短期應(yīng)用降脂藥對PCSK9的影響[D]. 劉俊.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2013<br>
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