研究背景:血管平滑肌細(xì)胞是動(dòng)脈血管壁的主要細(xì)胞成分,對(duì)維持血管正常功能起重要作用。在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成過(guò)程中,血管平滑肌細(xì)胞的增殖、凋亡受機(jī)械應(yīng)力、氧化型低密度脂蛋白、NO、活性氧簇及細(xì)胞成分能等多種因素共同影響。血管平滑肌細(xì)胞不協(xié)調(diào)的增殖及凋亡不僅促進(jìn)了加快粥樣硬化斑塊長(zhǎng),而且與斑塊不穩(wěn)定和支架內(nèi)再狹窄密切相關(guān)。前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9（proprotein convertase subtilisin/kexin 9,pcsk9）是涉及常染色體顯性遺傳性高膽固醇血癥的第三個(gè)基因。主要表達(dá)于肝、腸、腎、腦等多組織器官,并且在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊、血管平滑肌、內(nèi)皮細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞中均可檢測(cè)到其表達(dá)。最新研究發(fā)現(xiàn),PCSK9不僅在膽固醇的動(dòng)態(tài)平衡中扮演關(guān)鍵角色,而且在炎癥反應(yīng)、細(xì)胞遷移、凋亡中均有重要作用。運(yùn)用RNA干擾技術(shù)沉默PCSK9基因,可抑制由oxLDL誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞、臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡。而對(duì)于PCSK9基因沉默后對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖、凋亡的作用及其機(jī)制國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)。目的:運(yùn)用siRNA技術(shù)沉默PCSK9基因,觀察其對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖及凋亡的影響并探討可能的... 

【文章來(lái)源】：湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１傳代培養(yǎng)４天后血管平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)（Ｘ?１〇（）倍）??

?碩士學(xué)位論文???ＰＣＳＫ９?—？??Ｐ?－ａｃｔｉｎ?——？?？?—?＊？＂—■＞—－?—???？—－？？??圖６．?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測(cè)ＰＣＳＫ９蛋白表達(dá)??１２?ｒ??１?????ｗ?［Ｘ??Ｗ?０?８?－??１〇６?－??Ｑｌｆｌ］??｜?０?４?■?木?木??０?２?－??〇?—?—？—?—？—?—？—?—１—?—？??：ｉ?ｂ?ｃ?？ｉ?ｅ??圖７?ＰＣＳＫ９蛋白表達(dá)相對(duì)表達(dá)率??注：ａ?空臼對(duì)照組、ｂ?陰性轉(zhuǎn)染組、ｃ?８０ｎｍｏｌ／Ｌ?ｓｉＲＮＡ－ｌ?組、ｄ?８０ｎｍｏｌ／Ｌ?ｓｉＲＮＡ－２?組、ｅ?８０ｎｍｏｌ／Ｌ?ｓｉＲＮＡ－３??組（ｎ＝３，?了士ｓ，?＊?Ｐ＜０．０５與空白對(duì)照組相比）??３．３?ｓｉＲＮＡ抑制ＰＣＳＫ９基因?qū)ρ芷交〖?xì)胞增殖的影響：??消化收集細(xì)胞以每孔３ｘｌ０４個(gè)細(xì)胞密度接種于９６孔板中，１０％胎牛血清??ＤＭＥＭ／Ｆ１２培養(yǎng)液２００ｕ?１培養(yǎng)２４小時(shí)，換無(wú)血清、無(wú)雙抗ＤＭＥＭ／Ｆ１２繼續(xù)培??養(yǎng)２４ｈ使細(xì)胞同步化。將ＰＣＳＫ９ｓｉＲＮＡ－２轉(zhuǎn)染入血管平滑肌細(xì)胞，轉(zhuǎn)染６小時(shí)后，??棄去上清，開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，設(shè)計(jì)三組分別為：ａ空白對(duì)照組（未加ＰＤＧＦ＋轉(zhuǎn)染試劑）、??ｂ?陰性對(duì)照組（１０ｎｇ／ｍｌＰＤＧＦ＋轉(zhuǎn)染陰性?ＰＣＳＫ９ｓｉＲＮＡ）、ｃ?實(shí)驗(yàn)組（１０ｎｇ／ｍｌＰＤＧＦ??＋轉(zhuǎn)染ＰＣＳＫ９ｓｉＲＮＡ－２）；每組６個(gè)孔。分別于１２、２４、３６、４８、６０小時(shí)用ＭＴＴ??１４??

?碩士學(xué)位論文???ＰＣＳＫ９?—？??Ｐ?－ａｃｔｉｎ?——？?？?—?＊？＂—■＞—－?—???？—－？？??圖６．?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測(cè)ＰＣＳＫ９蛋白表達(dá)??１２?ｒ??１?????ｗ?［Ｘ??Ｗ?０?８?－??１〇６?－??Ｑｌｆｌ］??｜?０?４?■?木?木??０?２?－??〇?—?—？—?—？—?—？—?—１—?—？??：ｉ?ｂ?ｃ?？ｉ?ｅ??圖７?ＰＣＳＫ９蛋白表達(dá)相對(duì)表達(dá)率??注：ａ?空臼對(duì)照組、ｂ?陰性轉(zhuǎn)染組、ｃ?８０ｎｍｏｌ／Ｌ?ｓｉＲＮＡ－ｌ?組、ｄ?８０ｎｍｏｌ／Ｌ?ｓｉＲＮＡ－２?組、ｅ?８０ｎｍｏｌ／Ｌ?ｓｉＲＮＡ－３??組（ｎ＝３，?了士ｓ，?＊?Ｐ＜０．０５與空白對(duì)照組相比）??３．３?ｓｉＲＮＡ抑制ＰＣＳＫ９基因?qū)ρ芷交〖?xì)胞增殖的影響：??消化收集細(xì)胞以每孔３ｘｌ０４個(gè)細(xì)胞密度接種于９６孔板中，１０％胎牛血清??ＤＭＥＭ／Ｆ１２培養(yǎng)液２００ｕ?１培養(yǎng)２４小時(shí)，換無(wú)血清、無(wú)雙抗ＤＭＥＭ／Ｆ１２繼續(xù)培??養(yǎng)２４ｈ使細(xì)胞同步化。將ＰＣＳＫ９ｓｉＲＮＡ－２轉(zhuǎn)染入血管平滑肌細(xì)胞，轉(zhuǎn)染６小時(shí)后，??棄去上清，開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，設(shè)計(jì)三組分別為：ａ空白對(duì)照組（未加ＰＤＧＦ＋轉(zhuǎn)染試劑）、??ｂ?陰性對(duì)照組（１０ｎｇ／ｍｌＰＤＧＦ＋轉(zhuǎn)染陰性?ＰＣＳＫ９ｓｉＲＮＡ）、ｃ?實(shí)驗(yàn)組（１０ｎｇ／ｍｌＰＤＧＦ??＋轉(zhuǎn)染ＰＣＳＫ９ｓｉＲＮＡ－２）；每組６個(gè)孔。分別于１２、２４、３６、４８、６０小時(shí)用ＭＴＴ??１４??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]廣東漢族人PCSK9基因E670G位點(diǎn)多態(tài)性與冠心病相關(guān)性研究[J]. 孟艷輝,劉忠民.  熱帶醫(yī)學(xué)雜志. 2011(02)
[2]血管平滑肌細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用[J]. 莊瑜,劉俊,肖明第.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2009(17)
[3]血管平滑肌細(xì)胞凋亡與動(dòng)脈粥樣硬化研究進(jìn)展[J]. 董志華,翟桂蘭.  心血管病學(xué)進(jìn)展. 2009(02)
[4]pcsk9 siRNA對(duì)oxLDL誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞凋亡的影響[J]. 劉錄山,謝閔,姜志勝,楊瓊,潘利紅,武春艷,唐志晗,唐朝克,危當(dāng)恒,王佐.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2009(03)
[5]血小板源性生長(zhǎng)因子-B與血管平滑肌細(xì)胞增殖[J]. 張遠(yuǎn)起,陳小東,李建文.  廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2008(01)

博士論文
[1]急性心肌梗死及短期應(yīng)用降脂藥對(duì)PCSK9的影響[D]. 劉俊.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2013



本文編號(hào)：3440065