【背景與目的】本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),在THP‐1巨噬細(xì)胞中,高表達(dá)脂肪分化相關(guān)蛋白PLIN2能夠促進(jìn)脂質(zhì)蓄積加速動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis,AS）的發(fā)生發(fā)展,但其具體發(fā)生機(jī)制尚不完全明了。因此,本研究的目的是為了闡明小GTP結(jié)合蛋白Rab18、過氧化物酶體增殖物激活受體γ（Peroxisome proliferator-activated receptors,PPARγ）與PLIN2的關(guān)系,探討PLIN2促進(jìn)THP‐1人源性巨噬細(xì)胞脂質(zhì)蓄積的機(jī)制�！痉椒ā渴紫�,將50μg/mL Ox‐LDL與THP‐1巨噬細(xì)胞共孵育,在不同的時(shí)間點(diǎn)利用Western blot檢測細(xì)胞內(nèi)Rab18、PPARγ及PLIN2表達(dá)情況,同時(shí)油紅O染色法觀察細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積的變化;然后,將質(zhì)粒Rab18（WT）、Rab18（Q67L）和Rab18（S22N）分別轉(zhuǎn)染THP‐1巨噬細(xì)胞,制備野生型Rab18細(xì)胞、高活型Rab18細(xì)胞和低活型Rab18細(xì)胞,并通過免疫熒光技術(shù)和Western blot檢測質(zhì)粒轉(zhuǎn)染情況。結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染成功后,我們將50μg/mL Ox‐LDL與各轉(zhuǎn)染細(xì)胞共孵育24小時(shí),... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

在巨噬細(xì)胞中隨著Ox-LDL孵育時(shí)間的延長脂質(zhì)蓄積增加（Sclarbar=20um）

南華大學(xué)碩士學(xué)位論文18圖1.2Ox-LDL對巨噬細(xì)胞Rab18、PPARγ和PLIN2表達(dá)的影響*P＜0.05，vs.0h（n=3）綜上所述，巨噬細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積及Rab18、PPARγ和PLIN2表達(dá)量的變化隨Ox-LDL孵育時(shí)間的延長而增加，故細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積增多可能與Rab18、PPARγ及PLIN2表達(dá)量增加有關(guān)。另外，Rab18表達(dá)在6h時(shí)較0h時(shí)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明在巨噬細(xì)胞中，Rab18可能不參與Ox-LDL誘導(dǎo)的脂滴的生成。4.2Rab18對荷脂巨噬細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積的影響首先，將購買的含Rab18（WT）、Rab18（Q67L）和Rab18（S22N）的大腸桿菌分別進(jìn)行養(yǎng)菌、挑菌、搖菌及質(zhì)粒提齲通過紫外分光光度計(jì)檢測各質(zhì)粒濃度及純度，將三種質(zhì)粒用轉(zhuǎn)染試劑lip6000TM轉(zhuǎn)入巨噬細(xì)胞，制備野生型Rab18細(xì)胞、高活型Rab18細(xì)胞和低活型Rab18細(xì)胞。將細(xì)胞分為4組，對照組（control）、野生型Rab18組（WT）、高活型Rab18組（HA）、低活型Rab18組（LA）。用Ox-LDL處理各組細(xì)胞，24h后通過免疫熒光技術(shù)及Westernblot檢測各組細(xì)胞的轉(zhuǎn)染情況（圖2.1，2.2）。Westernblot結(jié)果顯示，WT組、HA組和LA組中Rab18表達(dá)較control組明顯升高；細(xì)胞免疫熒光觀察不同活性的Rab18質(zhì)粒轉(zhuǎn)染情況，結(jié)果如圖2.1所示，綠色為不同活性Rab18質(zhì)粒，綜上說明不同活性Rab18細(xì)胞轉(zhuǎn)染成功。另外，Westernblot結(jié)果顯示，各轉(zhuǎn)染組間相比Rab18表達(dá)無差異，這說明我們

第4章實(shí)驗(yàn)結(jié)果19所觀察的不同活性Rab18功能的不同與它們本身的生物學(xué)作用有關(guān)，與其蛋白表達(dá)量無關(guān)。圖2.1WT（野生型）、HA（高活型）和LA（低活型）Rab18細(xì)胞的轉(zhuǎn)染情況（Sclarbar=20um）圖2.2各轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中Rab18表達(dá)變化情況*P＜0.05，vs.control（n=3）然后，油紅O染色法觀察各組細(xì)胞脂質(zhì)蓄積情況。結(jié)果顯示，與control相比，WT組與HA組細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積均明顯減少，而LA組細(xì)胞脂質(zhì)蓄積無明顯變化。這說明，細(xì)胞內(nèi)活化型的Rab18可減少脂質(zhì)蓄積。

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本文編號：3415308