發(fā)布時(shí)間：2021-09-18 14:30

　　目的：通過(guò)測(cè)定類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis,RA）合并慢性病貧血（anemia ofchronic disease,ACD）患者、RA患者及健康受試者血清鐵調(diào)素（hepcidin,Hepc）及轉(zhuǎn)鐵蛋白（transferrin,Tf）的水平，進(jìn)一步研究Hepc、Tf的水平與RA患者疾病活動(dòng)度28（disease activity score in28joints,DAS28）與血紅蛋白（hemoglobin,Hb）水平的相關(guān)性，從而探討RA合并ACD發(fā)生的可能機(jī)制。方法：分別用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）、免疫散射比濁法測(cè)定22例RA合并ACD患者、27例RA患者及24例健康對(duì)照受試者血清Hepc及Tf水平。結(jié)果：（1）RA合并ACD組患者、RA組患者血清Hepc水平均明顯高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；RA合并ACD組患者血清Hepc水平高于RA組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；（2）RA合并ACD組患者、RA組患者血清Tf水平均明顯低于健康對(duì)照組，差... 

【文章來(lái)源】：青海大學(xué)青海省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：40 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法示意圖

實(shí)驗(yàn)操作步驟：①向反應(yīng)孔中加入稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品 50ul，并加入 50ul 待測(cè)血清，隨即加入50ul 生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板后輕輕振蕩混勻，在 37℃溫育 1 小時(shí)。②甩去孔內(nèi)液體后在每孔加滿洗滌液，并振蕩 30 秒，再甩去洗滌液并用吸水紙拍干。重復(fù)此操作 3 次。③向每孔加入親和鏈霉素-HRP60ul，輕輕振蕩混勻，在 37℃溫育 30 分鐘。④甩去孔內(nèi)液體，向每孔加滿洗滌液并振蕩 30 秒，再甩去洗滌液并用吸水紙拍干。重復(fù)此操作 3 次。⑤向每孔加入底物 A 和底物 B 各 50ul，輕輕振蕩混勻，在 37℃溫育 10分鐘。避免光照。⑥取出酶標(biāo)板，迅速加 50ul 終止液并立即測(cè)定結(jié)果。⑦在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度 OD 值。質(zhì)量控制：本實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作，相關(guān)系數(shù)為 r=0.9982，質(zhì)量控制良好。標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖 2。

圖 3 免疫散射比濁法示意圖實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：①取出標(biāo)本置于室溫使其自然融化，并在 15000×g 下離心 10min 以澄清血清；②建立儀器參考曲線；③檢測(cè) N/T 蛋白質(zhì)控 SL/L、M 和 H。實(shí)驗(yàn)步驟：①將 N 抗血清開(kāi)封；②將血清樣本加入儀器，樣本將自動(dòng)被 N 稀釋液稀釋成 1:20 并進(jìn)行測(cè)量；③BN 系統(tǒng)將自動(dòng)計(jì)算并打印出以 g/L 為單位的血清中 Tf 的濃度結(jié)果。實(shí)驗(yàn)質(zhì)控：本實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，在使用抗血清之前建立新的參考曲線，并檢測(cè) N/T 蛋白質(zhì)控 SL/L、M 和 H。定值和置信區(qū)間列于相應(yīng)質(zhì)控項(xiàng)目的定值表中。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3400309