發(fā)布時間：2017-04-30 13:13

  本文關(guān)鍵詞：基質(zhì)Gla蛋白在主動脈瓣間質(zhì)細(xì)胞鈣化過程中表達(dá)的變化，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景隨著社會老齡化加劇,鈣化性主動脈瓣膜疾病(calcific aortic valve disease,CAVD)發(fā)病率日益增加,但其具體發(fā)病機(jī)制尚不清楚。近年來的研究表明,CAVD是一個主動的、多細(xì)胞參與并受復(fù)雜機(jī)制調(diào)控的成骨樣分化過程�；|(zhì)Gla蛋白(matrix gla protein,MGP)是血管鈣化的強(qiáng)效抑制劑,其在心臟瓣膜內(nèi)也有表達(dá)。有研究表明,在血管鈣化過程中,內(nèi)源性MGP表達(dá)量減少,且其羧化作用受損,繼而其抑制鈣化的能力減弱。然而,關(guān)于MGP在主動脈瓣膜鈣化過程中的變化調(diào)節(jié)情況的研究較少。目的研究基質(zhì)Gla蛋白(MGP)在主動脈瓣間質(zhì)細(xì)胞(aortic valve interstitial cells,AVICs)體外鈣化誘導(dǎo)過程中的變化情況。方法1.分離、培養(yǎng)主動脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞:取健康成年雄性家豬,采用電擊法處理,待家豬完全暈厥后,放血、剖開胸腔,取下主動脈根部,保存在預(yù)冷過的生理鹽水中,迅速返回實(shí)驗(yàn)室。嚴(yán)格無菌條件下,剪下主動脈瓣膜,并剪碎瓣膜組織,采用組織塊法分離培養(yǎng)瓣膜間質(zhì)細(xì)胞,每2-3天更換一次培養(yǎng)基。取2-5代AVICs以1×105/m L的細(xì)胞密度分別種植于6孔板中,在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基和鈣化誘導(dǎo)培養(yǎng)基(含2 m Mβ-甘油磷酸,100 n M地塞米松,50μg/m L維生素C)中培養(yǎng)。分別在1、7、14d收集兩組瓣膜細(xì)胞,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.免疫熒光染色鑒定原代分離培養(yǎng)的細(xì)胞表型:取分離培養(yǎng)所得瓣膜細(xì)胞,消化后加入培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液,調(diào)整細(xì)胞密度至1×105/m L,滴加到預(yù)先處理過的玻片上,進(jìn)行爬片。待細(xì)胞貼壁后,即可采用免疫熒光染色技術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、血管性假血友病因子(v WF)的表達(dá)情況。3.茜素紅染色及鈣化結(jié)節(jié)計數(shù)法觀察正常對照組與鈣化誘導(dǎo)組細(xì)胞在1、7、14d的鈣化情況及鈣化結(jié)節(jié)數(shù)。4.采用Real Time-PCR、Western Blotting法分別測定正常組與鈣化誘導(dǎo)組細(xì)胞在處理1、7、14d后MGP mRNA表達(dá)水平及活化型MGP蛋白含量。結(jié)果1.原代細(xì)胞培養(yǎng)及表型鑒定結(jié)果:細(xì)胞均呈梭形,旋渦狀排列;免疫熒光染色結(jié)果:波形蛋白、α-SMA染色陽性,v WF陰性,表明培養(yǎng)細(xì)胞為成纖維表型。2.茜素紅染色及鈣結(jié)節(jié)計數(shù)結(jié)果:分別檢測對照組與鈣化誘導(dǎo)組細(xì)胞在1、7、14 d的鈣化情況,對照組細(xì)胞在7、14 d出現(xiàn)少量鈣化結(jié)節(jié)(2.38±0.97個/孔、5.47±1.59個/孔),鈣化誘導(dǎo)組7、14 d出現(xiàn)明顯鈣化(37.55±6.70個/孔、78.29±9.14個/孔),鈣化誘導(dǎo)組細(xì)胞在7、14 d鈣化情況明顯高于同一時間點(diǎn)對照組鈣化情況(P0.05)。3.RT-PCR檢測結(jié)果:7、14 d時,鈣化誘導(dǎo)組細(xì)胞內(nèi)MGP mRNA表達(dá)水平明顯低于對照組(P0.05)。4.Western Blotting檢測結(jié)果:7、14 d時,鈣化誘導(dǎo)組內(nèi)活化型MGP蛋白含量水平明顯低于對照組(P0.05)。結(jié)論在鈣化誘導(dǎo)條件下,AVICs內(nèi)鈣化抑制劑MGP抑制鈣化能力下調(diào)。
【關(guān)鍵詞】：基質(zhì)Gla蛋白 主動脈瓣 瓣膜間質(zhì)細(xì)胞 瓣膜鈣化
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R542.52
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 1 實(shí)驗(yàn)材料12-18
• 2 實(shí)驗(yàn)方法18-28
• 3 統(tǒng)計學(xué)分析28-29
• 4 結(jié)果29-31
• 5 討論31-35
• 6 問題與展望35
• 7 小結(jié)35-37
• 附圖37-41
• 參考文獻(xiàn)41-47
• 綜述：鈣化性主動脈瓣疾病發(fā)病機(jī)制及藥物治療的研究進(jìn)展47-66
• 參考文獻(xiàn)57-66
• 附錄66-67
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況67-68
• 致謝68-69
• 個人簡歷69

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1 周仁;血清中存在游離γ羧谷氨酸(GLA)的證據(jù)[J];國外醫(yī)學(xué).內(nèi)分泌學(xué)分冊;1990年02期

2 ;[J];;年期

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2 本報記者 劉珊珊;奔馳GLA闖關(guān)電商[N];華夏時報;2014年

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1 金洋;基質(zhì)Gla蛋白在主動脈瓣間質(zhì)細(xì)胞鈣化過程中表達(dá)的變化[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2016年

2 謝菲飛;維生素D對絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥基質(zhì)Gla蛋白表達(dá)的影響[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2015年

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本文編號：336912