發(fā)布時(shí)間：2021-08-18 01:37

　　目的探討胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）過表達(dá)保護(hù)低氧/無血清（H/SD）誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）凋亡的機(jī)制。方法體外分離培養(yǎng)大鼠MSCs,利用H/SD誘導(dǎo)MSCs凋亡,構(gòu)建CSE基因的慢病毒表達(dá)載體p LV-Zs Green-CSE lentivirus及空載體p LV-Zs Green lentivus并感染MCSs（分別記為CSEMSCs、GFPMSCs）。設(shè)立正常培養(yǎng)的MSCs（NormMSCs組）、CSEMSCs組、GFPMSCs組,PI染色流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率,Western blot法檢測CSE、Bcl-2、Bax及細(xì)胞色素c（Cyt c）蛋白的表達(dá)。結(jié)果與NormMSCs組及GFPMSCs組相比,CSE MSCs組CSE蛋白表達(dá)顯著增高（P<0.01）,在H/SD 12 h狀態(tài)下,CSEMSCs組凋亡率顯著降低（P<0.01）,CSEMSCs組Bcl-2蛋白表達(dá)水平顯著高于GFPMSCs組及NormMSCs組（P<0.01）,CSEMSCs組Bax蛋白表達(dá)水平顯著低于GFPMSCs組及NormMSCs組（P<0.01）;CSEMSCs組線... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2017,52(01)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

大鼠MSCs的形態(tài)×10A:原代MSCs(P0);B:第3代MSCs(P3)

圖1大鼠MSCs的形態(tài)×10A:原代MSCs(P0);B:第3代MSCs(P3)2．3CSE過表達(dá)對H/SD誘導(dǎo)MSCs凋亡的影響流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示:與GFPMSCs組及NormMSCs組相比，在H/SD12h狀態(tài)下，CSEMSCs組凋亡率顯著降低(F=159.964，P＜0.01)，GFPMSCs組與NormMSCs組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見圖3。2．4CSE過表達(dá)對H/SD作用下MSCsBcl-2、Bax及Cytc蛋白表達(dá)的影響在H/SD12h狀態(tài)下，CSEMSCs組Bcl-2蛋白表達(dá)水平顯著高于GFPMSCs組及NormMSCs組(F=11.309，P＜0.01)，CSEMSCs組Bax蛋白表達(dá)水平顯著低于GFPMSCs組及NormMSCs組(F=79.420，P＜0.01);CSEMSCs組線粒體Cytc［Cytc(mito)］蛋白表達(dá)水平顯著高于GFPMSCs組及NormMSCs組(F=40.550，P＜0.01)，CSEMSCs組胞質(zhì)Cytc［Cytc(cyto)］蛋白表達(dá)水平顯著低于GFPMSCs組及NormMSCs組(F=14.954，P＜0.01)。NormMSCs與GFPMSCs組上述指標(biāo)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見圖4。圖2CSE轉(zhuǎn)染MSCs后各組CSE蛋白表達(dá)水平A:Westernblot檢測過表達(dá)CSE后MSCs中CSE蛋白表達(dá);B:QuantityOne軟件對A圖條帶進(jìn)行灰度值分析;與NormMSCs組及GFPMSCs比較:＊＊P＜0.013討論細(xì)胞凋亡是一種特殊形式的程序性細(xì)胞死亡。已有研究［5］表明，體外模擬心肌缺血微環(huán)境即H/SD可通過線粒體凋亡途徑而非死亡受體途徑誘導(dǎo)圖3CSE過表達(dá)對H/SD誘導(dǎo)MSCs凋亡的影響A:流式細(xì)胞儀PI染色法檢測MSCs凋亡;B:對A圖條帶進(jìn)行量化分析;與NormMSCs及GFPMSCs比較:＊＊P＜0.01安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2017Jan;52(1)·39·

圖4CSE過表達(dá)對H/SD作用下MSCsCytc、Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)的影響A:Westernblot檢測過表達(dá)CSE后MSCs中Bcl-2、Bax及Cytc蛋白表達(dá);B:QuantityOne軟件對A圖條帶進(jìn)行灰度值分析;與NormMSCs及GFPMSCs比較:＊＊P＜0.01MSCs凋亡。本研究首先建立H/SD誘導(dǎo)MSCs凋亡模型，結(jié)果顯示，與對照組相比，MSCs凋亡率顯著增高，表明H/SD能夠誘導(dǎo)MSCs凋亡，這與既往研究［11］結(jié)果相一致。而CSEMSCs組細(xì)胞凋亡率顯著低于GFPMSCs組及NormMSCs組，提示CSE過表達(dá)保護(hù)H/SD誘導(dǎo)MSCs凋亡。Cytc從線粒體向細(xì)胞質(zhì)中釋放被推測是細(xì)胞凋亡過程中線粒體主要事件之一，正常情況下，Cytc位于線粒體膜間隙，呈電穩(wěn)定性地結(jié)合于線粒體內(nèi)膜，當(dāng)細(xì)胞收到凋亡刺激時(shí)，線粒體膜通透性發(fā)生改變，Cytc從細(xì)胞間隙進(jìn)入胞質(zhì)，釋放入胞質(zhì)的Cytc最終引起凋亡蛋白酶caspase的級聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡［12］。本研究結(jié)果顯示，在H/SD12h狀態(tài)下，CSEMSCs組Cytc(mi-to)蛋白表達(dá)水平顯著高于GFPMSCs組及NormMSCs組，而CSEMSCs組Cytc(cyto)蛋白表達(dá)水平顯著低于GFPMSCs組及NormMSCs組，GFPMSCs組與NormMSCs組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明CSE過表達(dá)能明顯抑制H/SD誘導(dǎo)MSCsCytc從線粒體向細(xì)胞質(zhì)中釋放。在細(xì)胞凋亡分子生物學(xué)的研究［13］中顯示，Bc1-2基因家族蛋白是線粒體凋亡途徑主要調(diào)節(jié)因子之一，其中促凋亡蛋白包括Bax、Bak和Bid等(Bax組蛋白)，抑凋亡蛋白包括Bcl-2、Bc1-x等(Bc1-2組蛋白)，兩者的平衡在決定細(xì)胞的生存中起著重要作用。Bcl-2能和Bax形成二聚體阻止Bax插入線粒體外膜，保護(hù)線粒體電位，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)Ca2+的自穩(wěn)狀態(tài)和氧化還原狀態(tài)來抑制凋亡［14］。Bax在線粒體及胞質(zhì)之間來回穿梭，一旦?


本文編號：3348927