Micro RNA（miRNA）是一類小的,長度約在18-25個(gè)堿基左右的非編碼RNA,在動(dòng)物體內(nèi),絕大多數(shù)的miRNAs通過與3’-UTR（非編碼區(qū)）中的靶基因的互補(bǔ)區(qū)結(jié)合來抑制靶基因向蛋白的轉(zhuǎn)化,通過這種方式,miRNAs便可在無論是細(xì)胞、組織還是個(gè)體水平上,影響生物體的生長和發(fā)育,并同時(shí)參與各種疾病過程,因此,miRNAs的檢測對(duì)其調(diào)控的相關(guān)疾病的研究具有重要意義。但miRNAs的含量非常低,通常情況下很難對(duì)實(shí)際樣中的疾病相關(guān)miRNAs直接進(jìn)行檢測,故本文便以此為目標(biāo),建立了一個(gè)超靈敏實(shí)時(shí)檢測與急性心肌梗死相關(guān)的miRNAs的化學(xué)發(fā)光平臺(tái),主要研究內(nèi)容可大致分為以下兩部分:第一部分是有關(guān)G4/MOFzyme化學(xué)發(fā)光檢測平臺(tái)的構(gòu)建。本實(shí)驗(yàn)主要以血紅素為有機(jī)配體,以鋅離子為金屬配體,合成以血紅素（hemin）橋連的金屬有機(jī)框架材料（MOF）。此MOF材料因有血紅素的存在,可以給G-四鏈體（G4）提供大量的結(jié)合位點(diǎn),從而可在材料的表面裝載G4-血紅素DNA酶。于是,在此基礎(chǔ)上,我們便將合成的Zn-hemin MOF材料與滾環(huán)擴(kuò)增核酸放大技術(shù)結(jié)合,利用目標(biāo)miRNAs（miRNA-13... 

【文章來源】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．１描述常見有機(jī)分子的電子能級(jí)和不同的單重態(tài)和三重態(tài)之間可能躍遷的雅布隆斯基??圖．??通常，化學(xué)發(fā)光反應(yīng)可由兩種基本機(jī)制產(chǎn)生（圖１．２）

、氣相和液相中能有大量的實(shí)際應(yīng)用［２］。??Ａ?十?Ｂ?十?（Ｃｏｆａｃｔｏｒｓ）??（Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ?（Ｏｘｉｄａｎｔ）??ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）??Ｃａｔａｌｙｓｔ??Ｎ．＂??＾ｒｅｃ＾?Ｐ＊?｛ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ?ｏｒ?ｐｒｏｄｕｃｔ）??ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ＾?Ｓｅｎｉｔｉｚｅｄ?ｏｒ?ｅｎｅｒｇｙ?ｔｒａｎｓｆｅｒ??ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ??Ｐ?十?／ｉｖ??Ｐ＋?ｆｉｒ??ｉ??Ｆ十ｆｃｖ??圖１．２化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的種類（兩種反應(yīng)機(jī)理）??１．１．２化學(xué)發(fā)光產(chǎn)生的必要條件及其影響因素??對(duì)于一個(gè)要產(chǎn)生光的化學(xué)反應(yīng)，其必須滿足以下幾個(gè)條件：??（１）反應(yīng)必須是放熱的，才能產(chǎn)生足夠的能量形成電子激發(fā)態(tài)；??（２）反應(yīng)途徑必須有利于為電子激發(fā)態(tài)的形成提供能量。如果化學(xué)能以熱的形??式損失，例如通過振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能的方式，反應(yīng)就不會(huì)是化學(xué)發(fā)光。??（３）與其他競爭性非輻射過程相比，光子發(fā)射必須是激發(fā)產(chǎn)物的一個(gè)有利的失??活過程，或者即使同時(shí)存在其他競爭性的非輻射過程，在超靈敏的化學(xué)發(fā)??光發(fā)生的情況下，其他競爭性非輻射過程的比例也要很�。▓D】．３），這包??括了激發(fā)態(tài)物質(zhì)與熒光團(tuán)之間的能量轉(zhuǎn)移效率，并且后者的能量轉(zhuǎn)移效率??明顯更為重要。??２??

核酸⑶。如今，ＲＣＡ己被廣泛應(yīng)用于核酸＋５］、蛋白??［６］、金屬離子［７］等的靈敏檢測。若將化學(xué)發(fā)光技術(shù)與滾環(huán)擴(kuò)增結(jié)合，則可大大提??高檢測的靈敏度和特異性。ＺｅｎｇＷ等人就將ＲＣＡ和ＣＬ聯(lián)用以對(duì)ＤＮＡ甲基轉(zhuǎn)移??酶進(jìn)行檢測。在ＤＮＡ腺嘌呤甲基化（Ｄａｍ）甲基轉(zhuǎn)移酶的存在下，發(fā)夾探針可??以被甲基化并被限制性核酸內(nèi)切酶Ｄｐｎ?Ｉ剪切，從而產(chǎn)生ＲＣＡ的引物，這個(gè)引??物可與環(huán)狀模板ＤＮＡ進(jìn)行雜交并啟動(dòng)ＲＣＡ的進(jìn)行，產(chǎn)生大量的可催化ｌｕｍｉｎｏ丨－??出０２化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的ＤＮＡ酶（如圖１．４所示）。此法相對(duì)于許多傳統(tǒng)的檢測甲??基轉(zhuǎn)移酶的方法［９］而言具有非常高的優(yōu)越性，因其最低檢測限可達(dá)１．２９ＸＫＴ４??Ｕ?？?ｍＬ＿Ｉ〇??〇＝?Ｌｕｎｉｉｎ？ｌ＋＊?Ｋ?Ｈ２Ｏ??Ｈａｉｒｐｉｎ?ｐｒｏｂｅ?＼）ｔＰ￣??Ｄａｍ?Ｌｕｍｉｎｏｌ?Ｈ２０２??＾?，ｒＳＡＭ?？?Ｈｅｍ?ｉｎ??ｃｈ３??貴?Ｎ．ｋ．?ｄ?〇〇＾??Ｎｉｃｋｉｎｇ?ｍ?（?Ｈ；??ｆｓ?Ｄｐｎ?Ｉ?ｅｎｚ＞?ｒａｅ?Ｌ?＾?＾??，?＂Ｏ＾?］■〇??３?Ｘ?ＣＨ３?ｉ—－??〇?Ｃｉｒｃｕｌａｒ?ｔｅｍｐｌａｔｅ?嚴(yán)?ｍ?〇??Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ?＾?＾??〇?一?０??圖１．４基于引物（ｐｒｉｍｅｒ）誘導(dǎo)的滾環(huán)擴(kuò)增對(duì)ＤＮＡ腺嘌呤甲基化（Ｄａｍ）甲基轉(zhuǎn)移酶的化??學(xué)發(fā)光檢測實(shí)驗(yàn)［８］。??１．?１．３．?２化學(xué)發(fā)光與等溫指數(shù)擴(kuò)增技術(shù)的聯(lián)用??等溫指數(shù)擴(kuò)增（ＥＸＰＡＲ）能對(duì)短鏈核苷酸進(jìn)行快速擴(kuò)增，其擴(kuò)增效率非常高，??通常在幾分鐘內(nèi)便可擴(kuò)增到１０６－１０９倍１１Ｇ］，因此其被廣泛應(yīng)用于ＤＮＡ、ＲＮＡ以??及蛋白ｔ１


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