目的探討Ghrelin預(yù)處理對(duì)H9C2心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的影響。方法培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞并建立心肌細(xì)胞缺氧（21 h）/復(fù)氧（6 h）模型。細(xì)胞隨機(jī)分成4組:對(duì)照組,缺氧/復(fù)氧組（H/R組）,缺氧/復(fù)氧+Ghrelin組（H/R+G組）,缺氧/復(fù)氧+Ghrelin+生長(zhǎng)激素促分泌素受體（GHSR）-siRNA組（H/R+G+G-siRNA組）;采用siRNA干擾技術(shù)阻斷Ghrelin受體GHSR的表達(dá)以及Hoechst 33258染色劑和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率,Western blot法檢測(cè)各組凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)情況。結(jié)果 GHSR存在于正常H9C2心肌細(xì)胞中,GHSR-siRNA可以顯著抑制H9C2心肌細(xì)胞中GHSR的表達(dá)。與H/R組相比,在H/R+G組中缺氧/復(fù)氧損傷所導(dǎo)致心肌細(xì)胞的凋亡率明顯下降（P<0.05）,B淋巴細(xì)胞瘤-2蛋白/Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bcl-2/Bax）比率明顯上調(diào)（P<0.05）,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（caspase-3）表達(dá)水平被顯著抑制（P<0.05）。而與H/R+G組相比,H/R+G+G-siRNA組心肌細(xì)胞凋... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2015,50(08)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

GHSＲ在H9C2心肌細(xì)胞中的表達(dá)情況(n=8)

組(陰性對(duì)照組)中未見明顯的抑制作用。見圖1。圖1GHSＲ在H9C2心肌細(xì)胞中的表達(dá)情況(n=8)A:空白對(duì)照組;B:scrambledsiＲNA組;C:GHSＲ-siＲNA組2．2Ghrelin預(yù)處理對(duì)H9C2心肌細(xì)胞凋亡的影響由Hoechst33258染色可見，對(duì)照組細(xì)胞核呈彌散均勻暗淡的藍(lán)色熒光;而H/Ｒ組可見典型的凋亡細(xì)胞核表現(xiàn)，即細(xì)胞核固縮、變亮、變圓、呈藍(lán)白色熒光，呈現(xiàn)明顯的凋亡特征;而H/Ｒ+G組凋亡細(xì)胞明顯減少，H/Ｒ+G+G-siＲNA組凋亡細(xì)胞較H/Ｒ+G組增多，見圖2。AnnexinV-FITC/PI檢測(cè)顯示，H/Ｒ組心肌細(xì)胞凋亡率顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，H/Ｒ+G組心肌細(xì)胞凋亡率顯著低于H/Ｒ組(P＜0.05)，而H/Ｒ+G+G-siＲNA組凋亡率明顯高于H/Ｒ+G組(P＜0.05)。見圖3、表1。圖2各處理組心肌細(xì)胞凋亡情況Hoechst33258染色×400(n=5)A:對(duì)照組;B:H/Ｒ組;C:H/Ｒ+G組;D:H/Ｒ+G+G-siＲNA組;凋亡細(xì)胞陽性染色定位于細(xì)胞核，熒光下呈亮藍(lán)白色(如箭頭所示)圖3流式細(xì)胞儀檢測(cè)H9C2心肌細(xì)胞凋亡變化A:對(duì)照組;B:H/Ｒ組;C:H/Ｒ+G組;D:H/Ｒ+G+G-siＲNA組;與對(duì)照組比較:*P＜0.05;與H/Ｒ組比較:#P＜0.05;與H/Ｒ+G組比較:△P＜0.052．3Ghrelin預(yù)處理對(duì)于H9C2心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷后Bcl-2和Bax以及cleavedcaspase-3蛋白表達(dá)的影響H/Ｒ組相對(duì)于對(duì)照組Bcl-2蛋白表達(dá)水平顯著下降，而Bax蛋白水平顯著升高，所以Bcl-2/Bax顯著降低(P＜0.05);而予以Ghrelin預(yù)處理后，Bcl-2蛋白表達(dá)量顯著升高，同時(shí)Bax蛋白表達(dá)量顯著下降，Bcl-2/Bax也相應(yīng)上升(P＜0.05)。與G+H/Ｒ組相比，用siＲNA抑制GHSＲ表達(dá)可以使得H/Ｒ后H9C2心肌細(xì)胞Bcl-2蛋白表達(dá)水平下降而Bax蛋白表達(dá)水平顯著升高，Bcl-2/Bax相應(yīng)降低(P＜0.05)。同樣，在H/Ｒ組中caspase-3蛋白表達(dá)水平相對(duì)于對(duì)照組顯著升高(P＜0.05)，而?

:scrambledsiＲNA組;C:GHSＲ-siＲNA組2．2Ghrelin預(yù)處理對(duì)H9C2心肌細(xì)胞凋亡的影響由Hoechst33258染色可見，對(duì)照組細(xì)胞核呈彌散均勻暗淡的藍(lán)色熒光;而H/Ｒ組可見典型的凋亡細(xì)胞核表現(xiàn)，即細(xì)胞核固縮、變亮、變圓、呈藍(lán)白色熒光，呈現(xiàn)明顯的凋亡特征;而H/Ｒ+G組凋亡細(xì)胞明顯減少，H/Ｒ+G+G-siＲNA組凋亡細(xì)胞較H/Ｒ+G組增多，見圖2。AnnexinV-FITC/PI檢測(cè)顯示，H/Ｒ組心肌細(xì)胞凋亡率顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，H/Ｒ+G組心肌細(xì)胞凋亡率顯著低于H/Ｒ組(P＜0.05)，而H/Ｒ+G+G-siＲNA組凋亡率明顯高于H/Ｒ+G組(P＜0.05)。見圖3、表1。圖2各處理組心肌細(xì)胞凋亡情況Hoechst33258染色×400(n=5)A:對(duì)照組;B:H/Ｒ組;C:H/Ｒ+G組;D:H/Ｒ+G+G-siＲNA組;凋亡細(xì)胞陽性染色定位于細(xì)胞核，熒光下呈亮藍(lán)白色(如箭頭所示)圖3流式細(xì)胞儀檢測(cè)H9C2心肌細(xì)胞凋亡變化A:對(duì)照組;B:H/Ｒ組;C:H/Ｒ+G組;D:H/Ｒ+G+G-siＲNA組;與對(duì)照組比較:*P＜0.05;與H/Ｒ組比較:#P＜0.05;與H/Ｒ+G組比較:△P＜0.052．3Ghrelin預(yù)處理對(duì)于H9C2心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷后Bcl-2和Bax以及cleavedcaspase-3蛋白表達(dá)的影響H/Ｒ組相對(duì)于對(duì)照組Bcl-2蛋白表達(dá)水平顯著下降，而Bax蛋白水平顯著升高，所以Bcl-2/Bax顯著降低(P＜0.05);而予以Ghrelin預(yù)處理后，Bcl-2蛋白表達(dá)量顯著升高，同時(shí)Bax蛋白表達(dá)量顯著下降，Bcl-2/Bax也相應(yīng)上升(P＜0.05)。與G+H/Ｒ組相比，用siＲNA抑制GHSＲ表達(dá)可以使得H/Ｒ后H9C2心肌細(xì)胞Bcl-2蛋白表達(dá)水平下降而Bax蛋白表達(dá)水平顯著升高，Bcl-2/Bax相應(yīng)降低(P＜0.05)。同樣，在H/Ｒ組中caspase-3蛋白表達(dá)水平相對(duì)于對(duì)照組顯著升高(P＜0.05)，而這種升高在H/Ｒ+G組中被顯著抑制(P＜0.05)，然而在H/Ｒ+G+G-siＲNA組中caspase-3蛋白表達(dá)量升高(P＜0.


本文編號(hào)：3336686