MAGE-D1（NRAGE）,MAGE-G1和NECDIN是MAGEⅡ家族的成員。MAGE-G1以及NECDIN蛋白與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育有關(guān),在小鼠中缺失后導(dǎo)致生長發(fā)育遲緩,性腺發(fā)育不良,表現(xiàn)為Prader-Willi綜合征（PWS）。相關(guān)研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn),NRAGE可以抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移,NRAGE和P75NTR結(jié)合可調(diào)控依賴于神經(jīng)元生長因子的凋亡。在小鼠實(shí)驗(yàn)中NRAGE的缺失會(huì)導(dǎo)致一系列表型發(fā)生變化,比如肥胖,生殖能力下降,小鼠壽命縮短等。在研究NRAGE敲除小鼠表型的過程中,通過超聲心動(dòng),我們發(fā)現(xiàn)NRAGE敲除小鼠的肺動(dòng)脈壓明顯高于野生小鼠,并且遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出正常水平,而通過尾動(dòng)脈介入法測(cè)量小鼠主動(dòng)脈血壓發(fā)現(xiàn)敲除小鼠主動(dòng)脈血壓也明顯高于野生小鼠。通過組織切片發(fā)現(xiàn),NRAGE敲除小鼠肺動(dòng)脈血管壁和主動(dòng)脈血管壁增厚。肺動(dòng)脈高壓是指靜息時(shí)肺動(dòng)脈平均壓>25mmHg或運(yùn)動(dòng)時(shí)>30mmHg,是一種極其嚴(yán)重的疾病,由于肺血管重塑,肺動(dòng)脈血管壁增厚引起肺循環(huán)血流動(dòng)力學(xué)改變而導(dǎo)致右心衰竭,主要的癥狀包括:呼吸困難、乏力、腹脹、心絞痛、暈厥。按臨床分類,肺動(dòng)脈高壓可分為特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓、遺傳性肺動(dòng)脈高... 

【文章來源】：南京師范大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠主動(dòng)脈收縮壓和肺動(dòng)脈壓的測(cè)量

Ｈ＆Ｅ染色不能確定增厚的是小鼠的肺動(dòng)脈平滑肌，于是我們通過動(dòng)脈平滑肌細(xì)??胞特異蛋白ａ－ａｃｔｉｎ來檢測(cè)是否為肺動(dòng)脈壁增厚。８?jìng)�(gè)月大的小鼠肺組織進(jìn)行石??蠟切片后，我們用抗體ａ?－ａｃｔｉｎ做ＩＨＣ分析，圖２Ｂ說明ＫＯ型小鼠的肺動(dòng)脈確??實(shí)是增厚了。??圖２組織病理學(xué)和免疫組織化學(xué)分析小鼠肺動(dòng)脈（２０Ｘ）。Ａ：?Ｈ＆Ｅ染色表明８?jìng)�(gè)月大的年??老ＫＯ型小鼠肺動(dòng)脈壁增生變厚。Ｂ：?ａ?－ａｃｔｉｎ免疫組織化學(xué)分析表明增生的確實(shí)為小鼠肺??動(dòng)脈壁。??２．?３．?２．?３．?本節(jié)小結(jié)??通過小鼠組織形態(tài)學(xué)分析來檢測(cè)小鼠肺動(dòng)脈壁是否增厚，Ｈ＆Ｅ染色表明８??個(gè)月大的Ｋ０型小鼠肺動(dòng)脈壁增厚，和超聲心動(dòng)得出的結(jié)論一致；為了更好的確??定８?jìng)�(gè)月大的Ｋ０型小鼠肺動(dòng)脈壁增厚，我們用免疫組織化學(xué)法分析了小鼠肺動(dòng)??脈壁的情況，結(jié)果和Ｈ＆Ｅ染色的方法是一致的。這些結(jié)果證實(shí)了在小鼠肺組織??中，由于ＮＲＡＧＥ的缺失導(dǎo)致小鼠肺動(dòng)脈血管壁變厚，最終導(dǎo)致肺動(dòng)脈高壓。??２．３．３．干擾ＮＲＡＧＥ促進(jìn)ＶＳＭＣ細(xì)胞增殖??２．?３．３．１．檢測(cè)ＮＲＡＧＥ的干擾水平??２２??

肌細(xì)胞從而干擾ＮＲＡＧＥ。我們?cè)O(shè)置了不同的梯度１０ｕＬ、２０ｕＬ、３０ｕＬ并在實(shí)驗(yàn)??中發(fā)現(xiàn)隨著病毒使用滴度的增高，ＶＳＭＣ細(xì)胞的狀態(tài)會(huì)發(fā)生改變。為了既能保證??干擾效率，又能不影響細(xì)胞狀態(tài)，最后確定加入２０ｕＬ的病毒是最合適的。圖３Ａ??顯示了隨著病毒滴度的逐漸增加，ＮＲＡＧＥ蛋白的表達(dá)逐漸減少，２０ｕＬ的病毒己??經(jīng)能夠達(dá)到實(shí)驗(yàn)所需的結(jié)果了。??２．?３．?３．?２．?ＭＴＴ檢測(cè)ＶＳＭＧ細(xì)胞的增殖??ＮＲＡＧＥ敲除之后是否能夠促進(jìn)平滑肌細(xì)胞的增殖？為此用ＭＴＴ法分析檢??測(cè)ＶＳＭＣ的細(xì)胞活力。加入相同病毒滴度并帶ＥＧＦＰ標(biāo)簽的空載腺病毒作為對(duì)??照組，繼續(xù)用腺病毒干擾ＶＳＭＣ細(xì)胞，同時(shí)設(shè)置幾個(gè)時(shí)間段Ｏｈ，?２４ｈ，?４８ｈ，９６ｈ，??從而了解感染不同時(shí)間細(xì)胞增殖的水平。圖３Ｂ顯示，在感染２４ｈ后，干擾組細(xì)??胞增殖率開始增加，但是和對(duì)照組并沒有顯著性差異；隨著感染時(shí)間的延長，感??染組的增殖率也在上升，干擾４８ｈ后，感染組增殖率明顯大于對(duì)照組，Ｐ＝０．０２，??有顯著性差異；在干擾７２ｈ后，干擾組的增殖率依然是大于對(duì)照組的，Ｐ＝０．０１４，??有顯著性差異；但是干擾９６ｈ后，對(duì)照組的增殖率反而大于干擾組了，但是沒有??顯著性差異。我們覺得可能是因?yàn)橐环矫骐S著感染時(shí)間至９６ｈ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]歐洲心臟病協(xié)會(huì)2004年肺動(dòng)脈高壓診斷和治療指南簡介[J]. 王秋芬,廖玉華.  臨床心血管病雜志. 2005(07)



本文編號(hào)：3336586