MAGE-D1（NRAGE）,MAGE-G1和NECDIN是MAGEⅡ家族的成員。MAGE-G1以及NECDIN蛋白與神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育有關(guān),在小鼠中缺失后導致生長發(fā)育遲緩,性腺發(fā)育不良,表現(xiàn)為Prader-Willi綜合征（PWS）。相關(guān)研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn),NRAGE可以抑制腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移,NRAGE和P75NTR結(jié)合可調(diào)控依賴于神經(jīng)元生長因子的凋亡。在小鼠實驗中NRAGE的缺失會導致一系列表型發(fā)生變化,比如肥胖,生殖能力下降,小鼠壽命縮短等。在研究NRAGE敲除小鼠表型的過程中,通過超聲心動,我們發(fā)現(xiàn)NRAGE敲除小鼠的肺動脈壓明顯高于野生小鼠,并且遠遠超出正常水平,而通過尾動脈介入法測量小鼠主動脈血壓發(fā)現(xiàn)敲除小鼠主動脈血壓也明顯高于野生小鼠。通過組織切片發(fā)現(xiàn),NRAGE敲除小鼠肺動脈血管壁和主動脈血管壁增厚。肺動脈高壓是指靜息時肺動脈平均壓>25mmHg或運動時>30mmHg,是一種極其嚴重的疾病,由于肺血管重塑,肺動脈血管壁增厚引起肺循環(huán)血流動力學改變而導致右心衰竭,主要的癥狀包括:呼吸困難、乏力、腹脹、心絞痛、暈厥。按臨床分類,肺動脈高壓可分為特發(fā)性肺動脈高壓、遺傳性肺動脈高... 

【文章來源】：南京師范大學江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠主動脈收縮壓和肺動脈壓的測量

Ｈ＆Ｅ染色不能確定增厚的是小鼠的肺動脈平滑肌，于是我們通過動脈平滑肌細??胞特異蛋白ａ－ａｃｔｉｎ來檢測是否為肺動脈壁增厚。８個月大的小鼠肺組織進行石??蠟切片后，我們用抗體ａ?－ａｃｔｉｎ做ＩＨＣ分析，圖２Ｂ說明ＫＯ型小鼠的肺動脈確??實是增厚了。??圖２組織病理學和免疫組織化學分析小鼠肺動脈（２０Ｘ）。Ａ：?Ｈ＆Ｅ染色表明８個月大的年??老ＫＯ型小鼠肺動脈壁增生變厚。Ｂ：?ａ?－ａｃｔｉｎ免疫組織化學分析表明增生的確實為小鼠肺??動脈壁。??２．?３．?２．?３．?本節(jié)小結(jié)??通過小鼠組織形態(tài)學分析來檢測小鼠肺動脈壁是否增厚，Ｈ＆Ｅ染色表明８??個月大的Ｋ０型小鼠肺動脈壁增厚，和超聲心動得出的結(jié)論一致；為了更好的確??定８個月大的Ｋ０型小鼠肺動脈壁增厚，我們用免疫組織化學法分析了小鼠肺動??脈壁的情況，結(jié)果和Ｈ＆Ｅ染色的方法是一致的。這些結(jié)果證實了在小鼠肺組織??中，由于ＮＲＡＧＥ的缺失導致小鼠肺動脈血管壁變厚，最終導致肺動脈高壓。??２．３．３．干擾ＮＲＡＧＥ促進ＶＳＭＣ細胞增殖??２．?３．３．１．檢測ＮＲＡＧＥ的干擾水平??２２??

肌細胞從而干擾ＮＲＡＧＥ。我們設(shè)置了不同的梯度１０ｕＬ、２０ｕＬ、３０ｕＬ并在實驗??中發(fā)現(xiàn)隨著病毒使用滴度的增高，ＶＳＭＣ細胞的狀態(tài)會發(fā)生改變。為了既能保證??干擾效率，又能不影響細胞狀態(tài)，最后確定加入２０ｕＬ的病毒是最合適的。圖３Ａ??顯示了隨著病毒滴度的逐漸增加，ＮＲＡＧＥ蛋白的表達逐漸減少，２０ｕＬ的病毒己??經(jīng)能夠達到實驗所需的結(jié)果了。??２．?３．?３．?２．?ＭＴＴ檢測ＶＳＭＧ細胞的增殖??ＮＲＡＧＥ敲除之后是否能夠促進平滑肌細胞的增殖？為此用ＭＴＴ法分析檢??測ＶＳＭＣ的細胞活力。加入相同病毒滴度并帶ＥＧＦＰ標簽的空載腺病毒作為對??照組，繼續(xù)用腺病毒干擾ＶＳＭＣ細胞，同時設(shè)置幾個時間段Ｏｈ，?２４ｈ，?４８ｈ，９６ｈ，??從而了解感染不同時間細胞增殖的水平。圖３Ｂ顯示，在感染２４ｈ后，干擾組細??胞增殖率開始增加，但是和對照組并沒有顯著性差異；隨著感染時間的延長，感??染組的增殖率也在上升，干擾４８ｈ后，感染組增殖率明顯大于對照組，Ｐ＝０．０２，??有顯著性差異；在干擾７２ｈ后，干擾組的增殖率依然是大于對照組的，Ｐ＝０．０１４，??有顯著性差異；但是干擾９６ｈ后，對照組的增殖率反而大于干擾組了，但是沒有??顯著性差異。我們覺得可能是因為一方面隨著感染時間至９６ｈ

【參考文獻】：
期刊論文
[1]歐洲心臟病協(xié)會2004年肺動脈高壓診斷和治療指南簡介[J]. 王秋芬,廖玉華.  臨床心血管病雜志. 2005(07)



本文編號：3336586