發(fā)布時間：2021-08-10 15:02

　　動脈粥樣硬化（atherosclerosis,AS）是一種主要累及大、中動脈的慢性炎癥性疾病,以大量脂質(zhì)堆積在內(nèi)膜下為特征。滲透到內(nèi)膜下的巨噬細(xì)胞吞噬脂質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽?xì)胞后其運動能力顯著降低,進(jìn)而囤積在內(nèi)膜下導(dǎo)致粥樣斑塊和脂質(zhì)壞死核心形成。蛋白質(zhì)的糖基化修飾對蛋白的折疊、穩(wěn)定和功能具有重要影響。那么泡沫細(xì)胞運動能力減弱導(dǎo)致其滯留斑塊內(nèi)是否與關(guān)鍵蛋白糖基化修飾水平改變存在關(guān)聯(lián)?本文利用溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）誘導(dǎo)Raw264.7巨噬細(xì)胞和小鼠原代腹膜巨噬細(xì)胞形成泡沫細(xì)胞為模型,觀察泡沫細(xì)胞運動能力的改變。進(jìn)一步通過流式細(xì)胞術(shù)、免疫熒光和WB等技術(shù)檢測泡沫細(xì)胞形成前后蛋白糖基化修飾水平和糖基轉(zhuǎn)移酶的變化;通過雙熒光素酶報告實驗、EMSA和Chip等實驗探討糖基轉(zhuǎn)移酶改變的的分子調(diào)控機制。研究結(jié)果顯示:（1）200μM的LPA作用24 h能夠促進(jìn)巨噬源性泡沫細(xì)胞的形成;（2）巨噬源性泡沫細(xì)胞運動能力的下降與巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶8（fucosyltransferase 8,Fut8）表達(dá)量的下降呈正相關(guān);（3）動物實驗結(jié)果顯示動脈粥樣硬化斑塊的消退過程伴隨著斑塊... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：107 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

LPA對Raw264.7巨噬細(xì)胞存活率的影響（*p<0.05）

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文vitality (*p＜0.05). A: Effects of different concentrations of LPA on cell vitality; B: Effects ofdifferent time of LPA on cell vitality.2.2 LPA 對 Raw264.7 巨噬細(xì)胞內(nèi)脂滴含量的影響油紅 O 屬于偶氮染料，是很強的脂溶劑和染脂劑，能與甘油三酯結(jié)合呈小脂滴狀[24]。為了探討 LPA 能否促進(jìn) Raw264.7 巨噬細(xì)胞向泡沫細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，我們利用油紅 O 染色實驗檢測細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)囤積情況。油紅 O 染色結(jié)果顯示 LPA 作用Raw264.7 巨噬細(xì)胞 24 h 后，隨著給藥濃度的增加細(xì)胞內(nèi)脂滴明顯增多 （圖 2A）。200 μM 的 LPA 處理時，隨著給藥時間的延長，細(xì)胞內(nèi)脂滴含量越來越多（圖 2B）。

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文主要組分。細(xì)胞內(nèi)膽固醇過度聚集與動脈粥樣硬化泡沫細(xì)胞形成密切相關(guān)[25]。因此我們檢測了 LPA 處理后，Raw264.7 巨噬細(xì)胞內(nèi)的膽固醇酯比例。結(jié)果顯示 LPA作用 Raw264.7 巨噬細(xì)胞 24 h后，濃度為 100 μM 時細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯比例開始大于50%（圖 3A）。200 μM 的 LPA 處理時，隨著給藥時間的延長，24 h 細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯比例大于 50%（圖 3B）。根據(jù)以上結(jié)果證實 200 μM 的 LPA 作用 24 h 顯著促進(jìn)了 Raw264.7 巨噬細(xì)胞向泡沫細(xì)胞轉(zhuǎn)化。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]瑞舒伐他汀減輕ApoE-/-小鼠動脈硬化形成與ST6Gal-Ⅰ表達(dá)相關(guān)性研究[J]. 劉燕,張軍,蒲強紅,鄧瀟,于超.  中國藥理學(xué)通報. 2016(04)



本文編號：3334279