目的:1、建立高糖誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）損傷模型,并用不同濃度的西格列汀對其進行干預(yù),觀察西格列汀對其自噬水平的影響;2、探討西格列汀調(diào)控自噬與AMPK/mTOR信號通路之間的關(guān)系。材料與方法:將復(fù)蘇后的HUVEC用完全培養(yǎng)基接種于細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,并在37℃、5%CO₂的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),選取對數(shù)增長期的HUVEC為實驗研究對象。1、不同劑量西格列汀對高糖誘導(dǎo)下HUVEC自噬的影響:實驗分成以下6組:A組:正常對照組（5.5mmol/L）,B組:甘露醇組（25 mmol/L）,C組:高糖組（30 mmol/L）,D組:高糖+西格列汀0.1μmol/L組,E組:高糖+西格列汀1μmol/L組,F組:高糖+西格列汀10μmol/L組。觀察指標(biāo):⑴細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變;⑵硝酸還原酶法測定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的NO含量;⑶Western Blot檢測各組AMPK、p-AMPK、p70S6K、p-p70S6K、LC3-II、p62蛋白的表達(dá);2、探討AMPK/mTOR信號通路在西格列汀誘導(dǎo)HUVEC自... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

六組HUVEC細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變（200X）

而 B 組與 A 組比較，NO 含量無明顯差異。根據(jù) C 組細(xì)胞形態(tài)學(xué)及 NO 含量的改變提示高糖誘導(dǎo) HUVEC 損傷模型建立。圖3.2 六組HUVEC一氧化氮（NO）含量比較（ x±s，n=3）注：A group：正常對照組，B group:甘露醇組，C group：高糖組，D group：高糖+西格列汀0.1μmol/L組，E group：高糖+西格列汀1μmol/L組，F(xiàn) group：高糖+西格列汀10μmol/L。a：與A組比較，P＜0.05；c：與C組比較

p-AMPK 64kDβ-actin 42kD圖3.3 六組HUVEC的AMPK、p-AMPK、p70S6K、p-p70S6K及自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)注：A group：正常對照組，B group:甘露醇組，C group：高糖組，D group：高糖+西格列汀0.1μmol/L組，E group：高糖+西格列汀1μmol/L組，F(xiàn) group：高糖+西格列汀10μmol/L。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]西格列汀對AGEs作用下系膜細(xì)胞自噬的影響[J]. 江穎娟,蔣作鋒,吳小蘭,黃珮,吳文法,余慧文.  中國病理生理雜志. 2017(08)
[2]自噬對糖尿病慢性并發(fā)癥的影響[J]. 屈嶺,梁曉春.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2013(05)
[3]AMPK與心血管疾病關(guān)系研究進展[J]. 劉宇坦,劉怡希,李為民.  國際心血管病雜志. 2013(02)

博士論文
[1]DPP4抑制劑西格列汀對動脈粥樣硬化的影響及其機制探討[D]. 曾艷梅.南方醫(yī)科大學(xué) 2014

碩士論文
[1]西格列汀對糖尿病大鼠大血管病變自噬水平的影響及其機制研究[D]. 李玫.南華大學(xué) 2018
[2]黃癸固體分散體調(diào)節(jié)AMPK通路對糖尿病視網(wǎng)膜病變的保護作用研究[D]. 閻鑫.吉林大學(xué) 2017
[3]DPP4抑制劑對內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用及機制研究[D]. 吳超.第三軍醫(yī)大學(xué) 2016
[4]二甲雙胍聯(lián)合Bevacizumab對大鼠糖尿病視網(wǎng)膜病變的作用及其對VEGF和pAMPK表達(dá)的影響[D]. 于洋.遼寧醫(yī)學(xué)院 2015
[5]α-硫辛酸對糖尿病大鼠糖脂代謝、氧化應(yīng)激水平以及AMPK活性的影響[D]. 李艷英.山東大學(xué) 2010



本文編號：3318046