研究背景:急性心肌梗死再灌注治療后發(fā)生心功能不全最主要的病理生理基礎(chǔ)是缺血再灌注損傷（Ischemia/reperfusion,I/R）過程中造成了心肌細(xì)胞的凋亡和壞死。心臟干細(xì)胞（Cardiac stem cells,CSCs）作為一種理想的種子干細(xì)胞可顯著修復(fù)梗死心肌、改善心肌重構(gòu)和心功能。目前的研究認(rèn)為,CSC移植治療缺血性心肌病心功能的改善主要獲益于細(xì)胞的旁分泌機(jī)制,而外泌體（Exosomes）是干細(xì)胞旁分泌效應(yīng)中發(fā)揮主要作用的因子。與CSC相比,作為非細(xì)胞成分的CSC源Exosomes性能穩(wěn)定,不易受移植后缺血微環(huán)境的影響,可避免干細(xì)胞移植時(shí)畸胎瘤的形成、免疫反應(yīng)、細(xì)胞增殖分化有限等問題,同時(shí)還提供了生長因子等細(xì)胞保護(hù)因子,能夠抗凋亡、抗纖維化,促進(jìn)血管生成,增強(qiáng)心肌分化,修復(fù)受損組織。已有研究顯示,缺氧預(yù)處理（Hypoxic preconditioning,HPC）能提高干細(xì)胞修復(fù)能力,同時(shí)也增強(qiáng)了干細(xì)胞源Exosomes心肌保護(hù)作用。既往有關(guān)心肌I/R發(fā)病機(jī)制的研究大多是集中在氧自由基、鈣超載、炎癥反應(yīng)、線粒體損傷、細(xì)胞凋亡、內(nèi)皮細(xì)胞活化和損傷以及自噬等方面,其中自噬被認(rèn)... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：127 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

原代CSCs培養(yǎng)注：A：培養(yǎng)第3天；B：原代細(xì)胞培養(yǎng)第5天；C：培養(yǎng)第7-8天；D：原代細(xì)胞培養(yǎng)第10天，細(xì)胞分布

圖 2：MACS 獲取 c-kit+CSCsS 后即刻（×200 倍，標(biāo)尺=50μm）；B：MACS 后培養(yǎng) 1 天（×200 倍，標(biāo)尺=5 倍，標(biāo)尺=100μm）；D：MACS 后培養(yǎng)第 5 天（×100 倍，標(biāo)尺=100μm）。 c-kit+CSCs 鑒定細(xì)胞術(shù)（FCM）鑒定 CSCs 干細(xì)胞表面標(biāo)記抗原的表達(dá)測 MACS 前后 CSCs 干細(xì)胞表面標(biāo)記物抗原分子 CD34、表達(dá)（圖 3）。結(jié)果顯示，MACS 前后 CD34 以及 CD45.05），表明獲取的 CSCs 為非骨髓源性。但 MACS 前 c-kit±0.10 而 MACS 后 CSCs 干細(xì)胞標(biāo)記物分子 c-kit 表達(dá)量4（5P<0.05），表明通過膠原酶消化法結(jié)合 MACS 可成功獲取

圖 2：MACS 獲取 c-kit+CSCs注：A：MACS 后即刻（×200 倍，標(biāo)尺=50μm）；B：MACS 后培養(yǎng) 1 天（×200 倍，標(biāo)尺=50μm）；C：培養(yǎng)第 3 天（×100 倍，標(biāo)尺=100μm）；D：MACS 后培養(yǎng)第 5 天（×100 倍，標(biāo)尺=100μm）。2.2 大鼠 c-kit+CSCs 鑒定2.2.1 流式細(xì)胞術(shù)（FCM）鑒定 CSCs 干細(xì)胞表面標(biāo)記抗原的表達(dá)FCM 檢測 MACS 前后 CSCs 干細(xì)胞表面標(biāo)記物抗原分子 CD34、CD45 以及c-kit 分子的表達(dá)（圖 3）。結(jié)果顯示，MACS 前后 CD34 以及 CD45 表達(dá)無顯著差異（P>0.05），表明獲取的 CSCs 為非骨髓源性。但 MACS 前 c-kit 分子的表達(dá)量為 3.52%±0.10 而 MACS 后 CSCs 干細(xì)胞標(biāo)記物分子 c-kit 表達(dá)量顯著增高達(dá)88.83%±3.4（5P<0.05），表明通過膠原酶消化法結(jié)合 MACS 可成功獲取 c-kit+CSCs。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)方法的比較[J]. 謝茂松,徐國興,李瓊,肖紫云.  國際眼科雜志. 2007(05)



本文編號：3310134