背景心力衰竭是多種心臟疾病發(fā)展的嚴重階段,是心血管疾病患者的首要死亡原因。我們課題組的前期研究發(fā)現(xiàn),TIR/BB環(huán)擬似物AS-1可以通過抑制IL-1R介導的My D88信號通路改善壓力過負荷誘導的心肌肥大。雖然壓力過負荷誘導的心肌肥大、心肌纖維化以及心力衰竭是一系列連續(xù)的病理生理學過程,但是,疾病的不同階段,參與調(diào)控的信號通路不完全相同。因此,AS-1是否對壓力過負荷誘導病理性心肌肥大的嚴重階段――心力衰竭具有保護作用,是否在心臟已經(jīng)發(fā)生代償性心肌肥大之后還可影響疾病進程,對疾病具有一定的治療作用,目前尚無文獻報道。并且AS-1調(diào)控壓力過負荷誘導的心力衰竭的具體分子機制也有待闡明。目的1.明確AS-1是否對壓力過負荷誘導的心力衰竭具有預防及治療作用。2.闡明AS-1是否對機械過度牽張誘導的心肌成纖維細胞活化及其旁分泌具有一定的調(diào)控作用。3.闡釋AS-1對機械過度牽張誘導心肌成纖維細胞活化及其旁分泌作用的分子調(diào)控機制。方法1.動物在體實驗通過主動脈弓縮窄術模擬左心室壓力過負荷增加復制小鼠心力衰竭模型,并給予AS-1干預（腹腔注射,劑量為50mg/kg/d）。為闡明AS-1對壓力過負荷誘導... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：141 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 AS-1 對壓力過負荷導致的心室重塑及心力衰竭的影響
    引言
    材料與方法
        1.實驗材料
            1.1 實驗動物
            1.2 實驗儀器
            1.3 實驗材料
            1.4 主要試劑配制
        2.實驗方法
            2.1 動物模型復制及實驗分組
            2.2 TAC模型建立成功的評價
            2.3 超聲心動圖檢測小鼠心臟結(jié)構(gòu)及功能
            2.4 標本收集與處理
            2.5 心肌組織Masson染色
            2.6 心肌組織羥脯氨酸測定
            2.7 心肌組織交聯(lián)膠原檢測（限制性胃蛋白酶降解試驗）
            2.8 實時定量PCR
            2.9 蛋白表達檢測
        3.數(shù)據(jù)統(tǒng)計
    實驗結(jié)果
        1.AS-1 對壓力過負荷誘導的心室重塑及心力衰竭具有預防作用
            1.1 超聲多普勒對小鼠主動脈弓縮窄程度的評價
            1.2 AS-1 可以延緩壓力過負荷誘導的心肌肥大
            1.3 AS-1 可以減輕壓力過負荷誘導的心肌纖維化
            1.4 AS-1 可以改善壓力過負荷誘導的心功能衰竭
        2.AS-1 對壓力過負荷誘導的心力衰竭具有治療作用
            2.1 AS-1 可以延緩壓力過負荷誘導的向心性心肌肥大向離心性心肌肥大及心力衰竭的發(fā)展
            2.2 AS-1 可以抑制壓力過負荷誘導的心肌肥大發(fā)展為心肌纖維化
    分析與討論
第二部分 AS-1 對機械過度牽張誘導心肌成纖維細胞活化及其旁分泌作用的影響
    引言
    材料與方法
        1.實驗材料
            1.1 實驗動物
            1.2 實驗儀器
            1.3 實驗試劑
            1.4 主要試劑配制
        2.實驗方法
            2.1 新生大鼠心肌成纖維細胞培養(yǎng)
            2.2 機械壓力刺激心肌成纖維細胞
            2.3 心肌細胞條件培養(yǎng)基的制備
            2.4 細胞免疫熒光
            2.5 EDU檢測成纖維細胞增殖
            2.6 Tunel染色檢測心肌細胞凋亡
            2.7 ELISA檢測
            2.8 實時定量PCR
            2.9 蛋白表達檢測
        3.數(shù)據(jù)統(tǒng)計
    實驗結(jié)果
        1. AS-1 對機械過度牽張誘導的心肌成纖維細胞活化的調(diào)控作用
            1.1 AS-1 可抑制機械過度牽張誘導的心肌成纖維細胞增殖
            1.2 AS-1 可抑制機械過度牽張誘導的心肌成纖維細胞分化
            1.3 AS-1 可降低機械過度牽張誘導心肌成纖維細胞膠原合成增加
        2.機械過度牽張誘導活化的心肌成纖維細胞對心肌細胞的旁分泌調(diào)控作用
        3.AS-1 抑制機械過度牽張所致的心肌成纖維細胞旁分泌作用
            3.1 AS-1 可抑制機械過度牽張心肌成纖維細胞分泌旁分泌因子
            3.2 AS-1 可改善機械過度牽張誘導活化的心肌成纖維細胞旁分泌所致的心肌細胞肥大及凋亡
    分析與討論
第三部分 AS-1 對機械過度牽張誘導心肌成纖維細胞活化及其旁分泌作用的調(diào)控機制
    引言
    材料與方法
        1.實驗材料
        2.實驗方法
            2.1 小干擾RNA合成
            2.2 小干擾RNA轉(zhuǎn)染
            2.3 新生大鼠心肌成纖維細胞培養(yǎng)
            2.4 機械壓力刺激心肌成纖維細胞
            2.5 心肌細胞條件培養(yǎng)基的制備
            2.6 細胞免疫熒光
            2.7 EDU檢測成纖維細胞增殖
            2.8 Tunel染色檢測心肌細胞凋亡
            2.9 實時定量PCR
            2.10 蛋白表達檢測
        3.數(shù)據(jù)統(tǒng)計
    實驗結(jié)果
        1.AS-1 可上調(diào)壓力過負荷誘導的心肌組織中LATS1表達的下降
        2.AS-1 可上調(diào)機械過度牽張誘導的心肌成纖維細胞中LATS1表達的下降
        3.AS-1 可抑制機械過度牽張誘導的心肌成纖維細胞中YAP表達的增加
        4.AS-1 通過LATS1調(diào)控機械過度牽張誘導的心肌成纖維細胞活化
            4.1 心肌成纖維細胞轉(zhuǎn)染siLATS1可有效敲低細胞中LATS1的表達
            4.2 AS-1 通過LATS1調(diào)控機械過度牽張誘導的心肌成纖維細胞的增殖
            4.3 AS-1 通過LATS1調(diào)控機械過度牽張誘導的心肌成纖維細胞的分化
            4.4 AS-1 通過LATS1下調(diào)機械過度牽張誘導的心肌成纖維細胞膠原合成增加
        5.干擾心肌細胞LATS1表達可降低AS-1 對機械過度牽張誘導心肌成纖維細胞旁分泌所致的心肌細胞肥大的保護作用
        6.干擾心肌細胞LATS1表達對AS-1 在機械過度牽張誘導心肌成纖維細胞旁分泌所致的心肌細胞凋亡中的作用無明顯影響
    分析與討論
小結(jié)
參考文獻
綜述
    References
附錄
攻讀學位期間發(fā)表研究論文及科研工作情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]小鼠主動脈弓不同程度縮窄模型的評價與比較[J]. 高云,宋娟,闕玲琍,李躍華.  南京醫(yī)科大學學報(自然科學版). 2014(08)



本文編號：3294308