目的血管平滑肌細(xì)胞的異常增殖、遷移和表型轉(zhuǎn)換是動脈粥樣硬化的主要發(fā)病基礎(chǔ),研究其分子機(jī)制可以揭示動脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制,發(fā)現(xiàn)新的治療靶點(diǎn)。在血管受到損傷過程中,血管平滑肌細(xì)胞（Vascular smooth muscle cell,VSMC）從收縮表型轉(zhuǎn)變?yōu)楹铣杀硇?VSMC的過度增殖和遷移,導(dǎo)致新生內(nèi)膜的形成。ARC（Apoptosis repressor with caspase recruitment domain）是一種內(nèi)源性凋亡抑制蛋白,在心肌細(xì)胞中表達(dá)較高,發(fā)揮心肌保護(hù)作用。ARC是否在VSMC中發(fā)揮作用、參與動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展尚不清楚。本課題將研究ARC在VSMC中的表達(dá)水平,是否參與VSMC增殖、遷移及表型轉(zhuǎn)換,并揭示其下游調(diào)控機(jī)制。方法分別采用Western blot和實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測ARC、YAP（Yes associated protein）和14-3-3ε的蛋白水平和mRNA水平;利用免疫組化檢測ARC在人正常血管組織和動脈粥樣硬化患者血管組織中的表達(dá)差異。采用CCK-8（Cell Counting Kit-8）和EdU實(shí)驗(yàn)分析VSMC的增殖情況,Tr... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

動脈粥樣硬化的形成過程[6]

結(jié)果17圖1ARC在VSMC中表達(dá)且在血管損傷后表達(dá)上調(diào)（A，B）通過Westernblot和qRT-PCR檢測小鼠心臟、主動脈、腎臟、骨骼肌和肝臟中的ARC蛋白水平（A）和mRNA（B）水平；（C）通過Westernblot檢測H9c2、VSMC、HAEC和HUVEC中的ARC蛋白水平；（D）免疫組織化學(xué)檢測ARC在動脈粥樣硬化病人斑塊與健康組中表達(dá)變化；Bar=20μm；AS：動脈粥樣硬化斑塊；右側(cè)的柱形圖統(tǒng)計(jì)了ARC的相對蛋白質(zhì)水平；（E，F(xiàn)）通過Westernblot和qRT-PCR檢測人的動脈粥樣硬化斑塊組織中的ARC蛋白水平（E）和mRNA水平（F），其中有8個動脈粥樣硬化斑塊組和6個對照組；（G，H）通過Westernblot和qRT-PCR檢測大鼠頸動脈球囊損傷模型中的ARC蛋白水平（G）和ARCmRNA水平（H）；（I，J）通過Westernblot和qRT-PCR檢測動脈粥樣硬化小鼠主動脈組織中中的（I）ARC蛋白水平和（J）mRNA水平。數(shù)據(jù)顯示為Mean±SEM（n=3）；*p<0.052ARC促進(jìn)VSMC的增殖和遷移VSMC的增殖和遷移在新內(nèi)膜形成和發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用。最近的研究表明，敲除ARC的小鼠降低了肺動脈高壓，同時(shí)降低了PASMC的增殖[22]。為了檢測ARC是否參與VSMC的增殖和遷移，我們首先使用ARCsiRNA腺病毒抑制VSMC中內(nèi)源性ARC的表達(dá)。從圖2A可以看出，VSMC感染ARCsiRNA腺病毒24小時(shí)后，內(nèi)源性ARC的表達(dá)水平顯著降低。與對照組相比，內(nèi)源性的ARC被抑制后，EdU和CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示VSMC的增殖能力減弱（圖2B和C）。Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明內(nèi)源性ARC被抑制后會減弱VSMC的遷移（圖2D）。隨后，我們通過用過表達(dá)ARC的腺病毒轉(zhuǎn)染VSMC細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)腺病毒可以有效地在VSMC中過表達(dá)ARC

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文18（圖2E）。而且，ARC的過表達(dá)會促進(jìn)VSMC的增殖（圖2F和G）和遷移（圖2H）。以上結(jié)果表明ARC在VSMC中發(fā)揮促進(jìn)VSMC的增殖和遷移的功能。圖2ARC促進(jìn)VSMC的增殖和遷移（A）通過Westernblot檢測ARC-siRNA腺病毒轉(zhuǎn)染VSMC24h后ARC的蛋白水平；（B）通過CCK-8檢測在0、12、24、36和48h轉(zhuǎn)染ARC-siRNA腺病毒的VSMC的增殖情況；（C）


本文編號：3285908