目的血管平滑肌細胞的異常增殖、遷移和表型轉換是動脈粥樣硬化的主要發(fā)病基礎,研究其分子機制可以揭示動脈粥樣硬化發(fā)病機制,發(fā)現新的治療靶點。在血管受到損傷過程中,血管平滑肌細胞（Vascular smooth muscle cell,VSMC）從收縮表型轉變?yōu)楹铣杀硇?VSMC的過度增殖和遷移,導致新生內膜的形成。ARC（Apoptosis repressor with caspase recruitment domain）是一種內源性凋亡抑制蛋白,在心肌細胞中表達較高,發(fā)揮心肌保護作用。ARC是否在VSMC中發(fā)揮作用、參與動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展尚不清楚。本課題將研究ARC在VSMC中的表達水平,是否參與VSMC增殖、遷移及表型轉換,并揭示其下游調控機制。方法分別采用Western blot和實時熒光定量PCR檢測ARC、YAP（Yes associated protein）和14-3-3ε的蛋白水平和mRNA水平;利用免疫組化檢測ARC在人正常血管組織和動脈粥樣硬化患者血管組織中的表達差異。采用CCK-8（Cell Counting Kit-8）和EdU實驗分析VSMC的增殖情況,Tr... 

【文章來源】：青島大學山東省

【文章頁數】：58 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

動脈粥樣硬化的形成過程[6]

結果17圖1ARC在VSMC中表達且在血管損傷后表達上調（A，B）通過Westernblot和qRT-PCR檢測小鼠心臟、主動脈、腎臟、骨骼肌和肝臟中的ARC蛋白水平（A）和mRNA（B）水平；（C）通過Westernblot檢測H9c2、VSMC、HAEC和HUVEC中的ARC蛋白水平；（D）免疫組織化學檢測ARC在動脈粥樣硬化病人斑塊與健康組中表達變化；Bar=20μm；AS：動脈粥樣硬化斑塊；右側的柱形圖統(tǒng)計了ARC的相對蛋白質水平；（E，F）通過Westernblot和qRT-PCR檢測人的動脈粥樣硬化斑塊組織中的ARC蛋白水平（E）和mRNA水平（F），其中有8個動脈粥樣硬化斑塊組和6個對照組；（G，H）通過Westernblot和qRT-PCR檢測大鼠頸動脈球囊損傷模型中的ARC蛋白水平（G）和ARCmRNA水平（H）；（I，J）通過Westernblot和qRT-PCR檢測動脈粥樣硬化小鼠主動脈組織中中的（I）ARC蛋白水平和（J）mRNA水平。數據顯示為Mean±SEM（n=3）；*p<0.052ARC促進VSMC的增殖和遷移VSMC的增殖和遷移在新內膜形成和發(fā)展中發(fā)揮關鍵作用。最近的研究表明，敲除ARC的小鼠降低了肺動脈高壓，同時降低了PASMC的增殖[22]。為了檢測ARC是否參與VSMC的增殖和遷移，我們首先使用ARCsiRNA腺病毒抑制VSMC中內源性ARC的表達。從圖2A可以看出，VSMC感染ARCsiRNA腺病毒24小時后，內源性ARC的表達水平顯著降低。與對照組相比，內源性的ARC被抑制后，EdU和CCK-8實驗結果顯示VSMC的增殖能力減弱（圖2B和C）。Transwell實驗結果表明內源性ARC被抑制后會減弱VSMC的遷移（圖2D）。隨后，我們通過用過表達ARC的腺病毒轉染VSMC細胞，發(fā)現腺病毒可以有效地在VSMC中過表達ARC

青島大學碩士學位論文18（圖2E）。而且，ARC的過表達會促進VSMC的增殖（圖2F和G）和遷移（圖2H）。以上結果表明ARC在VSMC中發(fā)揮促進VSMC的增殖和遷移的功能。圖2ARC促進VSMC的增殖和遷移（A）通過Westernblot檢測ARC-siRNA腺病毒轉染VSMC24h后ARC的蛋白水平；（B）通過CCK-8檢測在0、12、24、36和48h轉染ARC-siRNA腺病毒的VSMC的增殖情況；（C）


本文編號：3285908