目的探討CD137-CD137L信號是否通過溶酶體損傷影響小鼠血管平滑肌細(xì)胞自噬。方法實驗分為兩部分:1.采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)原代小鼠胸主動脈血管平滑�。╲ascular smooth muscle cells,VSMCs）。實驗分為3組:即空白對照組、混合炎癥因子預(yù)刺激組（分別先后加入10ng/ml TNF-α,IL-1β,IFN-γ）、CD137-CD137L信號激動組[混合炎癥因子+CD137L重組蛋白（終濃度10μg/ml）]。Western blot法檢測各組VSMCs內(nèi)溶酶體相關(guān)膜蛋白1（lysosomal associated membrane protein 1,LAMP1）、組織蛋白酶B（cathepsin B,CTSB）、組織蛋白酶D（cathepsin D,CTSD）蛋白的表達(dá)水平。免疫熒光法檢測各組VSMCs內(nèi)溶酶體相關(guān)膜蛋白2（lysosomal associated membrane protein 2,LAMP2）的表達(dá)水平。吖啶橙（acridine orange,AO）染色法檢測各組VSMCs內(nèi)溶酶體p H值變化。透射電鏡觀察各組VSMCs內(nèi)溶酶體直徑變... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

1.原代小鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞（VSMCs）培養(yǎng)以及α-SMA免疫熒光染色（2.3.1.A：×40，2.3.1.B：×4），標(biāo)尺：200μm

圖 2.3.2. 不同濃度雷帕霉素對 VSMCs 自噬的影響Figure 2.3.2. Effects of different concentrations of rapamycin on autophagy in VSM2.3.3 激動 CD137-CD137L 信號對 VSMCs 中溶酶體標(biāo)志蛋白的影響Western blot 顯示（圖 2.3.3）：混合炎癥因子預(yù)刺激后，VSMCs 中 LAMCTSB、CTSD 表達(dá)水平與對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。CD137L 蛋白激動 CD137-CD137L 信號后，VSMCs 內(nèi) LAMP1、CTSB、CT達(dá)水平均明顯低于對照組（分別為 0.38±0.03 比 1.08±0.06、0.33±0.04 比±0.03、0.37±0.02 比 0.90±0.02，P<0.05）。

圖 2.3.3. CD137-CD137L 信號對小鼠 VSMCs 中 LAMP1、CTSB、CTSD 表達(dá)的影響（1：對照組，2：混合炎癥因子預(yù)刺激組，3：CD137-CD137L 信號激活組）：與對照組相比，aP>0.05，n=3；bP<0.05，n=3Figure 2.3.3. The effect of CD137-CD137L signaling on expression of CTSB, LAMP1 andCTSD in mouse VSMCs2.3.4 激動 CD137-CD137L 信號對小鼠 VSMCs 中溶酶體 pH 的影響活細(xì)胞染色結(jié)果顯示（圖 2.3.4）：混合炎癥因子預(yù)刺激組 VSMCs 內(nèi)紅色熒光斑點總數(shù)與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。CD137-CD137L 信號激動組 VSMCs 內(nèi)紅色熒光斑點總數(shù)少于對照組[（20.66±3.53）個/細(xì)胞比（90.33±8.19）個/細(xì)胞，P<0.05]，表明溶酶體 pH 值升高。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3283086