目的：研究在心肌腎胺酶缺乏、腎胺酶正常表達(dá)及腎胺酶重組蛋白預(yù)處理三種條件下,SD大鼠心肌缺血再灌注（I/R）損傷、細(xì)胞凋亡程度及組織腎胺酶表達(dá)變化,初步探索腎胺酶在心肌缺血再灌注損傷中的作用及其可能機(jī)制。方法：1.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：慢病毒載體介導(dǎo)的腎胺酶基因沉默干擾序列（LV-Rnls-RNAi）轉(zhuǎn)染H9C2心肌細(xì)胞,運(yùn)用QPCR及、Vestern-Blot方法鑒定腎胺酶基因表達(dá)抑制效率,篩選出對(duì)腎胺酶基因有高效抑制的靶序列。2.SD大鼠心肌細(xì)胞腎胺酶基因沉默模型建立：15只SPF級(jí)雄性10周齡SD大鼠（280-320g）,平均隨機(jī)分為5組（分別為Od組、4d組、7d組、10d組、14d組）；除基線組（Od組）外,每只大鼠心包腔注射100u1方法1中篩選出的滴度為1E+8TU/ml的慢病毒,分別在第0天（Od組）、4天（4d組）、7天（7d組）、10天（10d組）、14天（14d組）處死對(duì)應(yīng)各組大鼠,QPCR及Western-Blot方法鑒定心肌腎胺酶表達(dá),選取最佳感染時(shí)間。3.心肌缺血再灌注（I/R）損傷模型：36只SPF級(jí)雄性10w齡SD大鼠（280-320g）,平均隨機(jī)分為6組,分別為腎... 

【文章來源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

細(xì)胞蛋白濃度測(cè)定蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線

南大學(xué)碩士學(xué)位論文 2慢病毒載體介導(dǎo)的腎胺酶基因沉默效率鑒定(無± 5")表示，兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，組間比較采用One-WayANOVA析，多組內(nèi)兩兩比較采用S-N-K法，設(shè)定檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)意義；采用Graphpad Prism 6.01軟件作圖。.3結(jié)果.3.1慢病毒載體信息基因名稱：renalase物種：大鼠載體名稱：GV118 元件序列：U6-MCS-Ubi-EGFP載體圖譜：

圖2-10轉(zhuǎn)染后細(xì)胞計(jì)數(shù)感染效率數(shù)5個(gè)視野焚光細(xì)胞占總細(xì)胞比例，各組間轉(zhuǎn)染效率均大于90%,組間差異無統(tǒng)計(jì)，P>0.05。PCR鑒定轉(zhuǎn)染后各組腎胺酶基因表達(dá)情況過細(xì)胞轉(zhuǎn)染后計(jì)數(shù)，結(jié)果顯示各組轉(zhuǎn)染效率接近均在90%以上，考慮慢達(dá)慢，轉(zhuǎn)染后第5天，提取RNA行PCR檢測(cè)，經(jīng)PCR鑒定，轉(zhuǎn)染各組性病毒組抑制效率分別為63.47%、32.69%> 93.66%。各轉(zhuǎn)染組相對(duì)正常細(xì)胞Rnls基因表達(dá) 。。。。100 - 羞 66-1, — 63.47 —■ *P<0.05 ■ -■■! ‘ -■ -■__ 女 ：-1 I x_RNAi 19810-1 RNAil981H RNAi 19813-1轉(zhuǎn)染賬2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組、,一

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]化學(xué)修飾的重組腺相關(guān)病毒載體[J]. 張丹,邱飛,刁勇.  病毒學(xué)報(bào). 2013(05)
[2]腺相關(guān)病毒載體介導(dǎo)ZsGreen基因通過3種轉(zhuǎn)染途徑在心肌組織轉(zhuǎn)染效果的比較[J]. 譚文鵬,楊侃,李安瑩,楊瓊.  重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(06)
[3]Peroxisome proliferator-activated receptor gamma inhibits hepatic fibrosis in rats[J]. ZhengWang,Jia-Peng Xu,Yong-Chao Zheng,Wei Chen,Yong-Wei Sun,Zhi-YongWu and Meng Luo Department of General Surgery,Renji Hospital,Shanghai Jiaotong University School of Medicine,Shanghai 200127,China.  Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2011(01)



本文編號(hào)：3274002