目的：克隆NRF-1基因，并對(duì)NRF-1基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析，了解其基本結(jié)構(gòu)和蛋白分子特征，及NRF-1與相關(guān)蛋白分子的作用關(guān)系，為后續(xù)研究NRF-1的功能及在心力衰竭的心肌細(xì)胞中作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)支持和研究思路。構(gòu)建NRF-1重組慢病毒，并感染大鼠心肌細(xì)胞（H9c2（2-1）細(xì)胞），然后篩選出穩(wěn)定上調(diào)表達(dá)NRF-1的陽性轉(zhuǎn)染H9c2（2-1）細(xì)胞，為今后研究NRF-1基因?qū)λソ咝募〖?xì)胞的調(diào)節(jié)作用及后續(xù)的基因治療打下基礎(chǔ)。方法：1.NRF-1的生物信息學(xué)分析：通過在線軟件EXPASY， PSSFinder，PSITE，SignalP，Swiss-model，STRING對(duì)NRF-1的氨基酸構(gòu)成，蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)，蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)，信號(hào)肽，三維結(jié)構(gòu)，以及與相關(guān)蛋白之間的作用關(guān)系進(jìn)行分析預(yù)測(cè)。2.NRF-1基因的克隆與鑒定：2.1NRF-1基因的克隆：通過生物合成與重疊延伸PCR技術(shù)克隆NRF-1基因，并重組于載體pMD18-T，然后轉(zhuǎn)化至感受態(tài)大腸桿菌（E.coil DH5）；2.2NRF-1基因的鑒定：PCR及測(cè)序鑒定重組質(zhì)粒NRF-1/pMD18-T序列正確性。3.構(gòu)建NRF-1重組慢病... 

【文章來源】：寧夏醫(yī)科大學(xué)寧夏回族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

pMD18-Tvector簡(jiǎn)單結(jié)構(gòu)圖譜

名稱 數(shù)目 比例 名稱 數(shù)目 比例Ala (A) 75 14.0%Arg (R) 18 3.4%Asn (N) 14 2.6%Asp (D) 25 4.7%Cys (C) 3 0.6%Gln (Q) 39 7.3%Glu (E) 39 7.3%Gly (G) 33 6.2%His (H) 14 2.6%Ile (I) 21 3.9%Leu (L) 32 6.0%Lys (K) 28 5.2%Met (M) 12 2.2%Phe (F) 11 2.1%Pro (P) 26 4.9%Ser (S) 35 6.6%Thr (T) 47 8.8%Trp (W) 7 1.3%Tyr (Y) 10 1.9%Val (V) 45 8.4%Pyl (O) 0 0.0%Sec (U) 0 0.0%表 2 NRF-1 氨基酸組成

2.2 重組質(zhì)粒 NRF-1/pMD18-T 中 NRF-1 基因序列鑒定：重組質(zhì)粒分三段測(cè)定，測(cè)序質(zhì)量較高，序列比對(duì)結(jié)果和測(cè)序峰圖截圖見圖 5。插入序列經(jīng)過與 GenBank 上 NRF-1（ NM 001100708.1）序列比對(duì)，顯示序列一致。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]心肌代謝重構(gòu)的研究進(jìn)展[J]. 宋熔,祝善俊.  中華高血壓雜志. 2008(03)
[2]代謝重構(gòu)與慢性心力衰竭[J]. 祝善俊.  中華老年心腦血管病雜志. 2007(06)
[3]哺乳動(dòng)物核呼吸因子研究進(jìn)展[J]. 宋熔,柳君澤.  生理科學(xué)進(jìn)展. 2005(02)

博士論文
[1]核呼吸因子基因的克隆表達(dá)及單克隆、多克隆抗體的制備[D]. 李鍇男.第四軍醫(yī)大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3228130