目的：克隆NRF-1基因，并對NRF-1基因進行生物信息學(xué)分析，了解其基本結(jié)構(gòu)和蛋白分子特征，及NRF-1與相關(guān)蛋白分子的作用關(guān)系，為后續(xù)研究NRF-1的功能及在心力衰竭的心肌細胞中作用機制提供實驗支持和研究思路。構(gòu)建NRF-1重組慢病毒，并感染大鼠心肌細胞（H9c2（2-1）細胞），然后篩選出穩(wěn)定上調(diào)表達NRF-1的陽性轉(zhuǎn)染H9c2（2-1）細胞，為今后研究NRF-1基因?qū)λソ咝募〖毎恼{(diào)節(jié)作用及后續(xù)的基因治療打下基礎(chǔ)。方法：1.NRF-1的生物信息學(xué)分析：通過在線軟件EXPASY， PSSFinder，PSITE，SignalP，Swiss-model，STRING對NRF-1的氨基酸構(gòu)成，蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)，蛋白質(zhì)修飾位點，信號肽，三維結(jié)構(gòu)，以及與相關(guān)蛋白之間的作用關(guān)系進行分析預(yù)測。2.NRF-1基因的克隆與鑒定：2.1NRF-1基因的克�。和ㄟ^生物合成與重疊延伸PCR技術(shù)克隆NRF-1基因，并重組于載體pMD18-T，然后轉(zhuǎn)化至感受態(tài)大腸桿菌（E.coil DH5）；2.2NRF-1基因的鑒定：PCR及測序鑒定重組質(zhì)粒NRF-1/pMD18-T序列正確性。3.構(gòu)建NRF-1重組慢病... 

【文章來源】：寧夏醫(yī)科大學(xué)寧夏回族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

pMD18-Tvector簡單結(jié)構(gòu)圖譜

名稱 數(shù)目 比例 名稱 數(shù)目 比例Ala (A) 75 14.0%Arg (R) 18 3.4%Asn (N) 14 2.6%Asp (D) 25 4.7%Cys (C) 3 0.6%Gln (Q) 39 7.3%Glu (E) 39 7.3%Gly (G) 33 6.2%His (H) 14 2.6%Ile (I) 21 3.9%Leu (L) 32 6.0%Lys (K) 28 5.2%Met (M) 12 2.2%Phe (F) 11 2.1%Pro (P) 26 4.9%Ser (S) 35 6.6%Thr (T) 47 8.8%Trp (W) 7 1.3%Tyr (Y) 10 1.9%Val (V) 45 8.4%Pyl (O) 0 0.0%Sec (U) 0 0.0%表 2 NRF-1 氨基酸組成

2.2 重組質(zhì)粒 NRF-1/pMD18-T 中 NRF-1 基因序列鑒定：重組質(zhì)粒分三段測定，測序質(zhì)量較高，序列比對結(jié)果和測序峰圖截圖見圖 5。插入序列經(jīng)過與 GenBank 上 NRF-1（ NM 001100708.1）序列比對，顯示序列一致。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]心肌代謝重構(gòu)的研究進展[J]. 宋熔,祝善俊.  中華高血壓雜志. 2008(03)
[2]代謝重構(gòu)與慢性心力衰竭[J]. 祝善俊.  中華老年心腦血管病雜志. 2007(06)
[3]哺乳動物核呼吸因子研究進展[J]. 宋熔,柳君澤.  生理科學(xué)進展. 2005(02)

博士論文
[1]核呼吸因子基因的克隆表達及單克隆、多克隆抗體的制備[D]. 李鍇男.第四軍醫(yī)大學(xué) 2008



本文編號：3228130