發(fā)布時間：2021-06-09 10:30

　　腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）激活具有抗纖維化的作用,但其具體機制仍不十分清楚。本研究擬在心臟成纖維細胞中,明確AMPK激活對血管緊張素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,AngⅡ）引起的轉化生長因子β1（transforming growth factor-β1,TGFβ1）表達的作用及其具體機制。分離培養(yǎng)成年小鼠心臟成纖維細胞,酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測TGFβ1蛋白表達,免疫印跡實驗檢測AMPK活性和CCAAT/增強子結合蛋白β（CCAAT/enhancer-binding proteinβ,C/EBPβ）表達,雙熒光素酶報告基因實驗檢測TGFβ1轉錄活性。結果顯示,給予AMPK激活劑AICAR預處理可以抑制AngⅡ引起的TGFβ1產生增加,這一抑制作用可被AMPK抑制劑Compound C逆轉。生物信息學分析顯示在小鼠Tgfb1啟動子區(qū)存在C/EBPβ轉錄因子可能的結合位點。雙熒光素酶報告基因實驗表明,對于轉染Tgfb1啟動子區(qū)序列質粒的小鼠胚胎成纖維細胞,AngⅡ可以增加TGFβ1轉錄活性;但是對于轉染缺失C/EBPβ結合位點的... 

【文章來源】：生理學報. 2017,69(02)北大核心CSCD

【文章頁數】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試劑
    1.2 成年小鼠心臟成纖維細胞的分離及培養(yǎng)(在無菌條件下操作)
    1.3 小鼠胚胎成纖維細胞的分離及培養(yǎng)(在無菌條件下操作)
    1.4 Western blot
    1.5 酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)
    1.6 結合位點預測
    1.7雙熒光素酶報告基因檢測
    1.8 數據分析
2 結果
    2.1 AMPK激動劑AICAR抑制Ang II引起的TGFβ1表達
    2.2 AICAR與Compound C對成年小鼠心臟成纖維細胞AMPK活性的影響
    2.3 C/EBPβ介導Ang II引起的TGFβ1轉錄表達
    2.4 AICAR抑制Ang II引起的C/EBPβ表達
3 討論



本文編號：3220416