目的:構(gòu)建具有心臟特異性表達(dá)的重組腺相關(guān)病毒（rAAV9-AR185-EGFP和rAAV9-AR117-EGFP）,并制備rAAV9-AR185-EGFP和rAAV9-AR117-EGFP兩種病毒制劑,檢測(cè)在大鼠體內(nèi)的轉(zhuǎn)染效果。建立大鼠心力衰竭模型,通過(guò)腺相關(guān)病毒載體攜帶的胞內(nèi)抗體改變大鼠心臟中RyR2蛋白的磷酸化水平,研究AR185抗體對(duì)大鼠心臟功能和結(jié)構(gòu)的影響,探討使用胞內(nèi)抗體治療心衰的可能性。研究AR185抗體對(duì)大鼠單個(gè)心肌細(xì)胞的鈣穩(wěn)態(tài)和收縮功能的保護(hù)作用,進(jìn)一步探討RyR2蛋白過(guò)度磷酸化在心衰病理過(guò)程中的作用和影響機(jī)制。方法:以課題組前期篩選獲得的AR185抗體為目的基因,以重組9型腺相關(guān)病毒（rAAV9）為載體,構(gòu)建相應(yīng)的rAAV9-AR185-EGFP穿梭質(zhì)粒。體外轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞制備病毒制劑,通過(guò)尾靜脈注射的方式在大鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)染AAV9-AR185-EGFP并檢測(cè)其體內(nèi)轉(zhuǎn)染效果。建立動(dòng)物模型,進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組,將大鼠分成4組。分別是Sham組（n=7）,開胸后縫合,尾靜脈注射生理鹽水;HF組（n=7）,進(jìn)行心梗手術(shù)（結(jié)扎大鼠心臟冠脈左前降支）,尾靜脈注射生理鹽水;AAV-AR1... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

AAV-AR185載體結(jié)構(gòu)示意圖

新型心肌靶向 AAV9-抗 RyR2 胞內(nèi)抗體的心衰防治作用表 1-1 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測(cè) Ct 值稱 Ct1 Ct2 C6.42 6.66 6.9.18 9.48 9.12.61 12.57 1215.51 15.59 1517.82 17.55 17R185 10.93 10.97 10R117 10.64 10.58 10各梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品熒光 Ct 結(jié)果為縱坐標(biāo)數(shù)值，樣品拷貝數(shù)的 lg 值出標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線的函數(shù)公式 y=-2.851x+32.296，如圖

觀察心臟冰凍切片綠色熒光蛋白表達(dá)情況（圖1-4），證明我們制備獲得的病毒制劑能夠轉(zhuǎn)染大鼠心臟，可以有效的完成后續(xù)實(shí)驗(yàn)。圖 1-4 心臟冰凍切片熒光圖像四、實(shí)驗(yàn)討論心力衰竭是一種對(duì)人類生命健康具有極大威脅的疾病，在全球醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)中，心臟疾病的臨床研究和預(yù)防保健都處在較高優(yōu)先級(jí)別。目前，全世界心力衰竭患者人

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3212649