本文關(guān)鍵詞：二甲基甲酰胺對(duì)心肌細(xì)胞炎性損傷的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討二甲基甲酰胺(DMF)是否對(duì)H9c2心肌細(xì)胞造成炎性損傷,同時(shí)探尋是否由于NF-κB信號(hào)通路的激活引發(fā)的炎癥反應(yīng)。方法不同濃度梯度(0m M,50m M,100m M,200m M)DMF染毒心肌細(xì)胞12h和200 m M DMF染毒不同時(shí)間后(0h,2h,4h,6h,8h,12h),用LDH、CK、CK-MB試劑盒分別檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的LDH、CK、CK-MB,用TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8 Elisa試劑盒檢測(cè)不同濃度(0m M,50m M,100m M,200m M)DMF作用心肌細(xì)胞后炎癥因子釋放量以及200 m M DMF染毒不同時(shí)間后(0h,2h,4h,6h,8h,12h)心肌細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)上清液中炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平;采用活性氧(ROS)試劑盒檢測(cè)200 m M DMF染毒不同時(shí)間后(0h,2h,4h,6h,8h,12h)心肌細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平;用western blotting(WB)檢測(cè)200 m M DMF染毒不同時(shí)間后(0h,2h,4h,6h,8h,12h)心肌細(xì)胞后,細(xì)胞核和細(xì)胞胞漿內(nèi)p65的表達(dá)量,總蛋白中p-ikb的水平;采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法(IFC)對(duì)200 m M DMF染毒不同時(shí)間后(0h,2h,4h,6h,8h,12h)后,細(xì)胞核和胞漿內(nèi)p65的情況。結(jié)果不同劑量DMF(0 m M,50 m M,100 m M,200 m M)染毒12h后細(xì)胞培養(yǎng)上清液中心肌細(xì)胞損傷指標(biāo)LDH、CK、CK-MB水平均有升高,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(LDH:F=564.426,P0.0001;CK:F=938.695,P0.0001;CK-MB:F=15.636,P=0.001);LDH、CK和CK-MB的水平在50m M,100m M,200m M染毒組較對(duì)照組高,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。心肌細(xì)胞炎癥指標(biāo)TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8的水平也均有升高(TNF-α:F=19.810,P0.001;IL-1β:F=50.638,P0.001;IL-6:F=13.265,P0.01;IL-8:F=11.521,P0.001);50m M和100m M較對(duì)照組TNF水平有所升高,但是差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;200m M染毒組較對(duì)照組以及其他染毒組TNF水平都有明顯增加,均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.001);IL-1β水平在50m M,100m M,200m M染毒組較對(duì)照組高,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);50m M染毒組較對(duì)照組IL-6水平有輕微升高,但是組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。100m M和200m M染毒組較對(duì)照組,IL-6水平均有增加(P0.05);各染毒組較對(duì)照組,IL-8均有升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。200 m M DMF染毒不同時(shí)間后(0h,2h,4h,6h,8h,12h)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中LDH、CK、CK-MB水平升高,組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(LDH:F=1618.106,P0.0001;CK:F=609.899,P0.001;CK-MB:F=119.176,P0.001)。TNF-α、IL-1β、IL-6水平在染毒后4h較其他各組高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(皆P0.05),IL-8水平在染毒后2h較其他各組高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。200m M DMF染毒不同時(shí)間后,心肌細(xì)胞ROS的水平總體組間存在差異,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=54.722,P0.001)。2h染毒組活性氧水平最高,與對(duì)照組、其他染毒組相比,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。細(xì)胞核內(nèi)p65水平:2h,4h和6h染毒組較對(duì)照組以及8h,12h染毒組顯著升高,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);細(xì)胞漿內(nèi)2h染毒組p65水平較對(duì)照組有顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05).2h組與其他染毒組p65水平也有所降低,除了與12h染毒組有差異(P0.01),與4h,6h,8h染毒組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義�？偟鞍字械牧姿峄疘κB,2h、4h、6h染毒組均高于對(duì)照組以及其他染毒組(P0.05)。免疫熒光細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)DMF染毒后2h時(shí)細(xì)胞核內(nèi)熒光較強(qiáng),p65轉(zhuǎn)核明顯,其他染毒組核內(nèi)熒光較弱。結(jié)論DMF染毒后,心肌細(xì)胞LDH、CK、CK-MB水平升高;炎性因子(如TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8)釋放,活性氧升高,p65轉(zhuǎn)核,證實(shí)發(fā)生炎性損傷,并且實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示NF-κB信號(hào)通路參與了二甲基甲酰胺所致H9c2心肌細(xì)胞炎性損傷過(guò)程。
【關(guān)鍵詞】：二甲基甲酰胺 心肌細(xì)胞 炎癥 NF-κB信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R542.2
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 1.前言12-14
• 2.材料和方法14-25
• 3.結(jié)果25-39
• 4.討論39-42
• 5.結(jié)論42
• 6.參考文獻(xiàn)42-48
• 附錄48-49
• 致謝49-50
• 綜述50-60
• 參考文獻(xiàn)55-60

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本文編號(hào)：319125