目的心血管疾病一直是引起中老年人死亡的主要因素之一,在如高血壓或心臟收縮壁應(yīng)力增加等病理刺激下就會導(dǎo)致心肌肥厚,心肌肥厚是健康心臟超負(fù)荷工作時的一種生理性、代償性和適應(yīng)性反應(yīng),持續(xù)性心肌肥厚可導(dǎo)致心力衰竭,但其潛在的病理機(jī)制尚不完全明了。piRNA（piwi-interacting RNA）是一類新型非編碼RNA（non-coding RNA,ncRNA）,因能夠與piwi蛋白相互作用而命名,其功能涉及表觀遺傳狀態(tài)的調(diào)控、基因組完整性的維持和干細(xì)胞功能的維持,在癌癥等疾病中發(fā)揮調(diào)控作用,但是目前有關(guān)piRNA調(diào)節(jié)心臟疾病的報道還比較少。我們前期的預(yù)實(shí)驗(yàn)對小鼠用血管緊張素II（AngiotensinII,AngⅡ）刺激誘導(dǎo)心肌肥厚模型,通過piRNA測序發(fā)現(xiàn)與對照組小鼠相比,AngⅡ處理組心臟有多個piRNA呈現(xiàn)差異表達(dá),通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證piRNA測序結(jié)果發(fā)現(xiàn)piR-960差異表達(dá)最顯著且在心臟組織中特異表達(dá),暗示piRNA有可能參與心肌細(xì)胞肥大的調(diào)控。因此,為了揭示piR-960是否能夠調(diào)控心肌細(xì)胞肥大,我們擬在細(xì)胞水平及動物水平研究piR-960調(diào)節(jié)心肌肥厚的功能,為預(yù)防和治療心肌肥厚相... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 引言
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)動物
    2.2 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
    2.3 實(shí)驗(yàn)耗材與試劑
    2.4 乳鼠原代心肌細(xì)胞的分離培養(yǎng)所需試劑及方法
        2.4.1 試劑配制
        2.4.2 實(shí)驗(yàn)步驟
    2.5 測定細(xì)胞表面積
    2.6 動物實(shí)驗(yàn)
        2.6.1 小動物超聲心動
        2.6.2 獲取小鼠心臟組織樣本
        2.6.3 小鼠體重(BW)和心臟質(zhì)量(HW)稱量
    2.7 HE染色冰凍切片
    2.8 WGA-FITC染色
    2.9 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    2.10 RNA的提取、逆轉(zhuǎn)錄及PCR
        2.10.1 RNA的提取
        2.10.2 RNA的質(zhì)量檢測與標(biāo)準(zhǔn)化
        2.10.3 逆轉(zhuǎn)錄
        2.10.4 實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
    2.11 統(tǒng)計學(xué)方法
3 結(jié)果
    3.1 piRNA的篩選
    3.2 AngⅡ誘導(dǎo)心肌細(xì)胞發(fā)生肥大
    3.3 細(xì)胞水平過表達(dá)piR-960能夠促進(jìn)細(xì)胞肥厚標(biāo)記物的表達(dá)
    3.4 細(xì)胞水平過表達(dá)piR-960能夠增大心肌細(xì)胞表面積
    3.5 體外敲低pi R-960 能夠抑制AngⅡ引起的肥厚標(biāo)記物表達(dá)升高
    3.6 體外敲低pi R-960 能夠抑制AngⅡ引起的心肌細(xì)胞表面積增大
    3.7 體內(nèi)水平敲低piR-960對小鼠的心功能無明顯影響
    3.8 體內(nèi)敲低pi R-960 能夠抑制AngⅡ誘導(dǎo)的心臟表型肥大和心臟體重比的增加
    3.9 體內(nèi)敲低pi R-960 能夠抑制AngⅡ引起的心肌肥厚
    3.10 體內(nèi)敲低pi R-960 能夠緩解AngⅡ引起的心功能降低
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
縮略詞表(附錄)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]piRNA抑制基因轉(zhuǎn)座的分子機(jī)制[J]. 劉啟鵬,安妮,岑山,李曉宇.  遺傳. 2018(06)
[2]PIWI proteins and their interactors in piRNA biogenesis,germline development and gene expression[J]. Hsueh-Yen Ku,Haifan Lin.  National Science Review. 2014(02)



本文編號：3187140