發(fā)布時間：2021-04-25 04:52

　　目的:細胞能量代謝異常導致心肌細胞肥大是糖尿病心肌病（DCM,Diabetic Cardiomyopathy）患者的心功能障礙的重要因素。線粒體分裂與融合異常導致其動力學失衡,是糖尿病細胞能量代謝異常的主要環(huán)節(jié)。目前,DCM心肌組織線粒體動力相關蛋白（Drp1,Dynamic-related protein1）磷酸化水平變化,可導致線粒體動力學失衡,但其機制不明。我們的前期研究發(fā)現(xiàn),心肌細胞Ca2+信號通路調(diào)控異常促進DCM的發(fā)生發(fā)展,而Orai1鈣通道是心肌細胞Ca2+內(nèi)流增加的重要途徑。本研究擬探討Orai1鈣信號能否通過調(diào)控Drp1磷酸化水平從而誘導DCM心肌細胞線粒體動力學異常。方法:（1）通過高脂飲食建立2型糖尿病大鼠模型,超聲檢測其心功能指標;（2）用含33 mmol/L高糖（HG,High glucose）的培養(yǎng)基培養(yǎng)乳大鼠原代心肌細胞（NRCMs,Neonatal rat cardiomyocytes）,建立 DCM 細胞模型;（3）采用 WGA 染色測定NRCMs表面積;采用鈣離子指示劑Fluo4/AM負載NRCMs,測定胞內(nèi)鈣離子濃度變化;通過Mito-Tracke... 

【文章來源】：華南理工大學廣東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一章 糖尿病心肌組織中線粒體動力學和鈣信號相關通路的表達變化
    引言
    1 實驗材料與試劑
        1.1 實驗動物
        1.2 主要儀器設備
        1.3 主要試劑
        1.4 試劑配制
    2 實驗方法
        2.1 構(gòu)建ZDF大鼠2型糖尿病模型
        2.2 超聲波心動描記術(shù)
        2.3 石蠟切片WGA免疫熒光實驗
        2.4 蛋白免疫印跡
        2.5 統(tǒng)計分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 2型糖尿病模型大鼠的血糖體重指標
        3.2 2型糖尿病大鼠心功能的各項指標
        3.3 2型糖尿病大鼠心肌肥厚相關指標
        3.4 糖尿病心肌組織中線粒體動力學和鈣信號相關通路的表達
            3.4.1 糖尿病大鼠心肌組織中線粒體動力學相關蛋白的表達
            3.4.2 糖尿病心肌組織中鈣信號相關通路的表達
    本章小結(jié)
第二章 Orai1調(diào)控高糖誘導心肌細胞線粒體分裂的機制
    引言
    1 實驗材料
        1.1 實驗細胞
        1.2 主要儀器設備
        1.3 主要試劑
        1.4 試劑配制
    2 實驗方法
        2.1 SD乳大鼠原代心肌細胞的分離與培養(yǎng)
        2.2 乳大鼠原代心肌細胞實驗處理
        2.3 細胞免疫熒光染色
        2.4 細胞總蛋白提取
        2.5 心肌細胞鈣離子濃度測定
        2.6 統(tǒng)計分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 高糖誘導原代心肌細胞肥大
        3.2 高糖誘導心肌細胞線粒體形態(tài)和功能異常
        3.3 高糖誘導心肌細胞線粒體動力學相關蛋白表達的變化
        3.4 Mdivi-1調(diào)控Drp1磷酸化抑制高糖誘導的心肌細胞肥大
            3.4.1 Mdivi-1抑制高糖誘導的心肌細胞肥大
            3.4.2 Mdivi-1改善高糖誘導的線粒體形態(tài)和功能異常
            3.4.3 Mdivi-1通過調(diào)控Drp1磷酸化抑制高糖誘導的線粒體分裂
2+內(nèi)流增加">        3.5 高糖誘導心肌細胞Orai1蛋白表達和Orai1介導的Ca²⁺內(nèi)流增加
        3.6 BTP2可抑制高糖誘導的心肌細胞肥大和線粒體分裂
            3.6.1 BTP2可抑制高糖誘導的心肌細胞肥大
            3.6.2 BTP2可抑制高糖誘導的p-ERK1/2和CnA蛋白表達增加
            3.6.3 U0126抑制高糖誘導的心肌細胞肥大和線粒體分裂
            3.6.4 CsA抑制高糖誘導的心肌細胞肥大和線粒體分裂
            3.6.5 BTP2可抑制高糖誘導的Drp1激活
        3.7 下表達 Orai1 可以抑制高糖誘導的心肌細胞肥大同時降低線粒體分裂
            3.7.1 下表達Orai1可抑制高糖誘導的心肌細胞肥大
            3.7.2 下表達Orai1通過調(diào)控Drp1磷酸化抑制高糖誘導的心肌細胞線粒體分裂
    本章小結(jié)
討論
全文總結(jié)
參考文獻
中英文對照表
攻讀碩士學位期間取得的研究成果
致謝
附件


【參考文獻】：
期刊論文
[1]糖尿病心肌病的發(fā)病機制研究進展[J]. 潘余楠,王亞萍.  心電與循環(huán). 2019(06)



本文編號：3158740