發(fā)布時(shí)間：2021-04-14 12:19

　　研究背景:急性心肌梗死是世界范圍內(nèi)死亡率最高、最危及生命的疾病之一。間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells,MSCs）是治療心肌梗死最有前途的細(xì)胞類型之一,有臨床前試驗(yàn)支持供體細(xì)胞越接近心臟表型修復(fù)心臟功能的療效越好。然而,無論MSCs的來源如何,移植到心梗周邊區(qū)的MSCs因心梗后惡劣環(huán)境而存活率很低,限制了MSCs在心梗治療中的應(yīng)用。轉(zhuǎn)化生長因子11（growth differentiation factor 11,GDF11）是轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）超家族中的一員,已被證實(shí)可以在缺血/再灌注模型中刺激血管祖細(xì)胞的增殖和血管生成,可通過調(diào)控線粒體生成或線粒體動(dòng)力學(xué)參與骨骼肌細(xì)胞線粒體質(zhì)量控制。而在心肌損傷治療中GDF11是否可提高心臟來源的MSCs活性及治療療效有待進(jìn)一步研究。線粒體完整性的維持在細(xì)胞抵抗凋亡中起著重要的作用,線粒體功能障礙導(dǎo)致分裂激活和融合失活。因此我們推測缺氧條件下GDF11可能通過維持線粒體動(dòng)態(tài)穩(wěn)定及完整性對(duì)MSCs起到抗凋亡保護(hù)作用。研究目的:在體內(nèi)和體外模型中驗(yàn)證缺氧條件下... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：135 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

MSCs的細(xì)胞形態(tài)及表面特異性標(biāo)記物鑒定

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文結(jié)果32圖2缺氧不同時(shí)間點(diǎn)MSCs中GDF11蛋白表達(dá)量變化通過WesternBlot檢測GDF11蛋白表達(dá)變化，β-actin作為內(nèi)參，利用ImageLab軟件分析條帶灰度值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)定量分析(n=3)。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。*p＜0.05，與缺氧0小時(shí)相比。4.2體內(nèi)動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)4.2.1GDF11改善了心肌梗死周邊區(qū)MSCs的抗凋亡能力我們通過過表達(dá)GDF11的慢病毒感染MSCs（MSCsLV-GDF11），同時(shí)將空載質(zhì)粒病毒感染的MSCs（MSCsLV）作為對(duì)照組。慢病毒過表達(dá)GDF11基因感染MSCs48小時(shí)后，提取細(xì)胞總蛋白，通過WesternBlot檢測證實(shí)，與空載病毒組相比，在過表達(dá)GDF11組的GDF11蛋白水平明顯上調(diào)（圖3A）。C57/BL6J小鼠構(gòu)建心肌梗死模型后，在心梗周邊區(qū)移植相同數(shù)量的MSCsLV-GDF11和MSCsLV（細(xì)胞數(shù)5×105/只）。術(shù)后3天取心臟組織提取RNA及行冰凍切片。熒光定量PCR及GFP免疫熒光染色觀察到MSCsLV-GDF11組心梗周邊區(qū)MSCs的駐留率更高（圖3B-D）。

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文結(jié)果33圖3GDF11增強(qiáng)小鼠心梗模型中移植后的MSCs的駐留率。（A）慢病毒過表達(dá)GDF11基因感染MSCs48小時(shí)后，提取細(xì)胞總蛋白，Westernblot檢測GDF11蛋白水平變化及統(tǒng)計(jì)分析，空載質(zhì)粒病毒組（LV）作為對(duì)照組，β-actin作為內(nèi)參。利用ImageLab軟件分析條帶灰度值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)定量分析(n=3)。（B）熒光定量PCR分析梗死心臟中GFP陽性細(xì)胞比例，兩組各統(tǒng)計(jì)6只小鼠。（C，D）代表性GFP免疫熒光染色（C），藍(lán)色代表細(xì)胞核，綠色代表GFP標(biāo)記的MSCs。定量分析每個(gè)視野下GFP陽性的細(xì)胞個(gè)數(shù)（D），每個(gè)心臟切面至少觀察9-10個(gè)視野，兩組各統(tǒng)計(jì)6只小鼠樣本。比例尺長度為100μm。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，*p＜0.05，與LV/MSCsLV組相比。4.2.2移植過表達(dá)GDF11的MSCs可改善心肌梗死后心臟功能為了研究過表達(dá)GDF11的MSCs對(duì)心肌梗死后心臟功能的影響，構(gòu)建小鼠心梗模型后，我們?cè)谛募」Ｋ乐苓厖^(qū)隨機(jī)選取5處注射MSCs，包括慢病毒過表達(dá)GDF11的MSCs（MSCsLV-GDF11）和作為對(duì)照組的空載質(zhì)粒病毒轉(zhuǎn)染的MSCs（MSCsLV）。同時(shí)注射相同體積的DMEM作為陰性對(duì)照組。在小鼠術(shù)前1天，心梗后3、7、14、28天，利用經(jīng)胸多普勒心臟超聲檢查評(píng)估各組小鼠心功能參數(shù)左

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Homing and migration of mesenchymal stromal cells: How to improve the efficacy of cell therapy?[J]. Ann De Becker,Ivan Van Riet.  World Journal of Stem Cells. 2016(03)
[2]Heat shock pretreatment improves stem cell repair following ischemia-reperfusion injury via autophagy[J]. Peng-Fei Qiao,Lei Yao,Xin-Chen Zhang,Guo-Dong Li,De-Quan Wu.  World Journal of Gastroenterology. 2015(45)
[3]WJSC 6th Anniversary Special Issues（2）:Mesenchymal stem cells Umbilical cord-derived mesenchymal stem cells:Their advantages and potential clinical utility[J]. Tokiko Nagamura-Inoue,Haiping He.  World Journal of Stem Cells. 2014(02)



本文編號(hào)：3137306