本論文的工作分為以下兩個部分：第一部分重組人精氨酸酶（rhArg）對非何杰金淋巴瘤的細胞毒性及細胞自噬在rhArg殺傷非何杰金淋巴瘤細胞中的作用研究近年來,靶向細胞代謝尤其是精氨酸代謝治療腫瘤受到了大量關(guān)注。精氨酸酶是一種精氨酸降解酶,對多種惡性實體瘤均有殺傷效果。本課首次研究了rhArg對非何杰金淋巴瘤（NHL）細胞的細胞毒性。細胞自噬真核細胞內(nèi)遺傳保守的蛋白質(zhì)降解途徑,在維持細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)及細胞增殖、分化和死亡等過程中起重要作用,與腫瘤治療息息相關(guān)。研究表明生長因子、氨基酸缺乏等外界刺激會誘導細胞自噬。但精氨酸酶能否誘導NHL細胞自噬尚未見報道,本課題首次研究了rhArg誘導NHL細胞自噬以及細胞自噬在rhArg殺傷NHL細胞中的作用和機制。選擇NHL研究中最常用的細胞株Raji和Daudi作為體外模型。細胞經(jīng)rhArg處理后,用MTT法檢測細胞活力,用流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡和線粒體膜電位；用電子顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡觀察細胞自噬體、western blot檢測細胞自噬相關(guān)蛋白或細胞凋亡相關(guān)蛋白的表達。用siRNA沉默細胞凋亡調(diào)控基因caspase3、細胞自噬調(diào)控基因ATG5和B... 

【文章來源】：復旦大學上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．?ｒｈＡｒｇ可通過耗竭精氨酸導致腫瘤細胞生長抑制??能降解精氨酸的酶包括精氨酸酶（ａｒｉｎａｓｅ）、精氨酸脫亞胺酶（ａｒｉｎｉｎｅ??

巧了抑制Ｈｈ信號通路對伊馬替尼敏感或耐藥的Ｂｃｒ－Ａｂｌ＋ＣＭＬ細胞生長的影響。??分別用３．３、１０和３０叫ＶＩ的ｖｉｓｍｏｄ巧化處理Ｋ５６２細胞２４?ｈ，收集細胞抽提??ＲＮＡ、將ＲＮＡ逆轉(zhuǎn)錄為ｃＤＮＡ進行定量ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣ民分析。結(jié)果如圖２－１所示，??１０和３０?｜ｌｉＭ的ｖｉｓｍｏｄｅｇ化能顯著抑制Ｇｌｉｌ的表達。??Ｋ５６２??含如－下??＜?ＨＢ?Ｗ、：‘：??ｏｌｌｉｊ?ＢＭ??０?３．３?１０?３０??Ｖｉｓｍｏｄ巧化（ｙＭ）??圖２－１?Ｖｉｓｍｏｄ巧化能有效抑制Ｂｃｒ－Ａｂ廣ＣＭＬ細胞中Ｇｌｉｌ的ｍＲＮＡ表達??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｋ５６２?ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｗｋｈ?３．３，１０，?ａｎｄ?３０?｜〇Ｍ?ｏｆ?ｖｉｓｍｏｄ巧化?ｆｂｒ?２４?ｈ，??ｇｅｎｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?Ｇｌｉｌ?ｗａｓ?ｄｅｌｅｔｅｄ?ｂｙ?ｑＲＴ－ＰＣＲ．?＊＊?ｖｓ?Ｃｏｎｔｒｏｌ，?Ｐ＜０．０１??將Ｋ５６２細胞分別用３．３、１０和３０?的ｖｉｓｍｏ＾ｇＡ處理Ｋ５６２細胞４８?ｈ后，??裂解細胞牧集蛋白，運用ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ方法檢測Ｇｌｉｌ蛋白表達水平。結(jié)果如圖２－２??所示，１０和３０＾■ｌＭ的ｖｉｓｒｎｏｄ巧化能降低Ｇｌｉｌ的表達水平。切上結(jié)果共同表明，??１０和３０?的ｖｉｓｍｏｄ巧化能有效抑制ｈｅｄｇｅｈｏｇ信號通路。??－４７－??

（ＡＳＳ）或鳥氨酸氨甲醜基轉(zhuǎn)移酶（ＯＴＣ）的缺失，自身無法通過尿素循環(huán)合成??精氨酸，只能依賴外源性的精氨酸維持正常的生理功能［８，?９］。對于這類腫瘤細??胞，可運用精氨酸降解酶耗盡細胞所需的精氨酸從而導致細胞死亡（如圖２）??－７－??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Generation and selection of immunized Fab phage display library against human B cell lymphoma[J]. Yongmei Shen1,2;Xiaochun Yang1;Ningzheng Dong3;Xiaofang Xie1,2;Xia Bai3;Yizhen Shi1,21 Department of Radioimmunoassay2 Department of Clinical Laboratory, Second Affiliated Hospital of Soochow University, Suzhou 215004, China3 Leukemia Research Unit, Jiangsu Institution of Hematology, First Affiliated Hospital of Soochow University, Suzho 215006, China.  Cell Research. 2007(07)



本文編號：3123154