[目的]近來研究發(fā)現(xiàn)短期快速增加細(xì)胞內(nèi)的O-GlcNAc （氧連-N-乙酰葡萄糖胺）修飾水平可發(fā)揮血管保護作用,對抗急性血管損傷效應(yīng),但具體分子機制并不清楚。本研究旨在探討鋅指蛋白A20蛋白的O-GlcNAc修飾對于血管炎癥的影響及分子機制。[方法]1)給予Thiamet-G（一種特異性的OGA抑制劑）預(yù)處理大鼠主動脈平滑肌細(xì)胞（rat aortic smooth muscle cells, RASMCs）,再給予腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）處理,采用RT-PCR口Western blot的方法,分析檢測A20的表達,觀察增加細(xì)胞內(nèi)O-GlcNAc修飾水平對TNF-α誘導(dǎo)的A20表達的影響。2)給予腺病毒載體攜帶的OGA（O-GIcNAc hydrolase,O-N-乙酰葡糖胺水解酶）/OGT（O-GIcNAc transferase,O-N-乙酰葡糖胺轉(zhuǎn)移酶）感染預(yù)處理RASMCs,再給予TNF-α處理,采用和Western blot的方法,分析檢測A20蛋白的表達,觀察增加細(xì)胞內(nèi)O-GlcNAc修飾水平對TNF-α誘導(dǎo)的A20表達... 

【文章來源】：揚州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Thiamet-G預(yù)處理對丁?TNF-a誘導(dǎo)的A20mRNA表達的影響

OGA降低細(xì)胞內(nèi)的0-GlcNAc修飾水平的同時，細(xì)胞內(nèi)TNF-a誘導(dǎo)的A20蛋白表達增高，見圖6。A- B.control OGT甲.… 1 1 * GvfthideTNF-a ^ ^ ? I U— 丨 >f< J■ iNF-a> 2.5 ‘....... tC TA20 ‘ ‘ 參一. ￡ 15:l.......Tubulin lew °control OGTC- D.OGA control — * O vehicleTNF-a — + — + ^ 7.0 I 6,15 I j；巧 圓！!！A20 MKHW 參 ? ? ； o 、。 ■ > 4.0 3,36■丨：丨丨「■ ：_ “ ： ： ■ I - ‘ - ■"T"u b UI i n OGA control圖6分別)4J OGT/OGA感染RASMCs western bolt方法檢測A20蛋內(nèi)的表達情況注：圖A給予攜帶OGT的脫病毐載體感染RASMCs24h,再給予TNF-a (lOmg/ml)處理6h,細(xì)胞內(nèi)蛋白的O-GlcNAc水平升高的同時A20的蛋白表達降低，圖B表示imageJ軟件處理灰度值的柱

揚州人學(xué)碩I:論義給予攜帶OGA的腺病毒載體感染RASMCs24h，再給予TNF-a ( lO0-GlcNAc水平降低的同時A20的蛋內(nèi)表達增加；圖D是image.丨P<0.05。增加細(xì)胞內(nèi)的O-GkNAc修飾水平后，A20蛋白的泛素化 先給予 Thiamet-G 150nM 預(yù)處理 Ih，再給予 TNF-a(10m體進行免疫共沉淀，研究Thiamet-G預(yù)處理增加細(xì)胞內(nèi)的本身的泛素化水平。研究發(fā)現(xiàn)：增加細(xì)胞內(nèi)的0-GlcNAc，這點能夠說明在細(xì)胞內(nèi)的O-GlcNAc修飾水平上調(diào)后,A20A20蛋白的表達卻輕度降低，可能就是通過上調(diào)0-GlcNAc化降解。見圖7。RASMC

【參考文獻】：
期刊論文
[1]O-GlcNAc修飾在谷氨酰胺誘導(dǎo)LPS干預(yù)的大鼠心肌細(xì)胞HSP70表達中的作用[J]. 龔俊松,景亮.  中華麻醉學(xué)雜志. 2010 (04)
[2]蛋白質(zhì)O-GlcNAc糖基化及其細(xì)胞生物學(xué)功能[J]. 楊新穎,李靜,耿美玉.  細(xì)胞生物學(xué)雜志. 2007(05)
[3]核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB對大鼠血管球囊損傷后新生內(nèi)膜形成的作用[J]. 周俊,陸國平,吳春芳,陳楨玥.  上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2006(08)



本文編號：3084919