發(fā)布時(shí)間：2021-03-15 18:48

　　目的:用過表達(dá)Islet-1基因的慢病毒感染小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10T1/2并誘導(dǎo)其向心肌樣細(xì)胞的特異分化。通過檢測激活或抑制Akt活性的情況下,Islet-1與GCN5蛋白質(zhì)結(jié)合量的變化情況,研究在此過程中Akt與Islet-1/GCN5蛋白質(zhì)復(fù)合體的關(guān)系,以此深入探討間充質(zhì)干細(xì)胞特異性誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞的調(diào)控機(jī)制。方法:1.將生長狀況良好的間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10T1/2以5×10⁴個(gè)/瓶的密度鋪在專用細(xì)胞培養(yǎng)瓶中,待細(xì)胞匯合度為20³0%時(shí)用攜帶GFP或Islet-1基因的慢病毒感染細(xì)胞。96h后流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞感染效率;Western blot、細(xì)胞免疫熒光檢測感染后細(xì)胞Islet-1、cTnT和Cx43蛋白質(zhì)水平及定位;倒置顯微鏡、熒光顯微鏡觀察感染后細(xì)胞形態(tài)學(xué)方面的變化;qRT-PCR技術(shù)檢測心肌特異性基因GATA4、Nkx2.5、Mef2c mRNA時(shí)序性改變情況。2.分別利用Akt激活劑IGF-1、Akt特異性抑制劑MK-2206作用Islet-1慢病毒感染后的細(xì)胞,CCK-8法檢測加入IGF-1后對病毒感染后細(xì)胞活力的影... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

熒光顯微鏡觀察熒光蛋白GFP的表達(dá)情況(*100)

流式細(xì)胞儀檢測各組Islet-1慢病毒的感染效率

WesternBlot檢測各組細(xì)胞Islet-1蛋白質(zhì)水平Fig.3TheproteinlevelsofIslet-1byWesternBlot

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]PI3K/AKT信號通路在SK-N-SH細(xì)胞中對增殖和分化的影響[J]. 雷璐璐,王珊,劉苗,馮瑞華.  重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(08)
[2]Akt特異性抑制劑MK2206誘導(dǎo)U937及RS4;11細(xì)胞凋亡及其機(jī)制[J]. 周俊,曹江,孟凡靜,馮浩,徐開林.  中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 2015(03)
[3]DNA甲基化數(shù)據(jù)分析方法和軟件應(yīng)用[J]. 付利娟,夏映曦,何俊琳,劉學(xué)慶,陳雪梅,王應(yīng)雄,丁裕斌.  重慶醫(yī)學(xué). 2012(17)
[4]Islet-1在乙�；{(diào)控網(wǎng)絡(luò)中特異性輔助C3H10T1/2細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化[J]. 林建萍,田杰,劉官信,魯榮,劉建平,智深深,朱靜.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2012(04)
[5]小鼠Islet-1基因慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及其誘導(dǎo)C3H10T1/2細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞特異性分化[J]. 智深深,田杰,劉官信,魯榮,林建萍,劉建平,朱靜.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2011(07)
[6]MSCs心肌樣細(xì)胞分化過程中GCN5募集促分化相關(guān)蛋白的篩選[J]. 周娜,朱靜,田杰,李婭莎,鄧兵,張亞蘭,智深深.  中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2010(01)
[7]組蛋白乙酰化修飾在基因表達(dá)調(diào)控中的作用機(jī)制[J]. 管曉翔,陳龍邦.  中華腫瘤防治雜志. 2007(04)



本文編號：3084641