目的：觀察血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）對人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVECs）細胞活力及Fractalkine（FKN）和細胞間粘附分子-1（ICAM-1）蛋白表達的影響,通過小RNA干擾技術(shù)阻斷內(nèi)皮細胞FKNmRNA的表達,研究FKN在AngⅡ誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞ICAM-1蛋白表達中的作用。方法：取生長良好的HUVECs,分別給予低（10-7mol/l）、高（10-6mol/l）濃度的AngⅡ干預(yù)0、12、24、48小時,采用MTT法檢測內(nèi)皮細胞活力,Western blotting法檢測ICAM-1和FKN蛋白的表達；采用小RNA干擾技術(shù),根據(jù)FKN mRNA序列,選擇3個靶點,合成3條FKN siRNA片段,通過脂質(zhì)體（lipofectamine2000）轉(zhuǎn)染至內(nèi)皮細胞,實時熒光定量PCR （Real-Time PCR）檢測內(nèi)皮細胞FKNmRNA表達情況并篩選出有效片段；采用有效的FKN siRNA片段轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細胞后,通過高濃度AngⅡ（10-6mol/l）干預(yù)24小時,RT-PCR檢測各組內(nèi)皮細胞FKN mRNA表達,Western blotting法檢測內(nèi)皮細胞ICAM-1及FKN蛋白的表達... 

【文章來源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

MTT法檢測Angll對內(nèi)皮細胞活力的影響

碩士學(xué)位論文 3結(jié)果3.5不同作用時間血管緊張素II對內(nèi)皮細胞ICAM-1蛋白表達的影響給予濃度為l(r6mom的Angll分別處理HUVECs細胞0、12、24、48小時，收集內(nèi)皮細胞，Western blotting法檢測ICAM-1蛋白。與對照組(0小時)相比，各組ICAM-1蛋白表達均顯著增高。見圖4。a lo C d

碩士學(xué)位論文 3結(jié)果3.10 FKN siRNA轉(zhuǎn)染對Angll誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞ICAM-1蛋白表達影響內(nèi)皮細胞經(jīng)FKN siRNA-lipo2000轉(zhuǎn)染6小時后，予以Angll (10"W/1)干預(yù)24小時,并通過Western blotting檢測ICAM-1蛋白表達。與陰性對照+AngII組相比，F(xiàn)KNsiRNA+Angll組內(nèi)皮細胞ICAM-1蛋白表達顯著降低。見圖8。


本文編號：3076637