心肌缺血再灌注（I/R）損傷是心臟缺血恢復(fù)血流灌注后損傷加重的現(xiàn)象,其損傷細胞死亡本質(zhì)與細胞凋亡相關(guān)。近年來發(fā)現(xiàn)在心絞痛冠脈解痙、心肺腦復(fù)蘇等情況下均有I/R發(fā)生,是造成術(shù)后病人病情惡化的重要原因之一,因此尋找減輕I/R的方法已成為一個新的研究熱點。GDF15作為一種應(yīng)激反應(yīng)蛋白,生理情況下在前列腺和胎盤中高表達,在其他大多數(shù)組織中微量表達;但在生理病理和環(huán)境應(yīng)激情況下,如I/R損傷、動脈粥樣硬化、心臟高壓力負荷和心力衰竭,GDF15在心肌細胞中均大量表達,對心肌細胞的結(jié)構(gòu)和凋亡發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。因此,GDF15可以被看做心血管疾病的標志物。目的:首先構(gòu)建GDF15慢病毒表達載體,包裝病毒,建立GDF15穩(wěn)定過表達的心肌細胞株,之后檢測GDF15蛋白對H9c2心肌細胞缺氧/復(fù)氧（H/R）損傷凋亡的保護性作用及對自噬的影響;繼而阿司匹林（Asp）預(yù)處理觀察H9c2心肌細胞H/R后GDF15的表達水平,以及Asp通過提高GDF15蛋白表達對細胞凋亡的保護性作用和對自噬的影響。明確GDF15蛋白以及Asp心肌保護作用的機制,為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法:第一部分1.GDF15穩(wěn)定過表達細胞株H... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

GDF15TA克隆酶切電泳，酶切后目的條帶大小為912bp，條帶位置正確Fig.1-5GDF15TAcloningdigestionelectrophoresis,digestionafterthetargetbandsizeof912bp,strippositioniscorrect1000bp

GDF15-EF1-Puro 質(zhì)粒酶切電泳，酶切后目的條帶大GDF15-EF1-Puro plasmid was digested by restriction eas 912 bp, and the band position was correct前一條帶為酶切后的 pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro 載帶AC 1-EF1-Puro 測序的 pCDH-CMV-GD15-EF1-Puro 質(zhì)粒送 500 μ進行測序。GDF15 基因測序結(jié)果與 NCBI 檢索兩序列完全匹配。證明 GDF15 重組慢病毒質(zhì)裝和功能研究（圖 1-7）。

圖 1-6 pCDH-CMV-GDF15-EF1-Puro 質(zhì)粒酶切電泳，酶切后目的條帶大小 912 bp，條帶位置正確Fig. 1-6 PCDH-CMV-GDF15-EF1-Puro plasmid was digested by restriction enzyme digestion.The size of the band was 912 bp, and the band position was correct注：A：Marker；B：前一條帶為酶切后的 pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro 載體，后一條帶為酶切后的 GDF15 目的條帶2. pCDH-CMV--HDAC 1-EF1-Puro 測序酶切鑒定正確的 pCDH-CMV-GD15-EF1-Puro 質(zhì)粒送 500 μL 菌液由金唯智生物科技有限公司進行測序。GDF15 基因測序結(jié)果與 NCBI 檢索后大鼠 GDF15序列 Blast 比對，兩序列完全匹配。證明 GDF15 重組慢病毒質(zhì)粒構(gòu)建成功，可用于后續(xù)慢病毒包裝和功能研究（圖 1-7）。1000 bp

【參考文獻】：
期刊論文
[1]阿司匹林抑制NF-κB激活減輕心肌缺血再灌注損傷[J]. 汪永義,薛松,劉沙,蕭明第.  醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報. 2003(02)
[2]大鼠局灶性腦缺血后─氧化氮合酶活性與細胞凋亡關(guān)系[J]. 韓群穎,顧振,王鶴鳴,彭滔,蘇殿三.  南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2002(02)



本文編號：3066309