目的：通過攜帶miRNA-1的慢病毒載體（Lentivirus vector,LV）轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells），觀察miR-1過表達(dá)慢病毒載體轉(zhuǎn)染的BMSCs移植治療大鼠心肌梗死（Myocardia infarction,MI）的作用及其相關(guān)機(jī)制，以期為心肌梗死尋找新的治療策略。方法：以全骨髓培養(yǎng)法獲取BMSCs，并予以擴(kuò)增、鑒定；構(gòu)建攜帶綠色熒光蛋白（GFP）的miR-1慢病毒載體并轉(zhuǎn)染BMSCs，建立miRNA-1基因修飾BMSCs（GFP作為細(xì)胞標(biāo)記）；通過冠狀動脈左前降支結(jié)扎法建立大鼠心肌梗死（AMI）模型。將30只大鼠通過隨機(jī)平分法分為空白對照組、假手術(shù)組（Sham組）、心肌梗死組（Vehic組）、未轉(zhuǎn)染病毒組（BMSCs組）、miR-1重組慢病毒組（miR-1/BMSCs組），每組6只，在AMI建模1天后，經(jīng)尾靜脈注射途徑分別以100μl生理鹽水或2×106/100μl相應(yīng)BMSCs分別干預(yù)各實驗組并繼續(xù)飼養(yǎng)28天。分別于建模前及建模后28天超聲心動圖觀察心臟功能及結(jié)構(gòu)改變；飼養(yǎng)28天后處死大鼠，留取血液... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

BMSCs形態(tài)學(xué)變化

BMSCs 流式細(xì)胞鑒定體的構(gòu)建的質(zhì)粒，PCR 產(chǎn)物經(jīng)電泳示在 289bp 處有條明大小相符，表明已成功獲取 miR-1 基因（見段（見圖 3）。 3 酶切獲取目的基因質(zhì)粒（2: pGC-FU Vector;3: pGC-FU Vector EcoR I 酶切marker 1 2

并與目的基因片段大小相符，表明已成功獲取 miR-1 基因（見圖3A）。同樣方法獲取載體基因片段（見圖 3）。圖 3 酶切獲取目的基因A 酶切目的基因質(zhì)粒，B 酶切載體質(zhì)粒（2: pGC-FU Vector;3: pGC-FU Vector EcoR I 酶切產(chǎn)物）3.2.2 重組慢病毒載體構(gòu)建及鑒定將目的基因片段交換入線性化表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌，構(gòu)建的GV320-miR-1 陽性克隆 PCR 產(chǎn)物電泳示在 5 至 12 泳道均出現(xiàn) 3822bp 的條帶（見圖 4），陽性克隆質(zhì)粒 DNA 測序結(jié)果顯示，重組質(zhì)粒中插入的基因序列與目的基因序列一致，表明 miR-1 過表達(dá)慢病毒載體構(gòu)建成功。CD45CD34CD44 CD29marker目的基因marker 1 2

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]發(fā)育心肌和心肌干細(xì)胞分化后心肌特異蛋白表達(dá)的比較研究[J]. 賀其志,譚玉珍,王海杰,孫麗莉.  中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報. 2011(04)
[2]大鼠骨髓MSCs表面分子檢測及誘導(dǎo)分化研究[J]. 王剛,呂同德,馬靜,常雅萍.  中國實驗診斷學(xué). 2008(01)
[3]移植時機(jī)對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)梗死心肌的影響[J]. 曹豐,賈國良,牛麗麗,張鵬,焦文倉,王冬梅,李艷華,裴雪濤.  第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2005(01)
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本文編號：3055578