目的:APJ受體蛋白作為一種七次跨膜的G蛋白偶聯(lián)受體,與其內(nèi)源性活性肽配體Apelin所形成的Apelin/APJ系統(tǒng)在心血管疾病的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。實(shí)驗(yàn)室前期報(bào)道Apelin-13/APJ系統(tǒng)通過(guò)誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)自噬途徑促進(jìn)心肌細(xì)胞肥大,此外Western Blot的結(jié)果發(fā)現(xiàn),Apelin-13促進(jìn)大鼠心肌細(xì)胞H9C2中Pannexin-1、FAM134B、自噬蛋白LC3以及細(xì)胞肥大因子ANP、BNP的表達(dá)。本文擬采用大鼠心肌細(xì)胞H9C2和小鼠心房肌細(xì)胞HL-1研究Apelin-13對(duì)Pannexin-1的蛋白水平、Pannexin-1半通道的開(kāi)放、FAM134B的水平、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)自噬和心肌細(xì)胞肥大的作用,在前期基礎(chǔ)上進(jìn)一步驗(yàn)證Apelin-13能否通過(guò)影響Pannexin-1蛋白的表達(dá),并激活Pannexin-1半通道從而誘導(dǎo)FAM134B依賴性內(nèi)質(zhì)網(wǎng)自噬,作用于大鼠心肌細(xì)胞H9C2和小鼠心房肌細(xì)胞HL-1致使細(xì)胞肥大,從而揭示Apelin-13/APJ系統(tǒng)在心血管疾病中的作用機(jī)制,為將APJ受體作為心肌肥厚治療的靶標(biāo)提供新的理論基礎(chǔ)。方法:1.RNA干擾:設(shè)計(jì)干擾鏈SiRNA-FA... 

【文章來(lái)源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁(yè)數(shù)】：105 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Apelin-13促進(jìn)了Pannexin-1在H9C2和HL-1細(xì)胞中的表達(dá)

18圖2.Apelin-13激活了H9C2和HL-1細(xì)胞中的Pannexin-1半通道。（A）染料轉(zhuǎn)移試驗(yàn)的結(jié)果表明，Apelin-13（1μM，24h）促進(jìn)大鼠H9C2心肌細(xì)胞和小鼠HL-1心房肌細(xì)胞對(duì)LY的攝取，而F13A（1μM，24h）抑制Apelin-13所誘導(dǎo)的LY的攝齲（B）染料轉(zhuǎn)移測(cè)定的結(jié)果表明，CBX（10μM，24h）抑制Apelin-13（1μM，24h）所誘導(dǎo)的大鼠H9C2心肌細(xì)胞和小鼠HL-1心房肌細(xì)胞對(duì)LY的攝齲（C）染料轉(zhuǎn)移試驗(yàn)的結(jié)果表明，PBC（200μM，24h）抑制Apelin-13（1μM，24h）所誘導(dǎo)的大鼠H9C2心肌細(xì)胞和小鼠HL-1心房肌細(xì)胞對(duì)LY的攝齲（D）ATP檢測(cè)試劑盒的分析結(jié)果表明，Apelin-13（1μM，24h）降低大鼠H9C2心肌細(xì)胞和小鼠HL-1心房肌細(xì)胞內(nèi)ATP水平，而F13A（1μM，24h）處理可逆轉(zhuǎn)Apelin-13降低的胞內(nèi)ATP水平。（E）ATP檢測(cè)試劑盒的分析結(jié)果表明，CBX（10μM，24h）逆轉(zhuǎn)Apelin-13（1μM，24h）降低的大鼠H9C2心肌細(xì)胞和小鼠HL-1心房肌細(xì)胞內(nèi)ATP水平。（F）ATP檢測(cè)試劑盒的分析結(jié)果表明，PBC（200μM，24h）逆轉(zhuǎn)Apelin-13（1μM，24h）降低的大鼠H9C2心肌細(xì)胞和小鼠HL-1心房肌細(xì)胞內(nèi)ATP水平。所有數(shù)據(jù)均為平均值±SD（n=3，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.005，****p<0.001與對(duì)照組相比；＃p<0.05，##p<0.01，###p<0.005，####p<0.001與Apelin-13組相比）。Figure.2Apelin-13activatedthePannexin-1hemichannelinH9C2andHL-1cells.(A)ResultsfromdyetransferassaydemonstratedthatexposureofH9C2andHL-1cellstoApelin-13(1μM,24h)promotedtheuptakeofLY,butF13A(1μM,24h)treatmentreducedtheApelin-13-inducedLYuptake.(B)ResultsfromdyetransferassaydemonstratedthatCBX(10μM，24h)treatmentattenuatedtheApelin-13-inducedLYuptakeinH9C2andHL-1cells.(C)Resultsfromdyetransfera

21圖3.Apelin-13通過(guò)激活H9C2和HL-1細(xì)胞中的Pannexin-1半通道來(lái)促進(jìn)自噬。（A）免疫熒光的結(jié)果表明，Apelin-13（1μM，24h）促進(jìn)大鼠H9C2心肌細(xì)胞和小鼠HL-1心房肌細(xì)胞中KDEL（紅色）與LC3B（綠色）的共定位，但F13A抑制Apelin-13誘導(dǎo)的KDEL與LC3B共定位。（B）免疫熒光的結(jié)果表明，CBX（10μM，24h）抑制Apelin-13誘導(dǎo)的大鼠H9C2心肌細(xì)胞和小鼠HL-1心房肌細(xì)胞中KDEL與LC3B的共定位。（C）免疫熒光的結(jié)果表明，PBC（200μM，24h）抑制Apelin-13誘導(dǎo)的大鼠H9C2心肌細(xì)胞和小鼠HL-1心房肌細(xì)胞中KDEL與LC3B的共定位。（D）免疫熒光的結(jié)果表明，Apelin-13（1μM，24h）促進(jìn)大鼠H9C2心肌細(xì)胞和小鼠HL-1心房肌細(xì)胞中KDEL（紅色）與CD63（綠色）的共定位，但F13A抑制Apelin-13誘導(dǎo)的KDEL與CD63共定位。（E）免疫熒光的結(jié)果表明，CBX（10μM，24h）抑制H9C2和HL-1中Apelin-13所誘導(dǎo)的KDEL與CD63的共定位。（F）免疫熒光的結(jié)果表明，PBC（200μM，24h）抑制H9C2和HL-1中Apelin-13所誘導(dǎo)的KDEL與CD63的共定位。（20×10）Figure.3Apelin-13promotedreticulophagybyactivatingthePannexin-1hemichannelinH9C2andHL-1cells.(A)ResultsfromImmunofluorescencedemonstratedthatexposureofH9C2andHL-1cellstoApelin-13(1μM,24h)promotedtheexpressionofthecolocalizationofKDEL(red)withLC3B(green),butF13A(1μM,24h)treatmentattenuatedtheApelin-13-inducedthecolocalizationofKDELwithLC3B.(B)ResultsfromImmunofluorescencedemonstratedthatCBX(10μM,24h)


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