背景:成纖維細胞是心臟內(nèi)的重要細胞組成成分,成纖維細胞的功能變化與心肌細胞聯(lián)系緊密,直接影響到心肌的的發(fā)育、肥大、機械和電學的活動。心臟成纖維細胞的表型轉(zhuǎn)化（fibroblast myofibroblast transition,FMT）與心肌炎癥、心肌肥大以及心肌梗死預后密切相關。在外界刺激下,成纖維細胞增殖、分化,分泌大量的細胞外基質(zhì)（extra-cellular matrix proteins,ECM）,從而引起心臟纖維化,發(fā)生纖維化重構,誘發(fā)心律失常以及降低心臟功能。近年來發(fā)現(xiàn)鈉/鈣交換蛋白（Sodium/calcium exchange protein,NCX）、鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶II（Calcium/calmodulin dependent protein kinase II,CaMKII）是重要的介導FMT的信號分子,其中CaMKII直接介導了血管緊張素II（Angiotensin II,AngⅡ）誘導的FMT。本課題組前期已經(jīng)證實心外膜高表達血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2（Angiotensin converting enzyme 2,ACE2）可以增加心房肌中血管緊張素-... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：141 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
英漢縮略語名詞對照
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 ：Ang-（1-7）抑制NCX1及CaMKII活性降低AngⅡ誘導的成纖維細胞增殖和表型轉(zhuǎn)化
    1 主要材料和儀器設備
        1.1 主要試劑和材料
        1.2 主要試劑的配制
        1.3 主要實驗儀器
    2 實驗方法
        2.1 新生SD乳鼠原代心臟成纖維細胞培養(yǎng)與鑒定
        2.2 細胞實驗分組
        2.3 AngⅡ誘導成纖維細胞表型轉(zhuǎn)化模型
        2.4 成纖維細胞NCX1、NCX3亞型的表達
        2.5免疫熒光檢測α-SMA、KI67
        2.6 DHE檢測細胞內(nèi)ROS
        2.7 Western blot
        2.8 細胞內(nèi)鈣離子檢測
        2.9 一氧化氮檢測
        2.10 定量PCR
        2.11 統(tǒng)計學分析
    3 結(jié)果
        3.1 成纖維細胞鑒定結(jié)果
        3.2 AngⅡ有效的藥物濃度和處理時間
        3.3 NCX1及NCX3在成纖維細胞及心臟中的表達
        3.4 NCX1、CaMKII激活與成纖維細胞表型轉(zhuǎn)化
        3.5 .細胞內(nèi)活性氧水平
        3.6 Western blot結(jié)果
        3.7 細胞內(nèi)鈣離子變化
        3.8 定量PCR檢測膠原交聯(lián)相關基因的表達
    4 討論
    小結(jié)
    參考文獻
第二部分 ：Ang-（1-7）/eNOS通路激活抑制AngⅡ/CaMKII誘導的大鼠心臟纖維化重構
    1 主要材料和儀器設備
        1.1 主要試劑和材料
        1.2 主要試劑的配制
        1.3 主要實驗儀器
    2 實驗方法
        2.1 AngⅡ誘導的Sprague Dawley大鼠纖維化模型建立
        2.2 模型組大鼠血壓的檢測
        2.3 Western blot
        2.4 病理組織學檢查
    3 結(jié)果
        3.1 AngⅡ誘導的大鼠心臟纖維化重構
        3.2 動物心臟DHE染色結(jié)果
        3.3 動物心臟組化染色結(jié)果
        3.4 動物心臟免疫熒光染色結(jié)果
        3.5 動物心臟Western blot結(jié)果
    4 討論
    小結(jié)
    參考文獻
第三部分 ：Cx43依賴性的CaMKII和TGF-β1信號通路介導AngⅡ誘導的心臟成纖維細胞表型轉(zhuǎn)化
    1 主要材料和儀器設備
        1.1 主要試劑和材料
        1.2 主要實驗儀器
    2 實驗方法
        2.1 實驗分組
        2.2 Western blot檢測
        2.3 細胞熒光免疫雙標檢測Cx43與α-SMA
        2.4siRNA轉(zhuǎn)染干擾TGF-β1
        2.5 免疫組化檢測心肌組織Cx43的表達
        2.6 免疫熒光雙標檢測心肌組織中Cx43與α-SMA的表達
    3 結(jié)果
        3.1 Ang-（1-7）及AIP抑制心機肥大及纖維化
        3.2 抑制CaMKII活性恢復心室肌Cx43表達
        3.3 抑制CaMKII激活增加成纖維細胞Cx43表達
        3.4 Westren blot檢測心肌中CaMKII的表達
        3.5 AngⅡ促進體外培養(yǎng)的成纖維細胞Cx43表達
        3.6 TGF-β1si-RNA抑制成纖維細胞Cx43的表達
        3.7 抑制CaMKII活性降低成纖維細胞中Cx43、α-SMA的表達
    4 討論
    小結(jié)
    參考文獻
全文總結(jié)
文獻綜述
    參考文獻
致謝
攻讀博士學位期間完成的論文



本文編號：2990080