研究背景和目的:衰老是多種因素共同作用引起的器官、組織的老化及功能衰退。隨著生活水平的提高及人口老齡化的加劇,衰老及衰老相關(guān)疾病的發(fā)病率顯著升高。引起衰老的病理因素較多,其中過(guò)度的氧化應(yīng)激反應(yīng)是引起衰老發(fā)生的主要原因之一。NAD⁺作為氧化還原反應(yīng)的關(guān)鍵輔酶在調(diào)控細(xì)胞代謝中起重要作用。研究表明伴隨年齡的增長(zhǎng),細(xì)胞內(nèi)NAD⁺含量顯著性下降。在哺乳類細(xì)胞內(nèi),CD38是NAD⁺主要水解酶,在調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)NAD⁺水平上扮演重要角色。我們前期工作表明,CD38基因敲除鼠明顯耐受AngII誘導(dǎo)的心肌肥大,保護(hù)心臟缺血/再灌注損傷以及明顯減輕高脂飲食誘導(dǎo)的心臟氧化應(yīng)激損傷。然而,CD38在心臟衰老中的作用尚未見(jiàn)報(bào)道。因此,本課題將應(yīng)用CD38敲減的心肌細(xì)胞系,探討CD38介導(dǎo)的NAD⁺代謝途徑在心肌細(xì)胞衰老模型中的作用及其分子機(jī)制,以期為延緩心臟衰老提供新的預(yù)防和治療的作用靶點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)方法:1.心肌細(xì)胞衰老模型的制備及其分析:H9c2細(xì)胞和CD38敲減的H9c2細(xì)胞分別給予10 g/L的D-半乳糖... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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-半乳糖誘導(dǎo)H9c2細(xì)胞衰老并增加CD10g/LD-gal處理細(xì)胞48h后衰老細(xì)胞數(shù)量；（

25圖 2 NAD+代謝通路關(guān)鍵酶在自然衰老小鼠中顯著下調(diào)。（A）和（B）WB 檢測(cè)大小約 1 月齡和 12 月齡小鼠心臟組織中 p16 的蛋白表達(dá)水平及定量分析；（C）Q-PCR 檢測(cè)大小約 1 月齡和 12 月齡小鼠心臟組織中 p16 的 mRNA 水平；（D）、（E）和（F）分別表示 WB 檢測(cè)大小約 1 月齡和 12 月齡小鼠心臟組織中 Sirt1、NAMPT 的蛋白表達(dá)水平及定量分析; （G）Q-PCR 檢測(cè)大小約 1 月齡和 12 月齡小鼠心臟組織中 NAMPT 的 mRNA 水平。P*＜0.05，P**＜0.01，P ***＜0.001，n=3。

圖 3 CD38 干擾減輕 D-gal 誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞衰老。（A）和（B）分別表示 WB 檢測(cè) H9c2 心肌細(xì)胞系中 CD38 基因的干擾效率及蛋白定量分析；（C）利用 β-半乳糖苷酶染色法檢測(cè) 10g/LD-gal 處理 CD38 干擾心肌細(xì)胞系 48h 后衰老細(xì)胞數(shù)量；（D）、（E）和（F）分別表示 WB檢測(cè)D-gal誘導(dǎo)CD38干擾心肌細(xì)胞系中p16及p21的蛋白表達(dá)及蛋白定量分析。P*＜0.05，P **＜0.01，P ***＜0.001，n=3。3.4 CD38 干擾降低 D-gal 誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞的氧化應(yīng)激水平衰老的發(fā)生時(shí)常伴有細(xì)胞內(nèi)氧自由基的增加。同時(shí)我們也發(fā)現(xiàn) D-gal 刺激細(xì)胞后可以引起細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激水平的增加。因此，我們進(jìn)一步探討 CD38 在 D-gal 誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化應(yīng)激中的作用。文獻(xiàn)及我們已發(fā)表的數(shù)據(jù)都表明 CD38 敲除顯著增加細(xì)胞內(nèi) NAD+的含量。Sirt 家族蛋白是以 NAD+為底物的去乙酰化酶，NAD+含量增加會(huì)顯著增加 Sirt 的酶活性。我們首先用 Western blot 檢測(cè)了總蛋白的乙�；揭蚤g接反映 Sirt 的酶活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，D-gal 刺激顯著增加蛋白的乙�；剑f(shuō)明 D-gal 降低了 Sirt 的去乙�；富钚�。而 CD38干擾在有無(wú) D-gal 刺激下都顯著降低總蛋白的乙酰化水平，表明 CD38 敲減能增


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