心肌缺血是心血管疾病高死亡率的主要原因（每年死亡人數(shù)達(dá)到740萬人）,與心肌細(xì)胞的大量死亡息息相關(guān)。其發(fā)病機(jī)理主要有兩種:一種是由動(dòng)脈粥樣硬化、血管炎、血栓等引起的冠狀動(dòng)脈循環(huán)受阻;另一種是由血管舒縮功能失調(diào)導(dǎo)致的血液運(yùn)輸動(dòng)力不足。當(dāng)心臟不能及時(shí)供應(yīng)足夠的血液時(shí),缺氧、營(yíng)養(yǎng)匱乏、銅離子流失及有毒代謝產(chǎn)物積累等細(xì)胞微壞境的變化,將導(dǎo)致心肌細(xì)胞大量的死亡,造成心臟功能的不可逆損傷。因此,抑制心肌細(xì)胞死亡對(duì)于心肌缺血的治療是至關(guān)重要的。鞘氨醇磷酸膽堿（SPC）是一種內(nèi)源性產(chǎn)生的,具有生物活性的鞘磷脂代謝物。我們實(shí)驗(yàn)室前期的研究表明SPC能夠抑制缺血引起的心肌細(xì)胞凋亡。由于SPC發(fā)揮生物功能的形式多樣（既可以直接影響細(xì)胞膜上的G蛋白偶聯(lián)受體,又可以影響細(xì)胞質(zhì)中鈣離子濃度）,為了進(jìn)一步探究SPC抑制心肌細(xì)胞凋亡的機(jī)制,我們運(yùn)用芯片分析了可能參與該保護(hù)過程的基因。芯片結(jié)果顯示Epas1和Egr1發(fā)生了明顯變化,因此推測(cè)它們可能是SPC調(diào)節(jié)凋亡的關(guān)鍵因子。EPAS1,也叫HIF2α,是HIF家族成員,能夠迅速地對(duì)氧濃度的改變做出反應(yīng)。在HIF家族中HIF1被研究地更多并且被認(rèn)為具有促凋亡作用。而EP... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１：?ｓｔａｔ３的結(jié)構(gòu)和磷酸化位點(diǎn)［１０６］??ＳＴＡＴ３的轉(zhuǎn)錄活性主要是取決于由Ｔｙｒ７０５形成的磷酸化二聚體

??路。通過免疫焚光，我們發(fā)現(xiàn)ＳＰＣ促進(jìn)了?ＳＴＡＴ３的入核（圖３－４?Ａ），ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ??表明ＳＰＣ能夠上調(diào)ＳＴＡＴ３的磷酸化水平（圖３－４?Ｂ）。并且加入ＳＴＡＴ３的抑制劑??ｓｔａｔｔｉｃ處理后，ＳＰＣ的保護(hù)作用被破壞（圖３－４?Ｃ）。說明了?ＳＴＡＴ３參與了?ＳＰＣ抑??制缺血性心肌細(xì)胞凋亡的通路。用ｓｔａｔｔｉｃ抑制劑處理Ｈ９ｃ２后，ＱＰＣＲ檢測(cè)??ｍｉＲ－１５５－５ｐ的變化，發(fā)現(xiàn)ＳＰＣ引起的ｍｉＲ－１５５－５ｐ下調(diào)作用被抑制，說明ＳＴＡＴ３??確實(shí)是ｍｉＲ－１５５－５ｐ的上游因子（圖３－４Ｄ）。??討論??ＳＰＣ是生物體內(nèi)天然存在的具有生物活性的脂類代謝產(chǎn)物，能夠影響細(xì)胞在??增殖、分化、凋亡和自噬。前期報(bào)道指出ＳＰＣ通過影響脂筏、促進(jìn)細(xì)胞自噬、??調(diào)控ｍＴＯＲ和ＪＮＫ的活性等方式抑制心肌細(xì)胞的凋亡。本研究中，我們發(fā)現(xiàn)了??一個(gè)新的受ＳＰＣ調(diào)控的因子，ＥＰＡＳ１。ＥＰＡＳ１是一個(gè)多功能的轉(zhuǎn)錄因子，在缺??血性心肌細(xì)胞凋亡方面的研究還沒有報(bào)道。我們的研究揭示了?ＥＰＡＳ１在缺血性??心肌細(xì)胞凋亡中的功能，發(fā)現(xiàn)ＳＰＣ是通過對(duì)ＥＰＡＳ１的調(diào)控起到抑制凋亡的作用??的。本研宄更為全面的闡釋了?ＳＰＣ發(fā)揮作用的分子機(jī)制

ｆ?ｊ?＾?—３?Ｐ－＿｜?｜??ｎｅｇ?ｓｉＥＰＡＳＩ?Ｐ－ａｃｔｉｎ?￣?〇?〇??圖３－１?ＳＰＣ上調(diào)ＥＰＡＳ１的表達(dá)，抑制心肌細(xì)胞的凋亡。??Ｈ９ｃ２去血清同時(shí)添加ＳＰＣ處理１２?ｈ?（Ａ）?ＱＰＣＲ和ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?（Ｂ）檢測(cè)??ＥＰＡＳ１的變化。（Ｃ）免疫熒光檢測(cè)ＥＰＡＳ１的核位移變化。（Ｄ）向Ｈ９ｃ２轉(zhuǎn)染??３０??


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