整合素β3在缺氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡中的作用研究
發(fā)布時間：2021-01-03 10:33
研究目的:細(xì)胞凋亡在缺血性心臟病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著非常重要的作用,心肌細(xì)胞凋亡是導(dǎo)致心梗后心衰和預(yù)后的重要因素。整合素β3在心肌細(xì)胞增殖和凋亡的雙向調(diào)控中發(fā)揮重要作用,但其在缺氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡中作用不清,有待進一步闡明,本研究通過探索整合素β3在缺氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡中的作用,為今后的心肌細(xì)胞凋亡干預(yù)治療提供新的有效的靶點。研究方法:用氯化鈷（Co Cl2）或缺氧培養(yǎng)箱培養(yǎng)（1%O2）處理大鼠H9C2心肌細(xì)胞和大鼠原代心肌細(xì)胞,模擬心肌細(xì)胞缺氧微環(huán)境。采用Western blot和實時熒光PCR檢測缺氧對心肌細(xì)胞內(nèi)整合素β3蛋白質(zhì)及m RNA表達(dá)的改變。TUNEL法及Annexin V流式細(xì)胞術(shù)檢測心肌細(xì)胞凋亡。通過冠狀動脈結(jié)扎復(fù)制大鼠急性心梗（AMI）模型,免疫組化法檢測整合素β3和HIF1α的表達(dá)。研究結(jié)果:氯化鈷（Co Cl2）或缺氧培養(yǎng)（1%O2）能誘導(dǎo)H9C2細(xì)胞缺氧微環(huán)境,缺氧可明顯抑制H9C2心肌細(xì)胞增殖,具有時間和劑量依賴性。缺氧并誘導(dǎo)H9C2心肌細(xì)胞凋亡。低氧條件下心肌細(xì)胞中整合素β3和HIF1-α的表達(dá)上調(diào)。干擾整合素β3表達(dá)可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡,并能促進缺氧誘導(dǎo)...
【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：77 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
缺氧抑制H9C2心肌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文法和流式細(xì)胞術(shù)檢測缺氧對心肌細(xì)胞凋亡的影響，TUNEL 結(jié)果顯示，氯化鈷（900μM）或低氧微環(huán)境（1％O ）處理 H9C2 心肌細(xì)胞 24 小時，H9C2 心肌細(xì)胞凋亡水平上升，與對照組相比具有統(tǒng)計學(xué)意義（p < 0.01，圖 1D）。流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果也證實了這個結(jié)果（圖 1E）。因此，這些結(jié)果表明，缺氧微環(huán)境均可以抑制心肌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
detected by real-time PCR in H9C2 cells treated with cobalt chloride for 12 h. (B) Integrin β3 protein expredetected by western blotting in H9C2 cells treated with cobalt chloride for 12 h. (C) Integrin β3 mRNA expredetected by real-time PCR in H9C2 cells treated with cobalt chloride for different times. (D) Integrin βexpression was detected by western blotting in H9C2 cells treated with cobalt chloride for different time Integrin β3 mRNA expression was detected by real-time PCR in H9C2 cells subjected to a hypoxic microenviroO2) for different times. (F) Integrin β3 protein expression was detected by western blotting in H9C2 cells subjhypoxic microenvironment (1% O2) for different times. **P<0.01.3.3 缺氧微環(huán)境誘導(dǎo)大鼠原代心肌細(xì)胞凋亡并促進整合素 β3 表達(dá)為了進一步證實缺氧對心肌細(xì)胞整合素β3 表達(dá)的影響，我們分離、培養(yǎng)鼠原代心肌細(xì)胞。利用氯化鈷誘導(dǎo)的化學(xué)性細(xì)胞缺氧模型分析缺氧對大鼠原細(xì)胞的影響。實驗的結(jié)果顯示，氯化鈷同樣也可以誘導(dǎo)原代心肌細(xì)胞整合素HIF1α的表達(dá)上調(diào)，具有明顯的時間依賴性（圖 3A）。TUNEL 實驗結(jié)果也顯心肌細(xì)胞凋亡率在化學(xué)性細(xì)胞缺氧微環(huán)境中顯著增加，具有統(tǒng)計學(xué)意義（p < 3B）。因此，所以的這些結(jié)果說明缺氧誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡的過程中整合素β3 顯著增加，提示整合素β3 在心肌細(xì)胞凋亡的過程中發(fā)揮重要的作用。
本文編號：2954828
【文章來源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：77 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
缺氧抑制H9C2心肌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文法和流式細(xì)胞術(shù)檢測缺氧對心肌細(xì)胞凋亡的影響，TUNEL 結(jié)果顯示，氯化鈷（900μM）或低氧微環(huán)境（1％O ）處理 H9C2 心肌細(xì)胞 24 小時，H9C2 心肌細(xì)胞凋亡水平上升，與對照組相比具有統(tǒng)計學(xué)意義（p < 0.01，圖 1D）。流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果也證實了這個結(jié)果（圖 1E）。因此，這些結(jié)果表明，缺氧微環(huán)境均可以抑制心肌細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
detected by real-time PCR in H9C2 cells treated with cobalt chloride for 12 h. (B) Integrin β3 protein expredetected by western blotting in H9C2 cells treated with cobalt chloride for 12 h. (C) Integrin β3 mRNA expredetected by real-time PCR in H9C2 cells treated with cobalt chloride for different times. (D) Integrin βexpression was detected by western blotting in H9C2 cells treated with cobalt chloride for different time Integrin β3 mRNA expression was detected by real-time PCR in H9C2 cells subjected to a hypoxic microenviroO2) for different times. (F) Integrin β3 protein expression was detected by western blotting in H9C2 cells subjhypoxic microenvironment (1% O2) for different times. **P<0.01.3.3 缺氧微環(huán)境誘導(dǎo)大鼠原代心肌細(xì)胞凋亡并促進整合素 β3 表達(dá)為了進一步證實缺氧對心肌細(xì)胞整合素β3 表達(dá)的影響，我們分離、培養(yǎng)鼠原代心肌細(xì)胞。利用氯化鈷誘導(dǎo)的化學(xué)性細(xì)胞缺氧模型分析缺氧對大鼠原細(xì)胞的影響。實驗的結(jié)果顯示，氯化鈷同樣也可以誘導(dǎo)原代心肌細(xì)胞整合素HIF1α的表達(dá)上調(diào)，具有明顯的時間依賴性（圖 3A）。TUNEL 實驗結(jié)果也顯心肌細(xì)胞凋亡率在化學(xué)性細(xì)胞缺氧微環(huán)境中顯著增加，具有統(tǒng)計學(xué)意義（p < 3B）。因此，所以的這些結(jié)果說明缺氧誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡的過程中整合素β3 顯著增加，提示整合素β3 在心肌細(xì)胞凋亡的過程中發(fā)揮重要的作用。
本文編號：2954828
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