研究目的:探討1-磷酸鞘氨醇（S1P）及其受體在抑制心肌細(xì)胞自噬、抑制心肌細(xì)胞肥大、保護(hù)心臟功能中所起的作用。研究方法:使用S1P刺激饑餓及PE處理的心肌細(xì)胞,通過(guò)測(cè)定心肌細(xì)胞內(nèi)自噬小體數(shù)量、自噬相關(guān)蛋白、重要的自噬功能基因表達(dá)情況研究其在心肌細(xì)胞自噬中的作用,通過(guò)測(cè)定心肌細(xì)胞面積、肥大相關(guān)基因表達(dá)情況研究其在心肌細(xì)胞肥大中的作用。隨后,使用不同siRNA分別敲低小鼠心肌細(xì)胞三種S1P受體的表達(dá),以確定心肌細(xì)胞中介導(dǎo)S1P信號(hào)通路的受體類(lèi)型。最后,通過(guò)Cas9技術(shù)在小鼠心臟中敲除1-磷酸鞘氨醇受體1（S1PR1）,通過(guò)測(cè)定小鼠心肌細(xì)胞自噬、心肌細(xì)胞肥大程度及心臟功能,驗(yàn)證S1PR1受體在心臟自噬及心肌肥厚中發(fā)揮的作用。研究結(jié)果:S1P干預(yù)后饑餓誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞自噬及PE誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大明顯減弱,表現(xiàn)為心肌細(xì)胞內(nèi)自噬小體形成減少、自噬相關(guān)蛋白LC3II/I、P62及重要的自噬功能基因Atg5、Atg12、Beclinl和LC3B表達(dá)減少,心肌細(xì)胞相對(duì)面積減小,并且心房鈉尿肽（atrial natriuretic factor,ANF）、腦利鈉肽（brain natriuretic pep... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：83 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１：?ＳＩＰ抑制饑餓誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞自噬??Ａ．?ＳＩＰ干預(yù)策略示意圖

（終濃度為ｌ〇〇ｎｍｏｌ／Ｌ）分別對(duì)普通培養(yǎng)及ＰＥ?（終濃度為ｌＯＯ＾ｍｏｉ／Ｌ）處理的心??肌細(xì)胞進(jìn)行刺激，４８小時(shí)后使用ａ－輔肌動(dòng)蛋白（ａ－ａｃｔｉｎｉｎ）進(jìn)行免疫熒光染色，??之后在免疫熒光顯微鏡下觀察拍照并統(tǒng)計(jì)心肌細(xì)胞大�。▓D２－Ａ）。結(jié)果顯示ＰＥ??處理能有效刺激心肌細(xì)胞的肥大生長(zhǎng)，而Ｓ１Ｐ干預(yù)能明顯抑制ＰＥ誘導(dǎo)的心肌細(xì)??胞肥大（圖２－Ｂ）。心肌細(xì)胞肥大増生時(shí)往往會(huì)激活胚胎期基因的表達(dá)，在本研??究中，我們檢測(cè)了心房鈉尿肽（ＡＮＦ）、腦利鈉肽（ＢＮＰ）、肌球蛋白重鏈（ｐ－ＭＨＣ）及??骨骼肌和心肌肌動(dòng)蛋白（ＳＫＡ）等胚胎期基因的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)Ｓ１Ｐ干預(yù)后，ＰＥ??處理的心肌細(xì)胞中這些基因表達(dá)都較對(duì)照組顯著降低（圖２－Ｃ）。以上結(jié)果均表??明，Ｓ１Ｐ可抑制ＰＥ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大。??３０??

此前已有報(bào)道，心肌細(xì)胞上三種Ｓ１Ｐ受體的亞型的表達(dá)數(shù)量為：??Ｓ１ＰＲ１？Ｓ１ＰＲ３＞Ｓ１ＰＲ２，我們通過(guò)?Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ?及?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ?方法檢測(cè)心室??肌細(xì)胞Ｓ１ＰＲ１、Ｓ１ＰＲ２及Ｓ１ＰＲ３三型受體的表達(dá)證實(shí)了此結(jié)論（圖３－Ａ）。隨后，??我們?cè)O(shè)計(jì)了針對(duì)心肌細(xì)胞Ｓ１ＰＲ１、Ｓ１ＰＲ２、Ｓ１ＰＲ３三型受體的ｓｉＲＮＡ，轉(zhuǎn)染乳鼠??心肌細(xì)胞后，我們?cè)谛募〖?xì)胞中成功敲低了?Ｓ１ＰＲ１、Ｓ１ＰＲ２及Ｓ１ＰＲ３三型受體??的表達(dá)（圖３－Ｂ）。??３２??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]《中國(guó)心血管病報(bào)告2017》概要[J]. 陳偉偉,高潤(rùn)霖,劉力生,朱曼璐,王文,王擁軍,吳兆蘇,李惠君,顧東風(fēng),楊躍進(jìn),鄭哲,蔣立新,胡盛壽.  中國(guó)循環(huán)雜志. 2018(01)
[2]心肌細(xì)胞過(guò)表達(dá)miR-27b導(dǎo)致小鼠發(fā)生心肌纖維化和線粒體損傷[J]. 侯寧,王劍,李振華,曹陽(yáng),范開(kāi)吉,楊曉.  遺傳. 2012(03)
[3]鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶在心肌肥大中的作用[J]. 王樸,李岷雯.  中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué). 2008(11)

博士論文
[1]miR-199在心肌肥厚中的功能研究[D]. 李振華.中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2016
[2]H19在心肌肥厚中的功能研究[D]. 劉瀾濤.中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2016

碩士論文
[1]組蛋白乙�；竝300協(xié)同MRTFs激活心肌肥厚標(biāo)志基因表達(dá)[D]. 李明哲.武漢科技大學(xué) 2012



本文編號(hào)：2925497