發(fā)布時間：2020-11-23 20:19

　　 目的:通過體外培養(yǎng)H9c2大鼠心肌細胞并建立缺氧復氧模型,觀察不同缺氧復氧損傷程度對H9c2心肌細胞自噬的影響,并觀察自噬變化對心肌細胞存活率的影響,探討當前實驗條件下研究H9c2心肌細胞自噬最佳的缺氧復氧模型;以選擇性κ-阿片受體激動劑U50488H預處理作為干預,觀察κ-阿片類物質對缺氧復氧損傷H9c2心肌細胞存活率及自噬的影響,探討H9c2心肌細胞缺氧復氧過程中κ阿片受體的激活是否具有直接的心肌細胞保護效應以及自噬是否參與其中并發(fā)揮作用。方法:培養(yǎng)H9c2大鼠心肌細胞,利用不同缺氧液建立不同損傷程度的缺氧復氧模型,缺氧時將H9c2細胞置于缺氧培養(yǎng)箱,分別以0.5%FBS復合高糖DMEM、無糖培養(yǎng)基、PBS緩沖鹽溶液為缺氧液培養(yǎng)3h后置換完全培養(yǎng)基置于正常培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3h,觀察不同缺氧復氧損傷程度對H9c2心肌細胞形態(tài)的影響,MTT法檢測各組細胞存活率,MDC熒光染色流式細胞儀檢測各組細胞自噬率,實時熒光定量PCR法檢測各組細胞內(nèi)Atg5 mRNA的表達水平;給予濃度分別為0.1 u mol/L、1 u mol/L、10 μ mol/L的U50488H預處理H9c2心肌細胞24h后建立以0.5%FBS復合高糖DMEM為缺氧液缺氧3h復氧3h的缺氧復氧模型,取復氧后心肌細胞,MTT法檢測各組細胞存活率,MDC熒光染色流式細胞儀檢測細胞自噬率,實時熒光定量PCR法檢測細胞內(nèi)Atg5 mRNA的表達水平。結果:建立H9c2大鼠心肌細胞不同損傷程度缺氧復氧模型的研究中,與空白對照組相比,各H/R模型組細胞存活率均降低,0.5%FBS復合高糖DMEM、無糖培養(yǎng)基、PBS處理各組H/R心肌細胞存活率逐漸下降。流式細胞儀與實時熒光定量PCR的結果顯示,與空白對照組相比,各H/R模型組心肌細胞自噬率與Atg5 mRNA的表達差別均有統(tǒng)計學意義;0.5%FBS復合高糖DMEM、無糖培養(yǎng)基、PBS處理各組H/R心肌細胞自噬率與Atg5 mRNA的表達均逐漸下降,其中0.5%FBS復合高糖DMEM、無糖培養(yǎng)基處理組較空白對照組增加,PBS處理組則是下降的。U50488H預處理缺氧復氧損傷H9c2大鼠心肌細胞的研究中,與空白對照組相比,H/R組和U50488H各濃度處理組細胞存活率均降低;與H/R組相比U50488H各濃度處理組細胞存活率差別均無統(tǒng)計學意義。流式細胞儀與實時熒光定量PCR的結果顯示,與空白對照組相比,H/R組和U50488H各濃度預處理組心肌細胞自噬率以及Atg5 mRNA的表達均上調;與H/R組相比,U50488H 0.1μmol/L預處理組心肌細胞自噬率和Atg5 mRNA的表達差別均無統(tǒng)計學意義,U50488H 1 u mol/L預處理組心肌細胞自噬率差別無統(tǒng)計學意義,Atg5 mRNA的表達差別則有統(tǒng)計學意義,U50488H110 μ mol/L預處理組心肌細胞自噬率與Atg5 mRNA的表達差別均有統(tǒng)計學意義。結論:利用缺氧培養(yǎng)箱選用0.5%FBS復合高糖DMEM或者無糖培養(yǎng)基作為缺氧液均可建立可行的研究H9c2心肌細胞自噬的缺氧復氧模型,心肌細胞的自噬水平與缺氧復氧損傷的程度相關,適度缺血缺氧可激活自噬,而過度則可抑制自噬。選擇性κ-阿片受體激動劑U50488H預處理呈濃度依賴性升高缺氧復氧損傷H9c2心肌細胞的自噬水平,對細胞存活率沒有明顯影響,提示細胞存活可能受多種因素影響,需要進一步研究。
【學位單位】：

【相似文獻】

相關期刊論文 前20條

1 胡君;熊存全;周紅成;吳爭鳴;;新生SD大鼠心肌細胞的原代分離和培養(yǎng)[J];健康之路;2016年09期

2 王有國;;急救:心絞痛與心肌梗死有區(qū)別[J];家庭醫(yī)藥.就醫(yī)選藥;2016年10期

3 宋新愛;林元喜;樊小力;;心肌細胞的純化[J];中國病理生理雜志;2010年10期

4 崔曉兵;;人類成年心肌細胞可以更新[J];生理科學進展;2010年06期

5 李娜;;心肌細胞可以再生[J];科技導報;2009年08期

6 薛惠文;章靜波;;人類心肌細胞的更新[J];基礎醫(yī)學與臨床;2009年07期

7 劉赫;曹翠蘋;劉國良;;高糖對心肌細胞的直接傷害作用[J];實用糖尿病雜志;2009年05期

8 吳越陽;鐵璐;;~(14)C檢測發(fā)現(xiàn)了人類心肌細胞更新的證據(jù)[J];生理科學進展;2009年04期

9 陳妍,鄧英杰,郝艷麗,王振遠,郭秀俠,福泉,苗志林;缺氧對心肌細胞攝取脂質體的影響[J];中國藥物與臨床;2004年11期

10 蔡明清;心肌細胞再生和腔室重塑[J];中國分子心臟病學雜志;2002年01期

11 李予蓉,商立軍;成熟心肌細胞的培養(yǎng)技術[J];心臟雜志;2000年02期

12 賈士東,修瑞娟;心肌細胞功能的研究[J];中國微循環(huán);2000年03期

13 柏樹令，包偉珂;游離心肌細胞研究的進展[J];解剖科學進展;1996年02期

14 李溫斌;心肌細胞的分離、培養(yǎng)及其應用[J];心肺血管病雜志;1994年04期

15 柏樹令,何維為,李吉;室間隔心肌細胞的生長的特點——游離心肌細胞的三維結構測量[J];解剖學雜志;1991年02期

16 張保國,趙萍,張文杰;鉬和硒對心肌細胞存活的協(xié)同作用[J];白求恩醫(yī)科大學學報;1987年03期

17 王耀發(fā),陸靜怡;非心肌細胞對心肌細胞損傷的修復功能[J];華東師范大學學報(自然科學版);1987年01期

18 王耀發(fā);陸靜怡;葉希韻;戴平;;非心肌細胞對受損心肌細胞LDH的影響[J];華東師范大學學報(自然科學版);1987年04期

19 夏炎興;徐雯燕;林盛毅;張易玲;顧冬敏;李文萍;徐竺(女享);許第雄;李曄;;活血化瘀等中藥對培養(yǎng)心肌細胞搏動的影響[J];江西中醫(yī)藥;1987年06期

20 楊佩蓀;高進;;心肌細胞發(fā)育及細胞間閏盤樣連接形成的掃描電鏡觀察[J];解剖學報;1987年01期

相關博士學位論文 前10條

1 張維山;TDCPP減輕H_2O_2和缺氧/復氧所致心肌細胞損傷機制的研究[D];華中科技大學;2019年

2 葉霖財;人嬰兒期心肌細胞的增殖特征及機制的研究[D];上海交通大學;2016年

3 沈嘉希;應用誘導多能干細胞衍生的心肌細胞模型研究TMEM43調控致心律失常性右室心肌病發(fā)生的分子機制[D];浙江大學;2019年

4 安偉帥;IL-19在小鼠心梗發(fā)生過程中的作用和機制研究[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學;2019年

5 劉金華;TEAD1通過調節(jié)線粒體基因表達抑制心肌細胞壞死在小鼠心臟穩(wěn)態(tài)的作用及機制研究[D];南昌大學;2019年

6 邱荃;體外震波對缺氧/復氧心肌細胞的保護作用及機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2019年

7 王銀;成年心臟成纖維細胞調控幼稚心肌細胞向成熟心肌細胞轉化[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2019年

8 王丹寧;受磷蛋白及鈣-ATP酶的生成、轉運，對正常及心肌梗死大鼠心肌細胞鈣調控的影響[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學;2018年

9 胡尹蘭;抑制let-7i上調CCND2及E2F2促進心肌細胞再生及損傷后心臟功能恢復的研究[D];南方醫(yī)科大學;2018年

10 張鵬;Wnt/JNK信號通路對心肌重構的調控及機制研究[D];重慶醫(yī)科大學;2018年

相關碩士學位論文 前10條

1 王阿倩;Rheb對于大鼠心肌細胞自噬影響的研究[D];甘肅中醫(yī)藥大學;2019年

2 韋勁宇;TRPV1在缺氧小鼠心肌細胞自噬中的作用及其機制研究[D];中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學;2019年

3 葉晶瑩;缺氧導致TPC2下調介導心肌細胞自噬受損的作用及其機制研究[D];中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學;2018年

4 黃小玲;k-阿片受體激動劑對缺氧復氧損傷H9c2心肌細胞自噬的影響[D];廣州中醫(yī)藥大學;2019年

5 王珂;柯薩奇病毒B組3型結構蛋白VP2對心肌細胞損傷的機制初探[D];南昌大學;2019年

6 陳金生;中度低溫增強心肌細胞中的SUMO化并拮抗缺血缺氧再灌注損傷誘導的細胞凋亡[D];華北理工大學;2019年

7 彭茫;rAAV6介導miR361-PSR下調心肌細胞PDE9A基因表達的體外研究[D];湖南師范大學;2017年

8 劉丹;心肌細胞特異性敲除Cdc42對異丙腎上腺素誘導心肌纖維化的影響及其分子機制[D];南昌大學;2019年

9 周雨森;高糖對H9C2心肌細胞miR-26表達的影響及其機制研究[D];蚌埠醫(yī)學院;2019年

10 郭建路;CaN/NFAT3介導線粒體乙醛脫氫酶2對高糖誘導的心肌損傷保護作用及機制研究[D];蚌埠醫(yī)學院;2019年

本文編號：2894813