背景及目的伴隨著我國城市化進程加快并且步入老齡化社會,以及廣大居民生活方式不健康,2017年中國心血管病報告中指出我國心血管患者超過二億九千萬,心血管病死亡率已超過癌癥成為第一致死性疾病。其中心肌梗死死亡率占心血管病死亡60%以上,并且總體呈上升態(tài)勢。心肌梗死(myocardial infarction,MI)是冠狀動脈粥樣斑塊破裂形成血栓,冠狀動脈管腔梗塞,心肌持續(xù)缺血、缺氧導致壞死的臨床綜合征。治療手段可以分為藥物治療和再血管化治療。不管何種治療手段都與梗死心肌血供恢復狀況密切相關,因此梗死心肌中新生血管形成多少或原有阻塞血管重新開放,對于心肌梗死的修復具有重要的意義。血管的生成是指通過血管內(nèi)皮細胞的增殖和遷移,以出芽或套迭的方式生成新的血管。近些年隨著對MI過程中病理生理改變的研究不斷深入,許多學者想到提高梗死區(qū)新生毛細血管的生成治療MI。近年來,有關微小RNA的研究已經(jīng)成為醫(yī)學領域的研究熱點并取得了重要進展。微小RNA(microRNA,miRNA)是真核生物中一類內(nèi)源性高度保守的非編碼小分子RNA,可以使目標基因表達增強或抑制。研究報道m(xù)iRNA作用于機體各種生物反應過程,其中就包括促進血管新生,具有重要的生理和病理意義。miR-126是具有內(nèi)皮特異性的miRNA,在所有毛細血管和較大的血管內(nèi)皮細胞中高度表達,通過影響血管基因信號轉(zhuǎn)導通路來調(diào)節(jié)血管的生成和發(fā)育。有研究證實miR-126是血管內(nèi)皮細胞中表達最豐富的miRNA,特別是在心臟、肺等高度血管化的小鼠組織中。miR-126在維持體內(nèi)血管內(nèi)皮細胞和血管完整性方面具有十分積極的作用。低能激光照射療法(low level laser irradiation,LLLI)是一種十分成熟的物理治療手段,在醫(yī)學方面的應用已經(jīng)有40多年的歷史,起初在眼科、骨科領域率先大膽嘗試,現(xiàn)已經(jīng)在幾乎所有學科領域中廣泛應用,它的安全性和有效性已經(jīng)得到學術界的證實和認可。LLLI產(chǎn)生生物學效應而非熱效應,包括刺激、調(diào)節(jié)、活化等生物刺激效應。它主要影響損傷組織,對受損細胞有益,包括細胞增殖、粘附改善和防止細胞凋亡,對未受損細胞基本無害。盡管LLLI具體作用機制和作用機理還處于研究階段,但大量的基礎研究和臨床案例已經(jīng)證實其能在體外調(diào)節(jié)細胞和組織的諸多生物學過程。有研究顯示,LLLI能改善了梗死區(qū)域的微循環(huán),具有心肌保護作用,還能減弱膠原纖維的形成,改善心室重塑過程。因此,本研究通過建立大鼠心肌梗死模型,觀察心肌梗死前后心肌組織中miR-126表達的變化,并采用低能激光照射心梗區(qū)域,觀察梗死心肌邊緣組織中miR-126照射前后表達的變化,以及梗死后新生毛細血管密度的變化,進而探討低能激光和miR-126是否能共同促進毛細血管的生成,低能激光應用于臨床治療心肌梗死提出可能。材料和方法(1)動物及分組實驗動物為SPF級雄性SD大鼠110只,體重體重220-250g,年齡6-8周。隨機分為3組:假手術組30只、對照組40只、激光組40只。對照組和激光組大鼠建立心梗動物模型,心梗模型建模方法為將左冠狀動脈前降支結(jié)扎。假手術組制作方法為術中相同位置穿線但不結(jié)扎,余步驟相同。(2)篩選心梗模型大鼠心梗模型建模手術完成24h后,行超聲心動圖檢測,心梗模型的入選標準:客觀指標:1.左室射血分數(shù)60%;2.左室短軸縮短率30%;主觀指標:3.發(fā)現(xiàn)至少有1個層面表現(xiàn)出心室壁收縮異常。成功的心梗模型需符合2項及以上。(3)低能激光照射篩選后,對所有大鼠進行LLLI。當假手術組和對照組進行LLLI時,低能激光儀不通電。(4)左心功能檢查在大鼠心梗模型篩選時第1次記錄,對照組和激光組LLLI后,在獲取心肌組織標本前再次行超聲心動圖檢查,檢查指標及方法均與第1次相同。(5)測定miR-126表達三組均在低能激光照射后24h、7d、14d時腹腔麻醉,迅速開胸獲取標本,排出心腔內(nèi)血液,確保無殘留,用眼科剪小心采集梗死區(qū)邊緣心肌組織,保存于-80℃冰箱。采用RT-qPCR方法檢測miR-126的表達。(6)梗死心肌組織病理分析三組大鼠在低能激光照射后7d時腹腔麻醉,迅速開胸獲取標本,用2%TTC磷酸緩沖液進行染色(2-3只/組)、蘇木素-伊紅染色、CD31免疫組化法檢測MVD。(7)統(tǒng)計學方法實驗數(shù)據(jù)應用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件,計量資料以均數(shù)±標準差(x±s)表示析,采用方差分析證明各組方差齊性后采用LSD-t檢驗,計量資料相關性進行關聯(lián)性分析,檢驗水準α=0.05,p0.05說明差異具有統(tǒng)計學意義。結(jié)果(1)大鼠建模情況在三組大鼠行建模操作后24h內(nèi),共有99只大鼠存活,假手術組29只,對照組30只,激光組35只,建模手術成功率為81.25%(65/80)。經(jīng)篩選,對照組有28只符合標準,激光組有26只符合標準,心梗模型建立成功率為:67.5%(54/80)。(2)左心功能評價及比較激光組低能激光照射7d后,照射后較照射前左室射血分數(shù)、左室短軸縮短率顯著提高,差異均有統(tǒng)計學意義;低能激光照射7d后激光組較對照組左室射血分數(shù)、左室短軸縮短率顯著提高,差異均有統(tǒng)計學意義。(3)梗死心肌miR-126表達miR-126擴增結(jié)果示:激光組miR-126的表達較對照組明顯增高。假手術組miR-126的表達不隨時間推移而改變,總體相對穩(wěn)定。在低能激光照射后,對照組和激光組miR-126的表達在24h、7d、14d均低于假手術組,而激光組均高于對照組;對照組miR-126表達在7d時最高,激光組同樣如此;對照組14d時miR-126的表達量低于24h,但激光組14d時與24h比較無統(tǒng)計學意義。(4)心梗面積比較根據(jù)TTC染色結(jié)果,發(fā)現(xiàn)激光組大鼠心梗面積與對照組相比顯著減少,差異具有統(tǒng)計學意義。(5)心肌組織病理學檢測結(jié)果1.HE染色結(jié)果假手術組大鼠心肌細胞排列規(guī)整,細胞結(jié)構基本正常,未見炎性細胞浸潤;對照組出現(xiàn)大量區(qū)域性壞死伴有大量炎性細胞浸潤;激光組心肌細胞壞死程度和水腫現(xiàn)象較對照組有所改善,炎性細胞浸潤減少。2.免疫組化檢測結(jié)果CD31免疫組化法檢測大鼠梗死心肌組織中微血管密度(MVD),結(jié)果顯示:激光組大鼠心肌組織中微血管密度較對照組有明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義。(6)激光組miR-126表達與微血管密度的相關性激光組大鼠梗死心肌組織中miR-126的表達水平與微血管密度關聯(lián)性分析,結(jié)果示:激光組大鼠梗死心肌組織MVD與miR-126的表達水平呈正相關。結(jié)論低能激光能夠促進大鼠心肌梗死后梗死心肌組織的血管再生,新生血管形成后,提升梗死心肌的血供,縮小了心肌梗死面積,減輕梗死過程中的炎性反應,提高左心功能,達到心肌保護的目的。低能激光可以提高梗死心肌中miRNA-126表達,其與血管新生呈正相關,這可能是低能激光影響血管再生的作用機制。
【學位單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R542.22
【部分圖文】：

3 結(jié)果.1 大鼠心肌梗死模型建立情況在大鼠心梗模型手術后 24h 內(nèi)，共有 99 只大鼠存活，其中假手術組存活，對照組存活 30 只，激光組存活 35 只，分析死亡原因為：呼吸衰竭致自主不能恢復、結(jié)扎位置過高造成心梗面積過大致急性左心衰、搬動心臟過多動輕柔致惡性心律失常、術后恢復期肺部感染等。心梗模型建立過程中手術成為 81.25％（65/80）。經(jīng)超聲篩選，對照組有 28 只符合標準，激光組有 26合標準，心梗模型建立成功率為：67.5％（54/80）。術中結(jié)扎 LAD 后可見部位以下左心室部分心肌顏色變淡，微微發(fā)白（圖 3.1）。

13圖 3.2 低能激光照射后 7d 對照組和激光組 PCR 擴增結(jié)果miR-126 擴增情況：激光組 miR-126 表達高于對照組（見圖 3.2）3.3.2 miR-126 實時熒光定量 PCR 結(jié)果假手術組 miR-126 的表達不隨時間推移而改變，總體相對穩(wěn)定。在低能激光照射后，對照組和激光組 miR-126 的表達在 24h、7d、14d 均低于假手術組（24h假手術組比對照組 T=12.034 P=0.000，假手術組比激光組 T=8.045 P=0.000；7d假手術組比對照組 T=7.998 P=0.000，假手術組比激光組 T=2.585 P=0.049；14d假手術組比對照組 T=7.981 P=0.000，假手術組比激光組 T=4.533 P=0.006），而激光組均高于對照組（24h 激光組比對照組 T=3.076 P=0.028，7d 激光組比對照組 T=2.769 P=0.039，14d 激光組比對照組 T=10.509 P=0.000）；對照組 miR-126表達在 7d 時最高（對照組 7d 比對照組 24h T=7.809 P=0.001，對照組 7d 比對照組 14d T=9.182 P=0.000），激光組同樣如此（激光組 7d 比激光組 24h T=5.615P=0.002，激光組 7d 比激光組 14d T=27.336 P=0.000）；對照組 14d 時 miR-126

表達量低于 24h，但激光組 14d 時與 24h 比較無統(tǒng)計學意義（對照組 14d 比對組 24h T=2.779 P=0.039，激光組 14d 比激光組 24h T=0.635 P=0.553）（見表.1 圖 3.3）。 3.1 各組大鼠梗死心肌 miR -126 在 LLLI 后不同時段的相對表達水平比較（n=6/時間點組別 24h 7d 14d假手術組 19.25±1.43 19.98±1.75 20.25±2.42對照組 12.42±1.01 15.58±0.83 11.15±0.98激光組 14.00±0.86 17.40±1.16 14.43±1.30
【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 宋歌;呂月濤;狄林林;宗文納;陳伯旺;;早期腸內(nèi)營養(yǎng)對重癥肺炎大鼠免疫功能的影響分析[J];中國醫(yī)學前沿雜志(電子版);2017年01期

2 葉敏;陳達柔;陳宇中;杜少冰;杜展鑫;李玉鳳;唐珮瑜;楊昌山;朱曉琴;;右美托咪定后處理對大鼠肝缺血再灌注損傷的保護作用[J];臨床醫(yī)學工程;2017年02期

3 王雅樂;李文泉;姚鳳云;;黃連解毒湯對營養(yǎng)性肥胖大鼠的毒性研究[J];光明中醫(yī);2017年10期

4 關智宇;;三七總皂甙對骨折大鼠血管內(nèi)皮生長因子基因擴增及蛋白表達水平影響的研究[J];臨床醫(yī)藥文獻電子雜志;2017年51期

5 王帥;賈琦珍;陳根元;程勇;張玲;馬春暉;;小花棘豆中毒對大鼠下丘腦—垂體—卵巢軸α-甘露糖苷酶的影響[J];福建農(nóng)林大學學報(自然科學版);2016年01期

6 周挺;夏菁;李增攀;徐麗艷;韓文文;方建江;;法舒地爾對百草枯致大鼠肺纖維化的干預作用[J];浙江實用醫(yī)學;2016年01期

7 王亞東;李東朋;郭德偉;宋及時;李紅偉;錢偉強;楊波;;富血小板血漿對創(chuàng)傷性顱腦損傷大鼠神經(jīng)功能的保護作用[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2016年05期

8 鄭國祥;于強;;白虎湯對全身炎癥反應綜合征大鼠炎癥因子的影響[J];四川中醫(yī);2015年01期

9 符暉;王橋生;方志雄;劉雁;周斌;彭忠田;梁咸章;;辛伐他汀預處理對大鼠神經(jīng)源性肺水腫的作用及其機制[J];中國動脈硬化雜志;2015年10期

10 商明紅;何龍其;;西維來司鈉對大鼠腦出血保護作用機制的實驗研究[J];現(xiàn)代養(yǎng)生;2017年10期

相關博士學位論文 前10條

1 卞藝斐;馬齒莧對實驗性腸炎大鼠的保護作用及其機制研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學;2018年

2 白方會;正天丸和川芎嗪對偏頭痛模型大鼠三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)神經(jīng)遞質(zhì)表達的影響[D];南方醫(yī)科大學;2016年

3 頓晶晶;補腎中藥更康顆粒的藥效學及急性毒理實驗研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2016年

4 穆道周;芍藥苷抗抑郁促動力作用的實驗研究[D];南京中醫(yī)藥大學;2016年

5 王躍旗;楓寥腸胃康對腹瀉型腸易激綜合征大鼠結(jié)腸動力及氯離子分泌的影響[D];北京中醫(yī)藥大學;2017年

6 王成書;Apelin改善RUPP大鼠模型妊娠結(jié)局的作用機制探討[D];河北醫(yī)科大學;2016年

7 李少源;耳甲區(qū)電刺激對CUMS模型大鼠抗抑郁效應及ERK信號通路作用機制[D];中國中醫(yī)科學院;2018年

8 邵艷姣;不同病毒體系遞送CRISPR/Cas9系統(tǒng)治療成體大鼠Ⅰ型酪氨酸血癥的研究[D];華東師范大學;2017年

9 鐘鴻斌;TRPM7/Smads信號通路在病態(tài)竇房結(jié)綜合征大鼠竇房結(jié)和心房重塑中的作用[D];福建醫(yī)科大學;2016年

10 楊誠;Pim-3對COPD氣道平滑肌細胞增殖的影響及其在COPD大鼠中的潛在治療靶點作用[D];南方醫(yī)科大學;2018年

相關碩士學位論文 前10條

1 金偉中;出生前尼古丁暴露對新生大鼠orexin A呼吸調(diào)節(jié)作用的影響[D];復旦大學;2009年

2 謝秉言;PAS-Na對染錳SD大鼠胰腺損傷的干預研究[D];廣西醫(yī)科大學;2019年

3 周麗芳;電針對局灶性腦梗死大鼠健側(cè)大腦皮層BDNF、Sma3A、NRP-1表達的影響[D];廣西醫(yī)科大學;2019年

4 唐嵐瑩;火麻仁提取液對D-gal致衰老大鼠味覺記憶的影響[D];廣西醫(yī)科大學;2019年

5 劉靜;IL-33/ST2在人芽囊原蟲感染大鼠模型中的表達研究[D];廣西醫(yī)科大學;2019年

6 林錕;甘蔗葉多糖對大鼠心肌梗死動態(tài)心電圖和心室重構的影響[D];廣西醫(yī)科大學;2018年

7 李帥;星狀神經(jīng)節(jié)阻滯對體外循環(huán)大鼠凋亡通路相關蛋白及炎癥因子表達的影響[D];廣西醫(yī)科大學;2018年

8 甘國才;EGF和EGFR與大鼠早產(chǎn)的關系分析[D];廣西醫(yī)科大學;2019年

9 朱麗娜;火麻仁提取液對D-gal致衰老大鼠嗅覺辨識記憶障礙的影響[D];廣西醫(yī)科大學;2019年

10 王學敏;血府逐瘀湯及外源性甲狀腺素對重型顱腦損傷大鼠神經(jīng)再生修復的影響[D];廣西醫(yī)科大學;2018年

本文編號：2892755