目的:NR4A1對(duì)修復(fù)性Ly6C~(low)單核細(xì)胞的發(fā)育至關(guān)重要,有利于單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞發(fā)揮抗炎作用,探討急性心肌梗死(AMI)移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)后Ly6C~(high)單核細(xì)胞向Ly6C~(low)表型轉(zhuǎn)化與Nr4a1的表達(dá)水平的相關(guān)性及對(duì)炎癥及心肌重塑的作用。方法:將小鼠隨機(jī)分成4組分別為假手術(shù)組、AMI組、AMI+CCR2受體拮抗劑組及AMI+CCR2受體拮抗劑+MSCs組。CCR2受體拮抗劑RS504393經(jīng)腹腔注射,MSCs由小鼠骨髓中提取培養(yǎng)原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,體外傳代純化培養(yǎng)至第四代,顯微鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定及流式鑒定后,在心肌梗死部位多點(diǎn)注射。72h后收集4組小鼠血液、脾臟單核細(xì)胞,分別流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Ly6C~(high)單核細(xì)胞、Ly6C~(low)單核細(xì)胞比例,Real-time PCR法、Western blot法檢測(cè)血液Nr4a1表達(dá)水平。結(jié)果:骨髓間質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)純化至第四代,形態(tài)單一,呈梭形,流式細(xì)胞儀鑒別檢測(cè)顯示:Sca-1表達(dá)陽(yáng)性,CD45陰性,符合BM-MSCs表型特征。通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè),AMI組外周血、脾臟中Ly6C~(high)單核細(xì)胞和Ly6C~(low)單核細(xì)胞比例,與假手術(shù)組相比均有增加;AMI+CCR2受體拮抗劑組外周血、脾臟中Ly6C~(high)單核細(xì)胞和Ly6C~(low)單核細(xì)胞比例與AMI組相比顯著降低;AMI+CCR2受體拮抗劑+MSCs組外周血、脾臟,Ly6C~(high)單核細(xì)胞比例較AMI+CCR2受體拮抗劑組比例降低,Ly6C~(low)單核細(xì)胞比例與AMI+CCR2受體拮抗劑組相比增加(P0.001)。PCR與Western blot結(jié)果顯示,AMI組Nr4a1表達(dá)水平與假手術(shù)組相比明顯升高,AMI+CCR2受體拮抗劑組較AMI組降低,AMI+CCR2受體拮抗劑+MSCs組Nr4a1表達(dá)水平高于AMI+CCR2受體拮抗劑組(P0.05)。結(jié)論:AMI小鼠在梗死心肌移植MSCs后,Nr4a1的表達(dá)增強(qiáng),Ly6C~(high)單核細(xì)胞向Ly6C~(low)單核細(xì)胞轉(zhuǎn)化,Nr4a1的表達(dá)與Ly6C~(high)單核細(xì)胞向Ly6C~(low)單核細(xì)胞轉(zhuǎn)化有關(guān)。
【學(xué)位單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R542.22
【部分圖文】：

細(xì)胞培養(yǎng)純化至第四代，形態(tài)單一，呈梭形。本實(shí)驗(yàn)室有相關(guān)研究基礎(chǔ)，已成熟掌握骨髓間質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。流式細(xì)胞儀鑒別檢測(cè)顯示:Sca-1表達(dá)陽(yáng)性，CD45陰性，符合 BM-MSCs表型特征（圖1）。圖1 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)與鑒定Fig 1 The morphology and identification of bone marrow mesenchymal stem cells1.2 心肌梗死、CCR2受體拮抗劑、移植MSCs對(duì)小鼠孤核受體NR4A1表達(dá)水平的影響通過PCR檢測(cè)，本研究發(fā)現(xiàn)與假手術(shù)組相比，AMI組NR4A1 mRNA水平顯著升高，AMI＋CCR2受體拮抗劑組NR4A1 mRNA水平較AMI組明顯減低，移植MSCs后的AMI＋CCR2受體拮抗劑＋MSCs組NR4A1 mRNA水平又有所升高，且接近AMI組水平，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（圖2A）通過Western blot檢測(cè)，本研究發(fā)現(xiàn)NR4A1表達(dá)水平與PCR檢測(cè)結(jié)果相似，AMI組NR4A1表達(dá)明顯高于假手術(shù)組
【參考文獻(xiàn)】

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1 黃潔;盛祖龍;姚玉宇;;調(diào)節(jié)移植干細(xì)胞功能促進(jìn)梗死心肌修復(fù)的策略[J];東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年03期

2 黎葉飛;盛祖龍;姚玉宇;馬根山;;兩種骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植途徑治療急性心肌梗死的比較研究[J];東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年05期

3 朱洪生,連鋒,朱偉,鐘竑,鄭林,朱平;骨髓間質(zhì)干細(xì)胞體外轉(zhuǎn)化為心肌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[J];上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2002年05期

本文編號(hào)：2843216