發(fā)布時(shí)間：2020-10-14 07:43

　　 目的:心肌缺血再灌注損傷(MIRI)是目前臨床治療的難點(diǎn),本研究通過用卡維地洛治療左冠狀動(dòng)脈閉塞和再灌注小鼠模型的方法,驗(yàn)證了卡維地洛特異性通過AMPK信號(hào)傳導(dǎo)對(duì)心臟的保護(hù)作用,為臨床冠心病治療研究提供理論指導(dǎo)。方法:運(yùn)用小鼠心肌缺血再灌注模型研究卡維地洛對(duì)心肌的保護(hù)作用。通過離體心臟測量卡維地洛在缺血再灌注損傷時(shí)對(duì)心臟代謝的影響。測量分離心肌細(xì)胞對(duì)缺血應(yīng)激的收縮功能和細(xì)胞內(nèi)Ca2+特性,通過細(xì)胞內(nèi)鈣信號(hào)水平觀察,研究卡維地洛影響心肌細(xì)胞收縮力的機(jī)制。結(jié)果:我們發(fā)現(xiàn),在結(jié)扎小鼠左冠狀動(dòng)脈和再灌注模型中,用卡維地洛治療的小鼠在缺血再灌注條件下能顯著保護(hù)心肌細(xì)胞,減少梗塞面積,改變能量代謝,增加氧利用率,并能改善心臟收縮功能。然而,卡維地洛治療在缺乏AMPK活性的細(xì)胞或組織中無明顯作用,所以驗(yàn)證了卡維地洛通過AMPK信號(hào)傳導(dǎo)對(duì)心臟保護(hù)作用的特異性。用卡維地洛處理離體心臟使AMPK磷酸化,葡萄糖氧化增加40%,并且葡萄糖攝取增加30%(與對(duì)照相比p0.05)�？ňS地洛的保護(hù)作用也在分離的小鼠心肌細(xì)胞中得到證實(shí)。本研究通過測量分離心肌細(xì)胞對(duì)缺血應(yīng)激的收縮功能和細(xì)胞內(nèi)Ca2+特性,發(fā)現(xiàn)卡維地洛治療改善了缺氧誘導(dǎo)的最大收縮速率(+dL/dt)和最大舒張速率(-dL/dt),以及由缺氧引起的收縮幅度(PH)和收縮峰振幅(PS)的損害。此外,蛋白免疫印跡結(jié)果證實(shí)卡維地洛能在缺氧條件下激活A(yù)MPK。結(jié)論:卡維地洛能通過激活A(yù)MPK信號(hào)通路在心臟缺血性損傷中起到心肌保護(hù)作用。
【學(xué)位單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R54
【部分圖文】：

?＾ｖ＂?＾?；：??圖２－１不同條件下的小鼠心臟超聲圖??Ｆｉｇ．２－１?Ｔｈｅ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ?ｅｃｈｏｃａｒｄｉｏｇｒａｐｈｙ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｂａｓａｌ?ａｎｄ?Ｉ／Ｒ?ｇｒｏｕｐ?ｗｉｔｈ?ｏｒ?ｗｉｔｈｏｕ?ＣＡＲ?ａｎｄ??ｃｏｍｐｏａｎ?Ｃ?ｔｒｅａｔｍｅｎ??ａ?ｂ??ｇ??＾?ｉ—ｉ?Ｓｔｅｍ?麵＾？？?Ｇ？?５〇?Ｉ?Ｉ?Ｓｔｅｍ?Ｗｔ?ｉ／；Ｒ??Ｘ?ＢＢ１?，?ｇ?４０－?－ｐ?了?＃??ｆｃ?ｒ＾ｒ＾ｉ?土?Ｉ?Ｐｉｒ＾?＾??喔?ｉｌｌ?ｍＭ??ＳＴ?ｕ：??圖２－２不同條件下的小鼠心臟射血分?jǐn)?shù)（Ａ）和左室短軸縮短率（Ｂ）（＊ｐ＜０．?０５?ｖｓ．?Ｓｈａｍ；??＃ｐ〈０．０５?ｖｓ．?Ｖｅｈｉｃｌｅ?Ｉ／Ｒ；?ｔｐ〈〇．〇５ｖｓ．?ＣＡＲ?Ｉ／Ｒ）??Ｆｉｇ．２－２?ｔｈｅ?ｌｅｆｔ?ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ?ｅｊｅｃｔｉｏｎ?ｆｒａｃｔｉｏｎ?（ＥＦ）?（Ａ）ａｎｄ?ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ?ｓｈｏｒｔｅｎｉｎｇ?（ＦＳ）（Ｂ）??（＊ｐ＜０．０５?ｖｓ．?Ｓｈａｍ?；?＃ｐ＜０．０５?ｖｓ．?Ｖｅｈｉｃｌｅ?Ｉ／Ｒ；?ｔｐ＜〇?〇５?ｖｓ．ＣＡＲ?Ｉ／Ｒ）??２．３討論??Ｄｏｒｓｏｍｏｒｐｈｉｎ?（Ｃｏｍｐｏｕｎｄ?Ｃ）是一種有效的，可逆選擇性ＡＭＰＫ抑制劑，它能??夠抑制ＡＭＰＫ的磷酸化。正常小鼠單純使用Ｃｏｍｐｏｕｎｄ?Ｃ時(shí)，心功能無明顯改變。??在缺血再灌注條件下，ＣＡＲ處理后的小鼠心功能明顯提高，但在Ｃｏｍｐｏｕｎｄ?Ｃ抑??制ＡＭＰＫ活性的環(huán)境下，ＣＡＲ的這種心功能保護(hù)作用消失。通過本次實(shí)驗(yàn)，我們??可以觀察到

，，用縫線將主動(dòng)脈結(jié)扎懸掛在注射針頭，注射器吸�。担恚瘫校拢油ㄐ呐K的血完全沖洗干凈。??（３）將心臟置于０．１％的２，?３，?５－三苯基四氮唑（ＴＴＣ）溶液中，并放中。??（４）?１５ｍｉｎ后將心臟取出并用８＿０縫線在原來的冠脈結(jié)扎處再次結(jié)用注射器吸�。担埃桑盏模保サ囊廖乃妓{(lán)染料（Ｅｖａｎｓ?Ｂｌｕｅ）通過主動(dòng)脈臟。??（５）?２ｍｉｎ后將心房心耳剪掉，并將１．５％石膏注入左右心室。最后入１０％福爾馬林中浸泡固定。??（６）?２天后切片（每片厚度為１－２圓）并用顯微鏡拍照，并用Ｉｍａｇｅ。紅色區(qū)域代表缺血但活著的心肌組織；白色區(qū)域代表梗死區(qū)；藍(lán)危險(xiǎn)區(qū)。??結(jié)果??由心臟切片染色情況可以看出（圖３－１），不同處理組間的梗死面四組間的缺血危險(xiǎn)區(qū)的比率相似，表明它們的缺血應(yīng)激程度相等（圖給藥組的心肌梗塞顯著減少，然而加用Ｃｏｍｐｏｕｎｄ?Ｃ后減弱了?ＣＡＲ，表明ＣＡＲ減少心肌梗死損傷部分是通過ＡＭＰＫ信號(hào)通路（圖３－３）。??

ａｊ＊?ｗＳｍ?＾??ａ?．１?ｉ?Ｂ１??圖３－３不同條件下的小鼠心臟梗死面積的比率（＊ｐ〈０．?０５?ｖｓ．?Ｖｅｈｉｃｌｅ；?＃ｐ〈０．?０５?ｖｓ．??ＣＡＲ）??Ｆｉｇ．３－３?Ｔｈｅ?ｒａｔｉｏ?ｏｆ?ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ?ａｒｅａ（ＩＮＦ）?ｔｏ?ＡＡＲ?（＊ｐ＜０．０５?ｖｓ．?Ｖｅｈｉｃｌｅ；?＃ｐ＜０．０５?ｖｓ．?ＣＡＲ）??３．?３討論??本研宄用Ｅｖａｎｓｂｌｕｅ－ＴＴＴＣ雙染法測定小鼠缺血再灌注模型的心肌缺血區(qū)域??和梗死區(qū)域面積。ＴＩＣ因能和正常心肌細(xì)胞線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶反應(yīng)，生成??紅色化合物，從而使發(fā)生梗死的區(qū)域染成紅色，而發(fā)生梗死的心肌細(xì)胞呈白色??［６５］。小鼠再灌注２４ｈ后，迅速取出心臟，并用冰的ＰＢＳ洗去心臟內(nèi)血液，再用??縫線將之前建模時(shí)冠狀動(dòng)脈左前降支的結(jié)扎部位再次結(jié)扎，后將心臟置于ＴＴＣ??溶液中染１５ｍｉｎ，可將缺血心肌組織中未壞死部位染成紅色，而壞死部位不被染??色而呈白色。Ｅｖａｎｓｂｌｕｅ是一種藍(lán)色染料，可將沒有活性的細(xì)胞染成藍(lán)色，心臟??取出后將冠狀動(dòng)脈左前降支的結(jié)扎部位再次結(jié)扎并用ＴＴＣ染色，將Ｅｖａｎｓｂｌｕｅ??從主動(dòng)脈逆灌入心室后
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本文編號(hào)：2840389