目的:探討焦脫鎂葉綠酸甲酯(Pyropheophorbide-αmethyl ester,MPPa)介導(dǎo)的光動力(Photodynamic therapy,PDT)治療對小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7凋亡及炎癥反應(yīng)的作用,為PDT應(yīng)用于動脈粥樣硬化的治療提供實驗依據(jù)。方法:流式細(xì)胞術(shù)檢測RAW264.7細(xì)胞對MPPa的攝取;激光掃描共聚焦顯微鏡觀察MPPa在細(xì)胞內(nèi)的亞器官定位;CCK-8檢測細(xì)胞毒性;DCFH-DA檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的產(chǎn)生;流式細(xì)胞術(shù)和Hoechst33342染色觀察細(xì)胞凋亡情況;JC-1染色檢測細(xì)胞線粒體膜電位的變化;ELISA檢測炎癥因子TNF-α、IL-1β和IL-6分泌情況;Western Blot檢測Caspase-3、cleaved caspase-3、procaspase-9、cleaved caspase-9、PARP、cleaved PARP、bcl-2、Bax、NF-κB p-p65、p-IKKα/β、和p-IκBα;免疫熒光觀察NF-κB p65核轉(zhuǎn)錄情況。結(jié)果:MPPa主要聚集于線粒體;MPPa-PDT以劑量依賴的方式影響細(xì)胞的存活率;誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生大量ROS并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;降低細(xì)胞線粒體膜電位;上調(diào)cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、cleaved PARP和Bax蛋白表達(dá),下調(diào)bcl-2蛋白表達(dá);MPPa-PDT下調(diào)LPS誘導(dǎo)的炎癥因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平;下調(diào)LPS誘導(dǎo)的NF-κB p-p65、p-IKKα/β、和p-IκBα蛋白表達(dá)并抑制NF-κB p65的核轉(zhuǎn)錄。結(jié)論:MPPa-PDT誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞凋亡并抑制LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng),可能為PDT治療動脈粥樣硬化提供實驗依據(jù)。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R543.5
【部分圖文】：

圖 2. MPPa-PDT 對 RAW264.7 細(xì)胞存活率的影響。（a）單純使用 MPPa 時對細(xì)胞存活率的影響；（b）單純光照時對細(xì)胞存活率的影響；（c）MPPa-PDT（2 μmol/L）和/或 LPS 對細(xì)胞存活率的影響。Fig 2. Effect of MPPa-PDT on RAW264.7 cell viability. Effect of 0, 0.5, 1, 2,and 4 mol/L MPPa on RAW264.7 macrophage viability（a）. Effect of variousirradiation energy densities on RAW264.7 macrophage viability (b).*P＜0.05 vs.control group. Effect of MPPa-PDT on RAW264.7 macrophage viability. Followingthe incubation with MPPa at 2 μmol/L for 12 h, each cell was irradiated withdifferent energies in presence or absence of LPS, such as 0, 0.3, 0.6, 0.9,1.2, 1.5, and 1.8 J/cm2. Cell viabilities were detected by CCK-8 assay（c）.(*P＜0.05 vs. control group).2.3 MPPa-PDT 誘導(dǎo) RAW264.7 細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生 ROS

圖 3 MPPa-PDT 對細(xì)胞內(nèi) ROS 的影響。Fig 3: Effect of MPPa-PDT on ROS formation in RAW264.7 macrophages. (*P＜0vs. control group,#P＜0.05 vs. LPS group).2.4 MPPa-PDT 誘導(dǎo) RAW264.7 細(xì)胞凋亡如圖 4 所示，MPPa-PDT 組（12.960±2.779）和 LPS+MPPa-PDT 組（14.240±2.689）凋亡率分別高于對照組（5.967±2.189）和 LPS 組（5.567±1.811）（P＜0.05），對照組和 LPS 組、MPPa-PDT 組和 LPS+MPPPDT 組之間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），說明 MPPa-PDT 可以誘導(dǎo)RAW264.7 細(xì)胞凋亡。

圖 3 MPPa-PDT 對細(xì)胞內(nèi) ROS 的影響。Fig 3: Effect of MPPa-PDT on ROS formation in RAW264.7 macrophages. (*vs. control group,#P＜0.05 vs. LPS group).2.4 MPPa-PDT 誘導(dǎo) RAW264.7 細(xì)胞凋亡如圖 4 所示，MPPa-PDT 組（12.960±2.779）和 LPS+MPPa-PDT 組（14.240±2.689）凋亡率分別高于對照組（5.967±2.189）和 LPS 組（5.567±1.811）（P＜0.05），對照組和 LPS 組、MPPa-PDT 組和 LPS+PDT 組之間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），說明 MPPa-PDT 可以誘導(dǎo)RAW264.7 細(xì)胞凋亡。
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本文編號：2837303