發(fā)布時(shí)間：2020-10-09 02:54

　　 目的:研究鞣花酸對(duì)缺氧肺動(dòng)脈高壓的影響及其可能的機(jī)制。方法:1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及分組40只SD雄性大鼠(體重180-220g),隨機(jī)分為四組,每組10只。分別為:A常氧組:于室溫常氧環(huán)境下飼養(yǎng)4周。B常氧+鞣花酸組:于室溫常氧環(huán)境下,每日給予鞣花酸15mg/kg灌胃,飼養(yǎng)4周。C低氧組:室溫下將大鼠每日置于10%氧氣濃度的低氧箱中8h,連續(xù)四周。D低氧+鞣花酸組:室溫下將大鼠低氧暴露之前,給予鞣花酸15mg/kg灌胃,然后于10%氧氣濃度的低氧箱中8h,連續(xù)4周。2.測(cè)定右心室收縮壓將大鼠按上述分組處理4周后,經(jīng)右頸靜脈插入導(dǎo)管至右心室另一端連接壓力傳感器,經(jīng)生理信號(hào)記錄儀分析系統(tǒng)測(cè)定大鼠右心室收縮壓(RVSP)。3.右心室肥厚指數(shù)測(cè)定取實(shí)驗(yàn)大鼠出心臟,去除左右心房后分離右心室(RV)及左心室+室間隔(S+LV)并準(zhǔn)確稱量重量。以公式(RVHI)=(RV)/(LV+S)計(jì)算右心室肥厚指數(shù)。4.肺組織中的超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量測(cè)定:稱取各組大鼠相同部位(右肺下葉)肺組織100mg,磨碎制作組織提取液按照試劑盒說(shuō)明步驟測(cè)定肺組織內(nèi)的SOD和MDA含量。5.免疫組化染色肺組織內(nèi)α-SMA檢測(cè)取各實(shí)驗(yàn)組大鼠同一部位肺組織(左肺下葉)制作肺組織生理切片后進(jìn)行α-SMA抗體免疫染色。6.大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)分組取健康大鼠肺動(dòng)脈血管進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)后取3-5代生長(zhǎng)良好的肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞,按以下方法分組:A:常氧+加等量PBS液組;B:低氧+等量PBS液組;C:低氧+5μmol/L鞣花酸組;D:低氧+10μmol/L鞣花酸組;E:低氧+15μmol/L鞣花酸組;F:低氧+20μmol/L鞣花酸組。將分組處理好的細(xì)胞置于37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h。7.臺(tái)盼藍(lán)實(shí)驗(yàn)胰蛋白酶消化培養(yǎng)的各組細(xì)胞,制作細(xì)胞懸液,將細(xì)胞濃度調(diào)整至1×105/ml,按細(xì)胞懸液/%0.4臺(tái)盼藍(lán)溶液=9:1比例滴加臺(tái)盼藍(lán)溶液,混勻。顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)各組中存活細(xì)胞和死亡細(xì)胞。8.Western-blot方法檢測(cè)測(cè)定各組細(xì)胞中p38MAPK和ERK1/2蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1.與常氧組大鼠及常氧+鞣花酸組大鼠相比,低氧組大鼠右心肥厚指數(shù)[RV/(LV+S)]明顯增高(p0.05),單純低氧組大鼠右心肥厚指數(shù)高于低氧+鞣花酸組大鼠(p0.05),常氧組大鼠與常氧+鞣花酸組大鼠右心肥厚指數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。2.與常氧組大鼠及常氧+鞣花酸組大鼠相比,低氧組大鼠右心肥厚指數(shù)[RV/(LV+S)]明顯增高(p0.05),單純低氧組大鼠右心肥厚指數(shù)高于低氧+鞣花酸組大鼠(p0.05),常氧組大鼠與常氧+鞣花酸組大鼠右心肥厚指數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。3.過(guò)對(duì)α-SMA染色觀察肺血管的變化發(fā)現(xiàn),常氧組大鼠與常氧+鞣花酸組大鼠相比較,肺血管結(jié)構(gòu)物明顯變化。低氧組大鼠肺血管與常氧組相比,肺血管中膜增厚明顯。低氧+鞣花酸組大鼠與單純低氧組大鼠相比較,肺血管中膜厚度明顯下降。4.與常氧組大鼠相比,低氧組大鼠SOD含量明顯降低(p0.05),單純低氧組與低氧+鞣花酸組大鼠相比較,單純低氧組大鼠肺組織SOD含量較低(p0.05),常氧組大鼠與常氧+鞣花酸組大鼠肺組織SOD含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。5.與常氧組大鼠相比,低氧組大鼠MDA含量明顯增高(p0.05),單純低氧組與低氧+鞣花酸組大鼠相比較,低氧+鞣花酸組大鼠肺組織MDA含量明顯下降(p0.05),常氧組大鼠與常氧+鞣花酸組大鼠肺組織MDA含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。6.與常氧組肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞相比,低氧組肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞ROS明顯增高(p0.05),低氧+鞣花酸組肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞ROS水平與單純低氧組肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞相比明顯下降(p0.05)。7.與常氧組相比較,低氧組大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的p38MAPK和ERK1/2蛋白的表達(dá)水平明顯升高(p0.05),與單純低氧組相比,低氧+鞣花酸組大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞p38MAPK和ERK1/2蛋白的表達(dá)水平明顯明顯下降(p0.05)。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R544.1
【部分圖文】：

3結(jié)果.鞣花酸對(duì)缺氧肺動(dòng)脈高壓大鼠右心室收縮壓及肥厚指數(shù)的影.1 根據(jù)各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，低氧處理4周后，低氧處理組大壓（RVSP）明顯比常氧組大鼠及常氧+鞣花酸組高（p<0.05）PBS液組大鼠 RVSP明顯比低氧+鞣花酸組大鼠高（p<0.05與常氧+鞣花酸組大鼠相比，RVSP差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>-1。

圖1-2.鞣花酸對(duì)缺氧肺動(dòng)脈高壓大鼠右心肥厚指數(shù)影響Figure1-2.Effect of ellagic acid on right heart hypertwith hypoxic pulmonary hypertension注：*p<0.05 與常氧組相比較，#p<0.05 與缺氧組相比較.鞣花酸對(duì)缺氧肺動(dòng)脈高壓大鼠血管平滑肌細(xì)-SMA）表達(dá)影響。氧環(huán)境下肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的過(guò)度增殖是缺氧性肺要病理基礎(chǔ)。肺動(dòng)脈平滑肌過(guò)度增殖，導(dǎo)致肺血管的重構(gòu)。α-SMA 蛋白是平滑肌特異性蛋白，可通過(guò)血管的變化。觀察各組大鼠肺組織染色切片發(fā)現(xiàn)，常酸組大鼠相比較，肺血管結(jié)構(gòu)物明顯變化。單純低組相比，肺血管中膜增厚明顯。低氧+鞣花酸組大鼠較，肺血管中膜厚度明顯下降。見(jiàn)圖2-1。

圖1-2.鞣花酸對(duì)缺氧肺動(dòng)脈高壓大鼠右心肥厚指數(shù)影響2.Effect of ellagic acid on right heart hypertoxic pulmonary hypertension.05 與常氧組相比較，#p<0.05 與缺氧組相比較對(duì)缺氧肺動(dòng)脈高壓大鼠血管平滑肌細(xì)影響。動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的過(guò)度增殖是缺氧性肺。肺動(dòng)脈平滑肌過(guò)度增殖，導(dǎo)致肺血管-SMA 蛋白是平滑肌特異性蛋白，可通過(guò)。觀察各組大鼠肺組織染色切片發(fā)現(xiàn)，常比較，肺血管結(jié)構(gòu)物明顯變化。單純低血管中膜增厚明顯。低氧+鞣花酸組大鼠中膜厚度明顯下降。見(jiàn)圖2-1。

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