越來越多的研究表明骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic syndrome,MDS)MDS是造血干細(xì)胞和骨髓微環(huán)境均存在異常的一組腫瘤性疾病。間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell,MSC)是構(gòu)成骨髓微環(huán)境中的關(guān)鍵細(xì)胞。雖然動物實(shí)驗(yàn)表明骨髓MSC中的原發(fā)異�？梢詫�(dǎo)致造血干細(xì)胞DNA出現(xiàn)損傷和MDS樣病態(tài)造血,但關(guān)于MDS患者來源的MSC生物學(xué)特點(diǎn)的研究的比較少,并且研究結(jié)果并不完全一致。因此,本研究對MDS來源的MSC的功能特點(diǎn)及其在地西他濱作用下的變化進(jìn)行了研究。研究方法:收集了40例就診于廣東省人民醫(yī)院未經(jīng)治療的新診斷的MDS患者和17例營養(yǎng)性貧血患者的骨髓標(biāo)本。體外培養(yǎng)并鑒定MSC,在適當(dāng)條件下誘導(dǎo)MSC向成骨細(xì)胞分化通過茜素紅染色觀察鈣結(jié)節(jié)形成情況;通過成纖維細(xì)胞集落形成單位實(shí)驗(yàn)評估MSC的克隆形成潛能、根據(jù)公式計算MSC的增殖能力、MTT實(shí)驗(yàn)測定MSC的增殖曲線;通過實(shí)時定量PCR分析MSC中的基因表達(dá)、流式細(xì)胞術(shù)分析MSC的細(xì)胞周期、凋亡特點(diǎn)。分析地西他濱對MDS來源的MSC的增殖、細(xì)胞周期、凋亡和基因表達(dá)的影響。通過MDS來源的MSC與外周血單個核細(xì)胞體外共培養(yǎng),應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析地西他濱對MDS來源的MSC誘導(dǎo)活化T細(xì)胞分化為調(diào)節(jié)T細(xì)胞的影響。結(jié)果:所有對照組MSC均能實(shí)現(xiàn)體外生長,40例MDS患者中有9例患者的MSC不能在體外實(shí)現(xiàn)增殖。對照組均呈現(xiàn)纖細(xì)的纖維樣外觀,而MDS來源的MSC多呈現(xiàn)扁平、多角形外觀,體積較對照組大。MDS來源的MSC的克隆形成能力、增殖能力低于對于對照組。MDS來源的MSC誘導(dǎo)分化后形成的鈣結(jié)節(jié)數(shù)量、分化前調(diào)節(jié)成骨分化轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)水平低于對照組。MDS來源的MSC中參與調(diào)控造血干細(xì)胞向MDS、AML轉(zhuǎn)化有關(guān)的Dicer1和Jagged-1的基因表達(dá)升高。MDS來源的MSC在G0/G1期的細(xì)胞比例高于對照組,而S期的細(xì)胞比例低于對照組(P0.05)。MDS來源的MSC中早期凋亡細(xì)胞明顯高于對照組(P0.05)。地西他濱(0.25μM)對MDS來源的MSC的增殖和凋亡能力沒有明顯影響,但能夠改變MDS來源的MSC的細(xì)胞周期分布,降低G0/G1細(xì)胞比例的同時增加了G2/M比例。地西他濱能夠削弱MDS來源的MSC誘導(dǎo)活化的T細(xì)胞分化為Tregs的能力,并且降低MDS來源的MSC中免疫抑制分子PD-L1的表達(dá)。結(jié)論:MDS來源的MSC的生物學(xué)特點(diǎn)發(fā)生改變,表現(xiàn)的細(xì)胞體積增大,增殖能力下降,大部分細(xì)胞停滯GO/G1期、早期凋亡細(xì)胞比例增加、MDS來源的MSC的成骨分化能力下降,參與調(diào)控造血干細(xì)胞向MDS轉(zhuǎn)化的Dicer1和Jagged-1的基因表達(dá)升高。地西他濱能夠部分改變MDS來源的MSC的生物學(xué)特點(diǎn),降低了MDS來源的MSC在G0/G1期的比例,削弱了MDS來源的MSC誘導(dǎo)活化的T細(xì)胞分化為Tregs的能力,降低了MDS來源的MSC中免疫抑制分子PD-L1的表達(dá)。因此,MDS來源的MSC的功能改變可能在MDS疾病進(jìn)展中發(fā)揮了重要作用,并可能成為潛在的治療靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R551.3
【部分圖文】：

邐ＣＤ４５邋ＦＪＴＣ－Ａ邐Ｃ０Ｊ４邋ＦＩＴＣ－Ａ逡逑圖１－２邋ＭＳＣ的的表面抗原淡藍(lán)色代表的陰性對照組，紅色代表的對照組或ＭＤＳ的表達(dá)。逡逑Ｆｉｇ．邋１－２邋Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ邋ｈｉｓｔｏｇｒａｍｓ邋ａｒｅ邋ｓｈｏｗｎ．邋Ｌｉｇｈｔ邋ｂｌｕｅ邋ｒｅｐｒｅｓｅｎ

逑ｍｕ逡逑圖１－１邋ＭＳＣ的形態(tài)特點(diǎn)。雖然ＭＤＳ來源的ＭＳＣ與對照組ＭＳＣ均表現(xiàn)為纖維樣外觀，但是ＭＤＳ逡逑來源的ＭＳＣ體積增大，多呈現(xiàn)多角形外觀。（Ａ）為對照組ＭＳＣ，（Ｂ）邋ＭＤＳ來源的ＭＳＣ。逡逑（比例尺代表１００ｍｍ）逡逑Ｆｉｇ．邋１－１邋Ａｌｔｈｏｕｇｈ邋ｂｏｔｈ邋ＭＳＣ邋ｆｒｏｍ邋ＭＤＳ邋ｐａｔｉｅｎｔｓ邋ａｎｄ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｃｅｌｌｓ邋ｄｉｓｐｌａｙｅｄ邋ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ－ｌｉｋｅ逡逑ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，邋ｔｈｅ邋ｍｏｓｔ邋ＭＳＣ邋ｆｒｏｍ邋ＭＤＳ邋ｐａｔｉｅｎｔｓ邋ｗｅｒｅ邋ｌａｒｇｅｒ邋ａｎｄ邋ｐｏｌｙｇｏｎａｌ邋ｓｈａｐｅ．邋（Ａ）邋ｃｏｎｔｒｏｌ逡逑ｇｒｏｕｐ邋（Ｂ）邋ＭＳＣ邋ｆｒｏｍ邋ＭＤＳ邋ｐａｔｉｅｎｔｓ邋ｇｒｏｕｐ．邋（Ｓｃａｌｅ邋ｂａｒｓ邋ｉｎｄｉｃａｔｅ邋１００邋ｍｍ）逡逑ｌｌｉｄｂｒ邋ｉＬｋ：．邋ｌｉＪｔＭ逡逑＜0＜邐邐ｉｏ＞邐ｉｂ＊邐＂ｔ（ｆ邋＂邐＂Ｏ＇邐ｉｏ＊邐ｗ邐？0＇邐ｔｏ＊邐ｉｏ１邐ｉｏ＊邐ｉｏ？逡逑Ｃ０１６６邋ＰＣ－Ａ邐＾邐Ｃ０１０５Ｐ￡－Ａ＿邐你邐ＣＤ９０邋Ｆ１ＴＣ－Ａ逡逑ｒ邐0？邋ｒ邋ｋ逡逑３ｍ？．ｉ邐＇邋Ｊ１００；邐Ｉ邐—邐１邋Ｊ＇？邐卜邐１逡逑Ｉｎ

本文編號：2829426