目的:動(dòng)脈粥樣硬化是嚴(yán)重危害人類生存健康的一種心腦血管類疾病。至今人類對(duì)其發(fā)病機(jī)制仍不完全清楚。傳統(tǒng)學(xué)說(shuō)一直認(rèn)為血脂水平和血管內(nèi)皮損傷是引起動(dòng)脈粥樣硬化的原因,但并不能確定血脂沉積和血管內(nèi)皮損傷哪個(gè)是引起動(dòng)脈粥樣硬化的主要原因。本研究用目前較公認(rèn)的動(dòng)脈粥樣硬化危險(xiǎn)因素如血脂異常、高血壓、吸煙單因素及組合因素的方法制作動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型,動(dòng)態(tài)觀察血管壁的變化過(guò)程,尋找核心致病因素,并厘清血脂水平、血管內(nèi)皮損傷等危險(xiǎn)因素在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病中的權(quán)重及先后順序。方法:(1)動(dòng)物造模選取SPF級(jí)SD大鼠250只,雌雄各半,日齡30-45d,體重在150-200g,隨機(jī)分為正常組30只,雌雄各半,普通飼料喂養(yǎng),自由飲水。高脂組30只,雌雄各半,高脂飼料喂養(yǎng),自由飲水。內(nèi)皮損傷組70只,雌雄各半,組內(nèi)隨機(jī)分成兩組:VD_3組,雌雄各15只;尼古丁組,雌雄各20只。VD_3組大鼠在實(shí)驗(yàn)第一天先腹腔注射VD_3(60萬(wàn)IU/kg)一次,首次給藥后的第3、6、8周末分別給予腹腔注射VD_3(10萬(wàn)IU/kg)加強(qiáng)一次,一直普通飼料喂養(yǎng),自由飲水;尼古丁組大鼠在實(shí)驗(yàn)第一天開始腹腔注射尼古丁(2mg/kg),每天注射一次,連續(xù)注射4周,一直普通飼料喂養(yǎng),自由飲水。高脂+內(nèi)皮損傷組60只,雌雄各半,組內(nèi)也隨機(jī)分成兩組:高脂+VD_3組和高脂+尼古丁組,每組雌雄各15只。高脂+VD_3組大鼠首先高脂喂養(yǎng)4周,第5周開始腹腔注射VD_3(60萬(wàn)IU/kg)一次,首次給藥后的第3、6、8周末分別給予腹腔注射VD_3(10萬(wàn)IU/kg)加強(qiáng)一次,給藥期間及給藥后維持高脂飼料喂養(yǎng),自由飲水;高脂+尼古丁組大鼠先高脂喂養(yǎng)4周,第5周開始腹腔注射尼古丁(2mg/kg),每天注射一次,連續(xù)注射4周,給藥期間及給藥后維持高脂飼料喂養(yǎng),自由飲水。內(nèi)皮損傷+高脂組60只,雌雄各半,組內(nèi)也隨機(jī)分成兩組:VD_3+高脂組和尼古丁+高脂組,每組雌雄各15只。VD_3+高脂組在實(shí)驗(yàn)第1天先腹腔注射VD_3(60萬(wàn)IU/kg)一次,首次給藥后的第3、6、8周末分別給予腹腔注射VD_3(10萬(wàn)IU/kg)加強(qiáng)一次,前4周普通飼料喂養(yǎng),后改用高脂喂養(yǎng),自由飲水;尼古丁+高脂組大鼠在實(shí)驗(yàn)第1天開始腹腔注射尼古丁(2mg/kg),每天注射一次,連續(xù)注射4周,給藥期間的4周普通飼料喂養(yǎng),后改用高脂飼料喂養(yǎng),自由飲水。實(shí)驗(yàn)造模過(guò)程中記錄各組大鼠的飲食量、飲水量及體重變化情況。(2)標(biāo)本采集及指標(biāo)測(cè)定分別于第6周末、第8周末、第12周末每組取10只大鼠,每組5只雌性,5只雄性。采用油紅O染色、石蠟切片、HE染色技術(shù)及血脂TC、TG檢測(cè)等方法對(duì)所建立的動(dòng)脈粥樣硬化模型進(jìn)行評(píng)價(jià),探討動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制。結(jié)果:(1)先高脂后內(nèi)皮損傷的造模方法可以在12周時(shí)間內(nèi)形成明顯的動(dòng)脈粥樣硬化,單純高脂、單純內(nèi)皮損傷在12周時(shí)間內(nèi)均沒有形成動(dòng)脈粥樣硬化。從油紅染色結(jié)果看:先高脂后內(nèi)皮損傷組大鼠在造模6周時(shí)主動(dòng)脈內(nèi)膜出現(xiàn)不光滑,8周時(shí)主動(dòng)脈內(nèi)膜及血管開口處見明顯油紅著色物質(zhì)并隆起,12周時(shí)血管開口處見明顯油紅著色物質(zhì)并隆起,血管壁脂肪被染成紅色,肉眼可見血管壁凹凸不平,有大小不等的鈣化斑塊,其余各組主動(dòng)脈內(nèi)膜光滑,肉眼未見明顯油紅著色物質(zhì)。從主動(dòng)脈HE染色結(jié)果看:先高脂后內(nèi)皮損傷組12周時(shí)主動(dòng)脈內(nèi)膜、中膜、外模結(jié)構(gòu)紊亂,管腔內(nèi)有大量脂質(zhì)沉積,并可見泡沫細(xì)胞及膽固醇結(jié)晶,其中高脂+VD_3組內(nèi)膜明顯增厚,管腔內(nèi)有明顯斑塊凸起及大量鈣鹽沉積,并可見肉芽組織增生、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和泡沫細(xì)胞聚集,其余各組主動(dòng)脈內(nèi)膜、中膜、外模結(jié)構(gòu)完整,平滑肌排列規(guī)則。(2)對(duì)各組大鼠飲食量、飲水量的統(tǒng)計(jì)結(jié)果:飲食量方面,由于藥物的刺激作用,導(dǎo)致內(nèi)皮損傷組和高脂+內(nèi)皮損傷組大鼠的飲食情況比正常組低,并且出現(xiàn)一定的波動(dòng),以尼古丁這一造模方法波動(dòng)最明顯。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,雄性大鼠的平均每天飲食量高于雌性大鼠,正常組大鼠飲食量雄性在25g,雌性在22g附近波動(dòng);高脂組大鼠飲食量雄性在22g,雌性在16g附近波動(dòng)。飲水量方面,正常組及高脂組大鼠的飲水量在20-30mL附近波動(dòng),而使用藥物干預(yù)的各組大鼠飲水量出現(xiàn)了大幅度的波動(dòng),其中以VD_3這一造模方法出現(xiàn)的波動(dòng)幅度最明顯。(3)對(duì)各組大鼠體重的統(tǒng)計(jì)結(jié)果:同時(shí)間點(diǎn)同組別雌雄大鼠比較結(jié)果:各組大鼠的雄性大鼠體重增加百分比均顯著多于相應(yīng)的雌性大鼠;同性別同時(shí)間點(diǎn)不同組別之間體重增加百分比組間兩兩比較結(jié)果:與正常組和高脂組比較,尼古丁組大鼠在6周、8周、12周三個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)體重增加百分比均顯著減少(P0.05);與高脂組比較,VD_3組大鼠在6周、8周、12周三個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)體重增加百分比均顯著減少(P0.05)。(4)對(duì)各組大鼠血脂的統(tǒng)計(jì)結(jié)果:血清TC:相同時(shí)間相同組別的雄性和雌性大鼠血清血脂TC比較結(jié)果:高脂組、VD_3組和尼古丁+高脂組雌性大鼠的血清TC在6、8、12周三個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)較雄性大鼠顯著增加(P0.05);相同時(shí)間點(diǎn)同性別大鼠組間兩兩比較結(jié)果:與正常組比較,在6周、8周、12周三個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn),高脂組大鼠的血清TC均顯著增加(P0.05);與高脂組比較,在6周、8周、12周三個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn),高脂+VD_3、高脂+尼古丁組大鼠的血清TC無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);與高脂組比較,VD_3+高脂、尼古丁+高脂組大鼠在6周的血清TC顯著降低(P0.05),在8周、12周兩個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);與高脂+VD_3組比較,VD_3+高脂組大鼠的血清TC在6周顯著降低(P0.05),在8周、12周兩個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);與高脂+尼古丁組比較,尼古丁+高脂組大鼠的血清TC在6周顯著降低(P0.05),在8周、12周兩個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。血清TG:8周時(shí),與相同組別的雄性大鼠比較,雌性大鼠的血清TG均顯著減少(P0.05)。相同時(shí)間點(diǎn)同性別大鼠組間兩兩比較結(jié)果:與高脂組比較,在6周、8周、12周三個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn),高脂+VD_3、高脂+尼古丁組大鼠的血清TG均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:(1)高脂環(huán)境下出現(xiàn)血管內(nèi)皮損傷是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的主要途徑。高脂+VD_3及高脂+尼古丁的造模方法可在12周時(shí)間內(nèi)形成明顯的動(dòng)脈粥樣硬化,單純高脂、單純內(nèi)皮損傷、先內(nèi)皮損傷后高脂在12周時(shí)間內(nèi)均無(wú)法形成動(dòng)脈粥樣硬化。(2)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病可能是因?yàn)檠趦?nèi)皮下長(zhǎng)期的沉積,造成了血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷,血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷與高脂血癥對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的形成產(chǎn)生的協(xié)同作用加速了血管壁硬化,在其它多因素的影響下最終導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。(3)高脂喂養(yǎng)可以形成高脂血癥動(dòng)物模型,且在高脂血癥形成過(guò)程中,雌性SD大鼠較同時(shí)期的雄性大鼠血脂水平更高,更易形成高脂血癥。(4)相同時(shí)間內(nèi),同種造模方法的雄性大鼠體重明顯高于雌性大鼠,且體重和血脂之間沒有必然相關(guān)性。
【學(xué)位單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R543.5
【部分圖文】：

圖 1a 雄性大鼠飲食量變化趨勢(shì)圖圖 1b 雌性大鼠飲食量變化趨勢(shì)圖由圖 1a、圖 1b 可以看出，未使用藥物的正常組大鼠飲食量雄性在 25g，雌性在22g 附近波動(dòng)；高脂組大鼠飲食量雄性在 22g，雌性在 16g 附近波動(dòng)。由于藥物的刺

18圖 1b 雌性大鼠飲食量變化趨勢(shì)圖由圖 1a、圖 1b 可以看出，未使用藥物的正常組大鼠飲食量雄性在 25g，雌性在22g 附近波動(dòng)；高脂組大鼠飲食量雄性在 22g，雌性在 16g 附近波動(dòng)。由于藥物的刺激作用，導(dǎo)致內(nèi)皮損傷組和高脂+內(nèi)皮損傷組大鼠的飲食情況比正常組低，并且出現(xiàn)一定的波動(dòng)，以尼古丁這一造模方法波動(dòng)最明顯。

雄性大鼠飲水量變化趨勢(shì)圖

【參考文獻(xiàn)】

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