研究背景與目的:阿霉素(Doxorubicin,Dox)是使用最廣泛的蒽環(huán)類抗腫瘤藥物,療效顯著,但因具有嚴重心臟毒性,臨床應用受限。長期以來,阿霉素心臟毒性研究甚多,具體哪一種機制起主導作用尚未明確。阿霉素作用于心肌組織最嚴重的后果是導致正常心肌組織的凋亡和壞死,最終心肌細胞被纖維組織取代,形成以肌成纖維細胞增多為特點的心肌纖維化。心肌纖維化是心肌重構的主要內容。內皮間質轉化(Endothelial to mesenchymal transition,EndoMT)是指內皮細胞受到損傷后可向間質細胞轉化,最近有研究表明內皮間質轉化在纖維化疾病中具有重大的作用。本研究目的:通過1.構建化療藥物阿霉素誘導Sprague Dawley(SD)大鼠心肌纖維化模型。2.揭示內皮間質轉化參與阿霉素誘導的SD大鼠心肌纖維化的形成,探討阿霉素心肌病形成的新機制,為阿霉素心肌病的防治提供新的策略。方法:SD大鼠共48只,雌雄各半,年齡6周,體重180g左右。隨機分為3個實驗組和1個對照組(control),實驗組大鼠采用鹽酸阿霉素2mg/kg/周的劑量給予腹腔注射一次,對照組給予等量的生理鹽水,分別于注射后0day,1W,2W,6W后取材。根據(jù)取材時間將實驗組分為阿霉素1W,2W和6W組(DOX-1W,DOX-2W和DOX-6W)。1.應用HE染色和Masson三色染色方法檢測SD大鼠心肌組織病理形態(tài)學改變。2.通過NCBI Primer-Blast法設計引物,RT-qPCR方法檢測纖維化相關基因Col1α、Col3α、TGF-β1 mRNA表達。3.應用免疫組織化學法檢測心肌組織TGF-β1表達。4.應用羥脯氨酸試劑盒檢測方法檢測阿霉素誘導的SD大鼠心臟組織中羥脯氨酸(HYP)含量。5.免疫熒光染色驗證阿霉素毒副作用導致的心肌組織EndoMT現(xiàn)象。結果:1.大鼠腹腔注射阿霉素(2mg/kg,每周1次)后,所有大鼠均出現(xiàn)毛發(fā)稀少,腹部膨隆,毛發(fā)色澤差,約有1/3的大鼠因急性心率失常而死亡。2.隨著阿霉素作用時間的延長,阿霉素6W組大鼠均出現(xiàn)心包積液和腹腔積液。HE染色和Masson三色染色結果表明阿霉素心肌病大鼠出現(xiàn)顯著的心室腔擴大、心壁變薄、心肌纖維間隙增寬、心肌溶解、心肌纖維化、心肌血管內皮損傷和通透性增加等病理形態(tài)學改變。實驗組相比于對照組心肌纖維化程度明顯(P0.05)。3.RT-qPCR結果顯示實驗組相比于對照組纖維化相關因子Col1α、Col3α和TGF-β1的表達增多(P0.05)。阿霉素心肌組織TGF-β蛋白明顯增加。4.隨著阿霉素作用時間的延長,心肌羥脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量逐漸升高,6W組相比于1W,2W含量顯著升高,實驗組與對照組相比意義顯著(P0.05)。5.阿霉素心肌纖維化大鼠心臟血管內皮細胞出現(xiàn)內皮間質轉化現(xiàn)象。結論:1.阿霉素可誘導SD大鼠形成不可逆的心肌纖維化,本課題成功構建了阿霉素心肌纖維化模型。2.內皮間質轉化參與SD大鼠阿霉素心肌纖維化的形成,在阿霉素心肌纖維化形成中起重要作用。預防或者治療內皮間質轉化可能成為治療阿霉素心肌纖維化的有效手段。
【學位單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R542.2;R730.53
【部分圖文】：

圖 3.1 control 組和 DOX-6W 組大鼠心臟 HE 染色圖片ig 3.1 HE staining for doxorubicin induced cardiac fibrosis.A. 對照組和 DOX-6W組大鼠臟 HE 染色整體圖片。B. 對照組和 DOX-6W 組大鼠心臟切片 HE 染色顯微鏡下放大 50倍、200 倍圖片。.2.2 Masson 染色結果實驗組大鼠腹腔注射阿霉素之后，隨著累計劑量增加，實驗組 SD 大鼠較控

圖 3.2 阿霉素誘導心肌組織中膠原產生Fig 3.2 Collagen production in doxorubicin induced cardiac fibrosis.A.Masson 染色檢測心臟橫截面纖維化膠原表達情況。B. 每組 Masson 染色圖像的纖維面積與心臟總面積之比.(x_±s，n =6) *P<0.05 與對照組比較. **P<0.01 與對照組比較.IPP 統(tǒng)計可得正常組心肌纖維比率為 1.99±0.56%，DOX-1W 組纖維化比率為8.75±1.03%，DOX-2W 組纖維化比率為 12.34±1.69%，DOX-6W 組纖維化比率為22.06±2.97；DOW-6W 組大鼠心肌間質及血管周圍膠原面積顯著高于對照組（P<0.05）；（圖 3.2B）。3.3 心肌組織膠原纖維基因表達細胞外基質的過量產生和沉積是心肌纖維化的主要特點。纖維化組織中膠原纖維的主要成分為 I 型膠原和 III 型膠原。qPCR 檢測結果顯示對照組大鼠心肌組織心肌纖維化相關基因 Col1α mRNA 的相對表達量為 1.40±0.27，DOX-1W 組的

圖 3.3 阿霉素誘導心肌纖維化相關基因的表達ig 3.3 doxorubicin-induced cardiac fibrosis-related gene expression.A, Col1αmRNA 表達水平。. B, Col3α mRNA 表達水平.(x_±s，n =6)*P<0.05 與對照組比較..4 纖維化因子 TGF-β1 的基因和蛋白表達纖維化因子 TGF-β1qPCR 的檢測結果顯示：對照組 SD 大鼠心肌組織GF-β1mRNA 的相對表達量為 1.10±0.26（n=6）；DOW-1W 組的相對表達量為.22±0.47（n=6），DOW-2W 組的相對表達量為 2.20±0.60（n=6），DOW-6W 組表達為 19.80±3.23，顯著高于對照組（P<0.05）（圖 3.4A）。免疫組織化學染色示，TGF-β1 陽性表達呈棕黃色顆粒狀，位于細胞質中。對照組大鼠心肌組織GF-β1 相對表達量很少（圖 3.4B），DOW-1W 組相對表達量較少（圖 3.4C），OW-2W 組相對表達量較多（圖 3.4D），DOW-6W 組相對表達量很多（P<0.05)圖 4E）。

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 王世強;常蕓;李丹;黃曉麗;何艷群;饒志堅;;運動性心肌纖維化的發(fā)生特征、可能機制和消退逆轉[J];體育科學;2018年11期

2 吳限;黎明江;李莎;;心肌纖維化病理染色鑒定方法的綜合評價[J];醫(yī)學研究雜志;2017年09期

3 潘麗萍;心肌纖維化的機制及干預治療[J];臨床醫(yī)學;2005年10期

4 王世強;李丹;劉奧峰;;運動改善疾病所致心肌纖維化研究進展[J];中國運動醫(yī)學雜志;2019年03期

5 束長城;魏萬林;;中醫(yī)藥逆轉心肌纖維化的研究進展[J];中國循證心血管醫(yī)學雜志;2011年01期

6 于茜;鐘久昌;朱鼎良;;腎素-血管緊張素系統(tǒng)與心肌纖維化及重塑[J];心血管康復醫(yī)學雜志;2009年06期

7 張海嘯;史載祥;;轉化生長因子-β信號傳導通路與心肌纖維化[J];中日友好醫(yī)院學報;2007年02期

8 Naβenstein K;Breuckmann F;Huger M;楊岷;;對比增強MRI診斷系統(tǒng)性硬化患者心肌纖維化[J];放射學實踐;2009年05期

9 趙樹梅;沈潞華;;過氧化物酶體增殖物激活受體通路與心肌纖維化[J];臨床心血管病雜志;2007年09期

10 曾紫凡;王偉;;中醫(yī)藥治療心肌纖維化的研究進展[J];中國中醫(yī)急癥;2018年03期

相關會議論文 前10條

1 饒志堅;常蕓;;炎癥在運動性心肌纖維化中的作用[A];第四屆（2016）全國運動生理與生物化學學術會議——運動·體質·健康論文摘要匯編[C];2016年

2 黃力;李琳;;中藥降壓脈凈對心肌組織轉化生長因子-β1的影響及干預心肌纖維化的作用[A];第十次中國中西醫(yī)結合微循環(huán)學術會議論文集[C];2010年

3 劉付生;劉少寶;徐峰;盧天健;;心肌纖維化組織中細胞間力-電耦合特性研究[A];第十一屆全國生物力學學術會議暨第十三屆全國生物流變學學術會議會議論文摘要匯編[C];2015年

4 李楠;龐煒;李麗娟;朱毅;;可溶性表氧化物水解酶在心肌纖維化中的作用[A];中國病理生理學會第九屆全國代表大會及學術會議論文摘要[C];2010年

5 謝燁卿;陳瑞珍;陳灝珠;;病毒誘導的內皮間質纖維化在心肌炎心肌纖維化中的作用及機制[A];中華醫(yī)學會第十五次全國心血管病學大會論文匯編[C];2013年

6 劉詩英;王夢洪;;結締組織生長因子與心肌纖維化[A];江西省第四次中西醫(yī)結合心血管學術交流會論文集[C];2008年

7 李萌;呂仕超;吳美芳;張軍平;;不同原因誘導的心肌纖維化動物模型的建立[A];中華醫(yī)學會第十五次全國心血管病學大會論文匯編[C];2013年

8 謝燁卿;陳瑞珍;李明輝;汪云開;虞勇;郭棋;楊英珍;;Catestatins抑制心肌纖維化機制的探討[A];中華醫(yī)學會第11次心血管病學術會議論文摘要集[C];2009年

9 程志清;忻尚平;;通心絡對病毒性心肌炎慢性期心肌纖維化作用的實驗研究[A];第六次全國中西醫(yī)結合血瘀證及活血化瘀研究學術大會論文匯編[C];2005年

10 劉詩英;王夢洪;左漢恒;付勇南;彭敏峰;;葛根素對慢性心肌纖維化大鼠心臟功能和結締組織生長因子的影響[A];江西省第四次中西醫(yī)結合心血管學術交流會論文集[C];2008年

相關重要報紙文章 前6條

1 記者 聶松義 通訊員 張勇;缺血性心肌纖維化研究有進展[N];健康報;2012年

2 徐亞靜;川芎嗪抗心肌纖維化機理研究取得進展[N];中國醫(yī)藥報;2012年

3 記者 嚴少衛(wèi);補腎活血復方能抗心肌纖維化[N];健康報;2010年

4 福建省人民醫(yī)院 福建醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院高血壓研究所 姚沽　謝筱露 謝良地 王華軍 許昌聲;腦心通對自發(fā)性高血壓大鼠心肌纖維化的影響[N];醫(yī)藥經濟報;2010年

5 冼紹祥 胡世云 劉小虹;天麻鉤藤飲干預高血壓病患者心肌纖維化的臨床研究[N];中國中醫(yī)藥報;2004年

6 ;復方鱉甲軟肝方可有效抑制高血壓大鼠心肌纖維化[N];中國中醫(yī)藥報;2005年

相關博士學位論文 前10條

1 尹玉潔;基于脈絡學說探討內皮間質轉分化在AMI后心肌纖維化中的病理機制及通絡干預研究[D];河北中醫(yī)學院;2019年

2 肖楊杰;MicroRNA-146a調控縮窄性心包炎心肌纖維化的分子機制及超聲影像學研究[D];中國醫(yī)科大學;2019年

3 饒志堅;運動性心肌纖維化發(fā)生過程中炎癥介質變化的研究[D];上海體育學院;2019年

4 石桂良;阿哌沙班保護小鼠缺血誘導性心肌纖維化的機制研究[D];蘇州大學;2018年

5 張麗暉;胰高血糖素樣肽-1抑制血管緊張素Ⅱ所致高血壓大鼠心肌纖維化和炎癥反應的機制研究[D];山西醫(yī)科大學;2015年

6 王國位;MiR-223-3p致大鼠心肌纖維化機制的研究[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學;2019年

7 徐華;miR-21靶向調控Jagged1促進心肌纖維化[D];南昌大學;2018年

8 邱智東;參草菌質對大鼠心肌纖維化的抑制作用及機制研究[D];長春中醫(yī)藥大學;2016年

9 張召才;病毒性心臟病心肌纖維化的發(fā)生機制及其藥物干預研究[D];復旦大學;2004年

10 張海嘯;大蒜素對左室重構和心肌纖維化的影響及機理研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2007年

相關碩士學位論文 前10條

1 周沁;CNA35膠原靶向氟碳納米粒檢測心肌纖維化的超聲分子顯像研究[D];重慶醫(yī)科大學;2019年

2 張艷婷;3D-STE評估終末期DCM患者心肌應變與心肌纖維化相關性研究[D];華中科技大學;2019年

3 代晨;miR-369-5p介導PTCH1甲基化修飾在心房纖維化進展中的機制研究[D];安徽醫(yī)科大學;2019年

4 滕春曉;五味子乙素在心肌纖維化中對AKT、mTOR、TGF-β1表達的影響[D];延邊大學;2019年

5 鄧飛艷;阿霉素心肌纖維化模型構建及其機制探討[D];南華大學;2019年

6 鐘德琳;T1-mapping和細胞外容積（ECV）定量鐵過載所致心肌纖維化巴馬豬模型的研究[D];廣西醫(yī)科大學;2019年

7 李夢佳;靶向干擾Kv1.3通道基因介導的Treg細胞活化與逆轉心肌纖維化機制研究[D];新疆醫(yī)科大學;2019年

8 洪雪冬;心臟磁共振對原發(fā)擴張型心肌病左心整體功能和心肌纖維化的應用研究[D];安徽醫(yī)科大學;2019年

9 程慶強;CCL_7與TGF-β1致心肌纖維化的交互機制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學院;2018年

10 付舒;淫羊藿次苷Ⅱ對自發(fā)性高血壓大鼠心肌纖維化的作用及機制研究[D];遵義醫(yī)學院;2018年

本文編號：2822009