發(fā)布時(shí)間：2020-09-16 20:03

　　 背景心肌肥大是指心臟因容量和(或)壓力負(fù)荷增加而致心肌細(xì)胞體積增大,核內(nèi)基因如心房利鈉肽(ANP)、B型利鈉肽(BNP)、β-肌球蛋白重鏈(β-MHC)等表達(dá)增多,心肌肥大如果由代償期進(jìn)展為為失代償期,使心肌的功能不能長(zhǎng)期維持正常功能而導(dǎo)致心力衰竭的發(fā)生,探究心肌肥大的發(fā)生發(fā)展機(jī)制對(duì)延緩心力衰竭的進(jìn)展具有重要的臨床意義。骨形成蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)作為信號(hào)分子,也是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β超家族中的一員,目前對(duì)于骨形成蛋白4的研究不僅在胚胎發(fā)育、骨組織形成發(fā)育、促進(jìn)骨痂形成、內(nèi)耳神經(jīng)纖維發(fā)育等方面有誘導(dǎo)和促進(jìn)作用,而且可以誘導(dǎo)病理性心肌肥厚,具體調(diào)節(jié)機(jī)制尚不明確。因此在本實(shí)驗(yàn)中我們對(duì)H9c2心肌細(xì)胞肥大與PI3K-Akt通路及自噬關(guān)系作一探討。目的探討骨形成蛋白4(BMP4)通過(guò)磷脂酰肌醇3-蛋白激酶B(PI3K-Akt)通路和自噬誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞肥大的機(jī)制。方法首先培養(yǎng)大鼠心肌細(xì)胞株H9c2。隨機(jī)選取狀態(tài)良好的H9c2心肌細(xì)胞,用含有1%胎牛血清、雙抗的DMEM培養(yǎng)基饑餓細(xì)胞24h,24h后用不同的藥物作用于細(xì)胞,隨機(jī)將培養(yǎng)的H9c2分為四組:(1)正常對(duì)照組(2)BMP4處理組(50ng/ml)(3)PI3K抑制劑LY294002(25μM)預(yù)處理120min,再行BMP4刺激(50ng/ml)組(4)自噬抑制劑3MA(10mmol/L)預(yù)處理120min,再行BMP4刺激(50ng/ml)組。觀察以50ng/ml的BMP4作用不同時(shí)間(0、1h、4h、8h、12h、24h)后H9c2心肌細(xì)胞Akt蛋白磷酸化的表達(dá)變化。各組分別使用相應(yīng)因素干預(yù)48h小時(shí)后進(jìn)行檢測(cè)相應(yīng)指標(biāo)。倒置顯微鏡仔細(xì)觀察細(xì)胞形態(tài)大小,用顯微鏡取照,Image J軟件檢測(cè)分析各組細(xì)胞表面積,各組細(xì)胞用細(xì)胞刮刮取蛋白后用BCA方法測(cè)定細(xì)胞總蛋白含量及單細(xì)胞蛋白含量,Western blot測(cè)定P-PI3K和PI3K、Akt和P-Akt、平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、心肌肥大標(biāo)志物腦鈉肽BNP(Brain natriuretic peptide),自噬相關(guān)蛋白LC3的蛋白表達(dá)。結(jié)果1.與對(duì)照組相比,BMP4組細(xì)胞面積(593.73±53.70);蛋白含量(214.21±19.22)BNP(1.45±0.12);LY294002+BMP4組細(xì)胞面積(256.41±51.31);蛋白含量(134.73±13.83);BNP(0.45±0.10)減少了心肌細(xì)胞面積的增加(P0.05)。2.BMP4增加了心肌肥大時(shí)的自噬相關(guān)蛋白LC3含量(P0.01)的表達(dá),而自噬抑制劑3MA、PI3K/Akt抑制劑LY294002能降低BMP4的作用(P0.05)。3.與對(duì)照組相比,BMP4誘導(dǎo)1小時(shí)后P-Akt水平升高(P0.01)。3MA、LY294002處理后,能夠減弱BMP4誘導(dǎo)的P-PI3K、P-Akt的活化(P0.05)。BMP4誘導(dǎo)48h后BNP、α-SMA表達(dá)增高(P0.01)。結(jié)論1.骨形成蛋白4(BMP4)能增加H9c2心肌細(xì)胞表面積、促進(jìn)蛋白合成量,并上調(diào)心肌細(xì)胞胚胎基因BNP、α-SMA的表達(dá)。2.自噬抑制劑3MA能夠減弱BMP4誘導(dǎo)的心肌肥大。3.PI3K/Akt抑制劑LY294002干預(yù)處理后能減弱骨形成蛋白4誘導(dǎo)的心肌肥大。4.骨形成蛋白4(BMP4)可以誘導(dǎo)心肌肥大,可能與通過(guò)激活PI3K-Akt通路,增加自噬活性而誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞肥大。
【學(xué)位單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R54
【部分圖文】：

BMP4 刺激心肌細(xì)胞不同時(shí)間對(duì) P-Akt 蛋白表達(dá)的比較h、24h；F=10.465，vs 1h 組，*P<0.05Y294002和3MA對(duì)PI3K、Akt磷酸化的影響 、P-Akt水平較對(duì)照組顯著升高（P<0.01），但LY29400P-PI3K、P-Akt水平較單純BMP4刺激組減弱，且差異4。

20圖3 不同處理心肌細(xì)胞對(duì)P-Pi3k的影響 1：對(duì)照組 2：BMP4組3.BMP4+3MA組4：BMP4+LY294002組；F=25.094，與對(duì)照組比，*P<0.01；與BMP4組比，#P<0.05圖 4 不同處理對(duì)心肌細(xì)胞 P-Akt 蛋白的影響 1：對(duì)照組 2：BMP4 組 3：BMP4+LY294002組 4：BMP4+3MA 組；F=27.204，與對(duì)照組比，*P<0.01；與 BMP4 組比，#P<0.05

不同處理心肌細(xì)胞對(duì)P-Pi3k的影響 1：對(duì)照組 2：BMP4組3.BMP4+3MA組4：4+LY294002組；F=25.094，與對(duì)照組比，*P<0.01；與BMP4組比，#P<0.05

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 孫曉慧;尹茂山;牟艷玲;;2型糖尿病大鼠早期心肌病mTOR信號(hào)通路的改變與自噬損傷[J];中華病理學(xué)雜志;2016年10期

2 韋勇;楊四軍;;細(xì)胞自噬的調(diào)控與自噬程序性死亡的研究進(jìn)展[J];國(guó)際免疫學(xué)雜志;2016年05期

3 李勇;趙水平;葉平;嚴(yán)曉偉;母義明;魏毅東;胡大一;;中國(guó)血脂異常門診患者調(diào)脂治療一級(jí)和二級(jí)預(yù)防達(dá)標(biāo)現(xiàn)狀:DYSIS-China亞組分析[J];中華心血管病雜志;2016年08期

4 張穎;胡舜英;尹彤;田峰;王珊;張穎倩;陳韻岱;;利拉魯肽通過(guò)PI3K/Akt和MAPK/ERK通路促進(jìn)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2015年09期

5 洪駿;王鋒;印中鵬;汪俊軍;牛冬梅;;冠心病患者血漿纖維蛋白原與脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2水平[J];現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2015年05期

6 曹原;沈濤;黎健;;應(yīng)激狀態(tài)下的心臟自噬:自噬作用是有益還是有害?[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2015年04期

7 陳偉偉;高潤(rùn)霖;劉力生;朱曼璐;王文;王擁軍;吳兆蘇;李惠君;鄭哲;蔣立新;胡盛壽;;《中國(guó)心血管病報(bào)告2014》概要[J];中國(guó)循環(huán)雜志;2015年07期

8 胡春松;吳清華;胡大一;;中國(guó)心血管現(xiàn)狀:挑戰(zhàn)與對(duì)策[J];中華高血壓雜志;2015年07期

9 張黛;朱敏玲;張曉卉;尹新華;;自噬與心血管疾病關(guān)系的研究進(jìn)展[J];臨床內(nèi)科雜志;2015年07期

10 張昌琳;喬樹賓;;Apelin-APJ系統(tǒng)在心肌肥厚發(fā)生發(fā)展過(guò)程中作用的研究進(jìn)展[J];中國(guó)循環(huán)雜志;2015年04期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 謝鳳;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激—自噬途徑介導(dǎo)apelin-13誘導(dǎo)大鼠H9c2心肌細(xì)胞肥大研究[D];南華大學(xué);2014年

本文編號(hào)：2820313