發(fā)布時間：2020-09-08 13:53

　　 中間型β-地中海貧血(β-Thalassaemia Intermedia,β-TI)表型異質(zhì)性大,其修飾因子主要包括影響γ-珠蛋白基因型表達的修飾基因、β-珠蛋白基因突變類型和a-珠蛋白基因突變等。其中,影響γ-珠蛋白基因型表達的修飾因子相關(guān)研究集中在一些可調(diào)節(jié)胎兒血紅蛋白(Fetal Hemoglobin,Hb F)水平的順式表達原件和反式作用因子。近年來研究發(fā)現(xiàn),HBBP1(rs2071348)、HBG2(rs7482144)和HBS1L-MYB(rs9399137)單核苷酸多態(tài)性位點與Hb F水平相關(guān),但這三個位點在不同地區(qū)和人群中與Hb F水平的關(guān)聯(lián)性不盡相同,呈現(xiàn)出明顯的地理和人群分布差異。目前我國人群中地中海貧血遺傳修飾因子與中間型β-地貧的關(guān)系還缺乏系統(tǒng)的研究數(shù)據(jù)。β-珠蛋白基因突變類型也是影響β-TI表型異質(zhì)性的因素之一,除了 β-地中海貧血突變類型本身的輕重程度影響,一些異常血紅蛋白突變與β-地中海貧血突變復合后也會產(chǎn)生β-TI,如HbE和HbRush等。HbE是云南地區(qū)發(fā)生率最高的β-珠蛋白基因突變類型,在不同民族中具有高發(fā)生率。Hb Rush是一個罕見突變,目前在云南德宏地區(qū)發(fā)現(xiàn)了 17例雜合子攜帶者。這兩個突變發(fā)生在云南地區(qū)的源流以及發(fā)生時間仍是未知。云南是我國地中海貧血高發(fā)地區(qū)之一,HbE/β-地貧突變是最常見的中間型β-地中海貧血突變類型。尤其是位于云南西南部的德宏傣族景頗族地區(qū)地中海貧血的發(fā)生率最高,人群中有較多的中間型β-地中海貧血,但其臨床表現(xiàn)異質(zhì)性和遺傳修飾因子的研究還少有報道。因此探討該地區(qū)人群遺傳多態(tài)性與臨床異質(zhì)性的關(guān)系,進一步了解影響β-地中海貧血修飾因子的本質(zhì)具有重要意義。[目的]本研究旨在分析云南德宏地區(qū)HBBP1、HBG2和HBSIL-MYB基因多態(tài)性位點在HbE患者、β-地貧患者和HbE/β-地貧患者與正常人群四個不同組別中的分布特點,探討上述遺傳修飾位點基因多態(tài)性與Hb F的關(guān)聯(lián)性;同時分析Hb Rush和HbE突變在云南地區(qū)的分布是否由奠基者效應造成,以及推測突變攜帶者可能的起源和最近共同祖先存在的時間。[方法]探討遺傳修飾位點基因多態(tài)性與Hb F關(guān)聯(lián)性時,采用ARMS-PCR法(Amplification Refractory Mutation System,ARMS)和 PCR-RFLP 法(Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP)檢測云南德宏地區(qū) 41 例 HbE/β-地貧,98例β-地貧,89例HbE和192例正常對照樣本的HBBP1(rs2071348)、HBG2(rs7482144)和HBSIL-MYB(rs9399137)等位基因型,并與Hb F進行關(guān)聯(lián)分析;分析Hb Rush突變源流時,采用毛細血管電泳方法檢測17例Hb Rush攜帶者和170例正常對照12個短串聯(lián)重復序列(Short Tandem Repeats,STR)位點等位基因型,通過共同單倍型分析突變可能的源流;分析HbE突變源流時,采用毛細血管電泳方法檢測德昂族17例,景頗族19例,傣族12例,阿昌族8例HbE攜帶者和德昂族75例,景頗族80例,傣族61例,阿昌族72例正常對照12個STR位點等位基因型,通過共同單倍型分析突變可能的源流;用ESTIAGE推算共同祖先時間。[結(jié)果](1)在組間Hb F水平和SNP等位基因分布比較的結(jié)果為:HbE/β-地貧組的Hb F水平顯著高于正常對照組,且在HBBP1(rs2071348)和HBG2(rs7482144)兩位點的最小等位基因頻率(Minor Allele Frequency,MAF)分別為C等位基因(0.87)和T等位基因(0.64),顯著高于正常對照組,在HBS1L-MYβ(rs9399137)位點與正常對照組差異無統(tǒng)計學意義;HbE組的Hb F水平高于正常對照組,且在HBBP1(rs2071348)和 HBG2(rs7482144)兩位點的 MAF 分別為 C(0.84)和 T(0.89),顯著高于正常對照組,在HBS1L-MYB(rs9399137)位點與正常對照組差異無統(tǒng)計學意義;β-地貧組的Hb F水平與正常對照組無明顯差異,在HBS1L-MYB(rs9399137)位點的MAF為C等位基因(0.24),顯著高于正常對照組。在HBBP1(rs2071348)的MAF為C(0.06),顯著低于正常對照組。在HBG2(rs7482144)的MAF為T(0.08),與正常對照組無明顯差異;組內(nèi)SNP等位基因與Hb F水平的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果為:在正常對照組中HBBP1(rs2071348)位點的基因型與Hb F水平有顯著相關(guān)性,其它各組中均未發(fā)現(xiàn)SNP多態(tài)性與Hb F水平的相關(guān)性。(2)11個Hb Rush攜帶者在D11S1883、D11S4181、D11S1760、D11S4124 四個 STR 位點共享一個 203-217-108-173的單倍型,共同祖先時間為51代,95%置信區(qū)間為36至75代。(3)4個傣族HbE攜帶者在上述四個STR位點共享一個203-217-108-173的單倍型,該單倍型在傣族正常對照中的頻率為0.073;7個傣族HbE攜帶者在上述四個STR位點共享一個203-217-108-173的單倍型,該單倍型在景頗族正常對照中的頻率為0.188;6個德昂族HbE攜帶者在上述四個STR位點共享一個203-217-108-173的單倍型,該單倍型在德昂族正常對照中的頻率為0.080;2個阿昌族HbE攜帶者在上述四個STR位點共享一個203-217-108-173的單倍型,該單倍型在阿昌族正常對照中的頻率為0.069。[結(jié)論](1)HBBP1(rs2071348)、HBG2(rs7482144)和 HBS1L-MYB(rs9399137)在云南德宏地區(qū)人群中具有多態(tài)性;(2)HBBP1(rs2071348)和HBG2(rs7482144)兩個多態(tài)性位點可能與Hb F蛋白水平相關(guān),中間型β-地中海貧血的臨床表現(xiàn)異質(zhì)性可能受β-珠蛋白基因突變性質(zhì)和人群遺傳修飾因子的共同影響。(3)HBBP1(rs2071348)和HBG2(rs7482144)兩個多態(tài)性位點可能與HbE突變存在功能性關(guān)聯(lián)。(4)云南人群中的Hb Rush突變可能具有共同祖先,在云南人群中的分布主要源于突變的奠基者效應。(5)云南地區(qū)傣族、景頗族、德昂族、阿昌族人群中的HbE突變可能不是來源于一個共同祖先。
【學位單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R556.61
【部分圖文】：

珠蛋白基因簇位于１１號染色體短臂１５．邋５，其功能基因涉及５’邋一３’逡逑順次排列的ｅ－＾－Ａｙ－Ｓ－Ｐ五個基因成員，轉(zhuǎn)錄翻譯出ｅ－珠蛋白鏈、丫－珠蛋白逡逑鏈、Ｓ－珠蛋白鏈和珠蛋白鏈。所以如圖２所示，人體在不同發(fā)育時期的血紅蛋逡逑白種類不同，可分為三個發(fā)育時期：胚胎期、胎兒期和成人期。胚胎期的血紅蛋白逡逑為Ｈｂ邋Ｇｏｗｅｒ邋１、Ｈｂ邋Ｇｏｗｅｒ邋２和Ｈｂ邋Ｐｏｒｔｌａｎｄ，胎兒期的血紅蛋白為Ｈｂ邋Ｆ，成人血逡逑紅蛋白為ＨｂＡ和Ｈｂ邋Ａ２［３１］。中間型０邋－地中海貧血主要是由于０邋－珠蛋白基因點突變逡逑或基因缺失引起卜珠蛋白肽鏈合成的減少或缺失。在人體ａ－珠蛋白基因正常表達逡逑的情況下，珠蛋白基因突變引起ａ－與珠蛋白鏈比例失衡，導致ＨｂＡ不能正逡逑常合成，從而產(chǎn)生溶血性貧血。Ｙ－珠蛋白基因重新被激活表達合成丫－珠蛋白鏈與逡逑過剩的ａ－珠蛋白鏈合成ＨｂＦ，改善了邋ａ－／非ａ－珠蛋白鏈的平衡，同時ＨｂＦ代替逡逑部分減少的ＨｂＡ補充紅細胞內(nèi)容，從而影響中間型地中海貧血的臨床表現(xiàn)和嚴重程逡逑度［３３，邋３４］逡逑目前Ｈｂ邋Ｆ水平增高的機制尚不完全清楚

／Ｕ＾ｋｗｉｎ逡逑Ｊｍ逡逑圖３邋ＨＢＳ１Ｌ－ＭＹＢ邋（ｒｓ９３９９１３７）位點ＡＲＭＳ－ＰＣＲ產(chǎn)物電泳圖及測序驗證結(jié)果逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３．邋Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍ邋ｏｆ邋ＰＣＲ－ＲＦＬＰ邋ｐｒｏｄｕｃｔｓ邋ａｎｄ邋ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ逡逑ａｔ邋ＨＢＳ１Ｌ－ＭＹＢ邋（ｒｓ９３９９１３７）逡逑注：圖邋３－Ａ邋（Ｍ：邋ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；邋１、４：邋ＴＣ邋基因型；２、５：邋ＴＴ邋基因型；３：邋ＣＣ邋基因型），圖邋３－Ｂ邋（從逡逑上往下依次為Ａ圖中４、２、３樣本ＰＣＲ產(chǎn)物測序結(jié)果，對應基因型為ＴＣ、ＴＴ、ＣＣ）。逡逑Ｍ邋１邐２邐３邐４邐５逡逑

圖５．邋ＨＢＧ２邋（ｒｓ７４８２１４４）位點ＰＣＲ－ＲＦＬＰ產(chǎn)物電泳圖及測序驗證結(jié)果逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋５．邋Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍ邋ｏｆ邋ＰＣＲ－ＲＦＬＰ邋ｐｒｏｄｕｃｔｓ邋ａｎｄ邋ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ逡逑ａｔ邋ＨＢＧ２邋（ｒｓ７４８２１４４）逡逑注？？圖邋５－Ａ邋（Ｍ：邋ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；邋１、３、４：邋ＣＴ邋基因型；２：邋ＴＴ邋基因型；５：邋ＣＣ邋基因型），圖邋５－Ｂ邋（從逡逑上往下依次為Ａ圖中１、５、２樣本ＰＣＲ產(chǎn)物測序結(jié)果，對應基因型為ＣＴ、ＣＣ、ＴＴ）。逡逑表６．邋ＨＢＢＰ１、ＨＢＳ１Ｌ－ＭＹＢ和ＨＢＧ２基因型頻率及等位基因頻率分布表逡逑Ｔａｂｌｅ邋６．Ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ邋ａｎｄ邋ａｌｌｅｌｅｓ邋ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ＨＢＢＰ１，邋ＨＢＳ１Ｌ－ＭＹＢ邋ａｎｄ邋ＨＢＧ２逡逑正常對照組邐ＨｂＥ／ｅ－地貧組邐ＨｂＥ組邐３－地貧組逡逑邐（ｎ＝１９２）邐（ｎ邋二４１）邐（ｎ＝８９）邐（ｎ：９８）邐逡逑ＨＢＢＰ１邐ＡＡ邐０．７３邋（１４０）邐０．１２邋（５）邐ＫＯ．邋０００１邐０．邋１６（邋１４）邐／＾Ｏ．ＯＯＯｌ邐０．８９邋（８７）邐Ｐ＝０．００１８逡逑基因型頻率逡逑，ｐ，，邋＾邋Ｎ邐ＡＣ邐０．２６邋（４９）邐０．８０（３３）邐０．６３（５６）邐０．１１（邋１１邋）逡逑（樣本數(shù)）逡逑ＣＣ邐０．０２邐（３）邐０．０７邐（３）邐０．２１邋（邋１９）邐０．００邋（０）逡逑ＭＡＦ邋（Ｃ）邐０．１４邐０．４８邐０．５３邐０．０６逡逑ＨＢＳ１１’ＭＹＢ邋ＴＴ邐０．７１邐（１３７）邐０．７１（２９）邋Ｐ－Ｑ．邋３３邐０．７３（６５）邐Ｐ４）．邋９２邐０．６４邋（６３）邋Ｐ＝Ｑ．邋０３

【參考文獻】

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本文編號：2814254