【摘要】：目的:單核細(xì)胞趨化蛋白(MCP)-1誘導(dǎo)蛋白(MCPIP)是MCP-1與其受體CCR2結(jié)合后誘導(dǎo)產(chǎn)生的一個具有轉(zhuǎn)錄活性的鋅指蛋白,MCPIP作為轉(zhuǎn)錄因子,與心肌細(xì)胞、心肌成纖維細(xì)胞的細(xì)胞凋亡密切相關(guān),也可促進(jìn)炎癥性血管生成。增齡是房顫的獨立危險因素,房顫的發(fā)生發(fā)展過程中有炎癥過程的參與,增齡可加劇這種過程,使MCP-1等炎癥因子表達(dá)增多,加速房顫的進(jìn)展。因此,研究不同年齡個體房顫發(fā)生過程中MCPIP的表達(dá)情況,有助于進(jìn)一步明確增齡性房顫的發(fā)生機(jī)制,為房顫的治療提供新的思路。本研究課題包括:(1)比較不同年齡的房顫患者及非房顫健康人的外周血MCPIP表達(dá)水平及MCPIP水平與纖維化指標(biāo)的相關(guān)性。(2)構(gòu)建老年與成年房顫犬模型,比較不同年齡房顫犬與竇律犬的電生理特性,心房結(jié)構(gòu)改變和MCPIP表達(dá)的差異,探究MCPIP表達(dá)與心肌細(xì)胞死亡的關(guān)系。(3)培養(yǎng)H9c2細(xì)胞,上調(diào)或抑制其MCPIP的表達(dá),比較對細(xì)胞凋亡、自噬的影響,并探究其機(jī)制。方法:課題第一部分:選取542名房顫患者及同樣數(shù)量通過年齡和性別配對的非房顫對照者,收集其臨床資料及血樣,比較不同年齡的房顫患者和對照組患者疾病史,心臟超聲結(jié)果和用藥史的差異,使用ELISA法檢測血樣中MCPIP的表達(dá)水平,并檢測纖維化相關(guān)指標(biāo)TGF-β、PIIINP和ICTP,比較MCPIP與這三者的相關(guān)性。課題第二部分:24只比格犬根據(jù)年齡分為老年房顫組,成年房顫組,老年對照組和成年對照組,利用快速起搏法構(gòu)建不同年齡的房顫模型,8周后測量四組有效不應(yīng)期、有效不應(yīng)期離散度和校正竇房結(jié)恢復(fù)時間等指標(biāo),并比較房顫誘發(fā)情況。通過超聲測量心臟結(jié)構(gòu)的變化,并通過組織切片染色比較不同組犬心房組織結(jié)構(gòu)的改變。采集犬外周血,利用ELISA法比較造模過程中MCPIP水平的變化。采用免疫組化染色,RT-PCR和Western blot法檢測犬心房組織中MCPIP和細(xì)胞凋亡和自噬相關(guān)指標(biāo)的變化。課題第三部分:培養(yǎng)H9c2細(xì)胞,分別加入CCR2拮抗劑和/或MCP-1,72小時后收集細(xì)胞進(jìn)行檢測。通過流式細(xì)胞術(shù)和TUNEL染色法比較細(xì)胞凋亡率的差異,并通過免疫熒光染色和Western blot法檢測細(xì)胞中MCP-1,MCPIP和細(xì)胞凋亡和自噬相關(guān)指標(biāo)和通路蛋白的改變。結(jié)果:(1)(1)老年房顫患者的MCPIP表達(dá)高于成年房顫患者和老年對照者,而成年房顫患者和老年對照者的表達(dá)未見明顯差別。(2)MCPIP與TGF-β1的水平在老年房顫組與成年房顫組的表達(dá)有相關(guān)性,且均為正相關(guān)。兩者的表達(dá)在成年房顫組為高度正相關(guān)。(3)MCPIP與PIIINP的表達(dá)在老年房顫組、成年房顫組和老年對照組均有相關(guān)性,且成正相關(guān)。MCPIP與ICTP的表達(dá)在以上三組也呈正相關(guān),而且在成年房顫組呈高度相關(guān)。(2)(1)通過快速起搏能夠成功建立慢性房顫犬模型;增齡使房顫犬的有效不應(yīng)期延縮短,有效不應(yīng)期離散度隨刺激周長的延長而增加,校正竇房結(jié)恢復(fù)時間增加。(2)老年犬更易誘發(fā)出房顫,且持續(xù)時間更長。(3)老年房顫犬心房內(nèi)徑的增加更明顯,心房纖維化程度更重,心肌細(xì)胞凋亡比例更高;(4)老年房顫犬的外周血MCPIP水平高于成年房顫組,其外周血和心肌組織中的凋亡相關(guān)指標(biāo)Caspase-3和自噬相關(guān)蛋白Rubicon的表達(dá)均高于成年房顫組和老年對照組。(5)老年房顫犬心房組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激過程中的關(guān)鍵酶IRE1的表達(dá)也上調(diào)。(3)(1)H9c2細(xì)胞的生長可被MCP-1影響,10uM的MCP-1可選為實驗的添加劑量。(2)H9c2細(xì)胞可在MCP-1的影響下,分泌MCP-1及MCPIP。而CCR2拮抗劑可抑制MCPIP的分泌,對MCP-1的影響不大。(3)MCP-1表達(dá)增加可引起心肌細(xì)胞生存率下降,細(xì)胞凋亡增加,CCR2拮抗劑的加入可抑制這種作用。因此這種誘導(dǎo)凋亡的作用是通過MCPIP起作用的。(4)MCP-1/MCPIP可引起心肌細(xì)胞凋亡或自噬增加,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生,這些作用是通過CEBPβ和PPAR-γ通路起作用的。結(jié)論:(1)MCPIP的表達(dá)在增齡性房顫患者的外周血中增加,而且其與房顫后纖維化有關(guān)。(2)MCPIP的表達(dá)在老年房顫犬中更多,且變化趨勢與心肌凋亡水平一致。MCPIP在外周血及心房組織中的表達(dá)及組間差異與凋亡和自噬生物標(biāo)志相同,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在其中起關(guān)鍵作用。(3)MCP-1表達(dá)增加可引起心肌細(xì)胞生存率下降,細(xì)胞凋亡增加,這是通過MCPIP起作用的;MCP-1/MCPIP可引起心肌細(xì)胞凋亡或自噬增加,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生,這些作用是通過CEBPβ和PPAR-γ通路起作用的。
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R541.75
【圖文】：

表 1-2 非房顫對照者基線資料Table 1-2 Basic characteristics of non-AF controls年齡≥65 年齡＜65 74.6±4.3 53.6±2.852.1 41.4 43.6 12.8 30 21.1 （%） 22.2 1.2 12.4 0 14.2 13.6 組間 MCPIP 水平的差別示了不同組間 MCPIP 水平的差別。由圖中可見，MCPIP而且房顫的發(fā)生也會使 MCPIP 表達(dá)增加。因此老年房顫成年房顫患者和老年對照組的表達(dá)未見明顯差別。

圖 2-1 動物造模方案Figure 2-1 Animal modeling protocolAged AF：老年房顫組 Adult AF：成年房顫組 Aged CTL：老年對照組 Adult CTL：成年對照組；Bloodsample：收集血樣；Echocardiography：心臟超聲；Electrophysiologicaltest：電生理檢測；Excise tissue：收集組織1.2.1.2 實驗器械和耗材消毒碗、彎盤、卵圓鉗、中鉗、止血鉗、直剪、眼科剪、器械盤、燒杯、刀柄、刀片、鑷子、縫合線、無損縫合線、持針器、圓針、三角針、BIRTCH ER 44000 電刀、拉鉤器、開胸器、喉鏡、氣管插管、大單、中單、洞巾、手術(shù)衣、動物剃毛器、繃帶、紗布、口罩、手套、電熱毯等。1.2.1.3 實驗藥品陸眠靈、陸醒寧、鹽酸氯胺酮、舒泰、鹽酸嗎啡、利多卡因注射液、枸櫞酸芬太尼、氯化琥珀酰膽堿、頭孢唑林鈉、阿托品、肝素、腎上腺素注射液、生理鹽水、5%葡萄糖、3%戊巴比妥鈉溶液等。

p1 month-pacingHRA LA RAF 1501.000±277.022 1672.333±196.271**，## 1601.667±64.671 1681.000±AF 561.500±408.001 761.333±136.621 677.333±82.585 503.333ntrol 506.667±61.101 496.667±49.329 553.333ntrol 313.333±30.551 320.000±45.826 281.667A：高右房；LA：左房；RA：右房；*：與成年房顫組相比 P＜0.05；#：與老0.05；**：與成年房顫組相比 P＜0.01；##：與老年對照組相比 P＜0.01；搏 8 周后，計算出四組的有效不應(yīng)期離散度（dERP）并進(jìn)行比較，發(fā)，成年房顫組和老年對照組在 S1S2=250，300，350，400ms 測得的 長。并且老年房顫組在 S1S2=250，300，350，400ms 處測得的 dER和對照組的長（P＜0.05）（圖 2-2）。比較在 S1S2=300，400ms 處測結(jié)恢復(fù)時間（CSNRT）可發(fā)現(xiàn)，老年房顫組的 CSNRT 延長，與成年房照組相比均有明顯差別（圖 2-3）。

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本文編號：2795052