【摘要】：目的:探討外源性硫化氫(H_2S)對(duì)高糖環(huán)境下內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)功能活性的影響及機(jī)制研究。方法:采用密度梯度離心法從25-35歲健康志愿者外周血分離出單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs),然后用EGM-2培養(yǎng)基對(duì)EPCs進(jìn)行培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化,細(xì)胞培養(yǎng)7天后通過(guò)用細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)EPCs攝取Dil標(biāo)記的乙�；兔芏戎鞍�(DiI-Ac-LDL)和結(jié)合異硫氰酸熒光素標(biāo)記的荊豆凝集素-I(FITC-UEA-I)的特性,鑒定出EPCs;在體外,將EPCs分別隨機(jī)置于正常葡萄糖培養(yǎng)液(5.5mmol/L)、高糖培養(yǎng)液(33mmol/L)、高糖(33mmol/L)+不同濃度NaHS(H_2S前體)(25μM、50μM、100μM、200μM)培養(yǎng)液中培養(yǎng)24h,然后觀察并且比較各組EPCs體外增殖、遷移、黏附能力變化;在體內(nèi)實(shí)驗(yàn),首先建立裸鼠頸動(dòng)脈內(nèi)膜拉脫損傷模型,然后觀察高糖對(duì)EPCs修復(fù)裸鼠頸動(dòng)脈內(nèi)皮損傷能力的影響,以及NaHS的保護(hù)作用;最后使用蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot)檢測(cè)NaHS抗高糖環(huán)境下內(nèi)皮祖細(xì)胞Akt和eNOS蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:高糖培養(yǎng)液作用EPCs 24h后,EPCs的增殖、遷移、黏附能力均明顯下降(P0.05);而當(dāng)不同濃度的NaHS和高糖同時(shí)作用于EPCs時(shí),細(xì)胞的增殖、遷移、黏附能力均得到明顯改善(P0.05);當(dāng)高糖作用EPCs進(jìn)行細(xì)胞移植時(shí),其再內(nèi)皮化能力明顯下降(P0.05),而當(dāng)硫化氫和高糖同時(shí)作用于EPCs進(jìn)行細(xì)胞移植時(shí),其再內(nèi)皮化能力明顯改善(P0.05),且EPCs表面的Akt/eNOS信號(hào)通路明顯上調(diào)(P0.05)。結(jié)論:1.NaHS(H_2S前體)在一定范圍內(nèi)能夠明顯改善高糖環(huán)境下內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)的增殖、遷移、黏附能力,并且能改善內(nèi)皮祖細(xì)胞的血管內(nèi)皮修復(fù)能力。2.外源性硫化氫(H_2S)改善內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)的血管內(nèi)皮修復(fù)能力的機(jī)制可能與內(nèi)皮祖細(xì)胞表面的Akt/eNOS信號(hào)通路相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R587.2;R54
【圖文】：

第 3 章 結(jié)果第 3 章 結(jié)果 的鑒定倒置顯微鏡觀察形態(tài)：培養(yǎng) 7 天后的 EPCs 貼壁細(xì)胞呈現(xiàn)），培養(yǎng) 7 天后的 EPCs，用 DiI-ac-LDL 和 FITC-UEA-I疫熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞攝取 DiI-ac-LDL 呈現(xiàn)紅色-I 呈現(xiàn)綠色熒光，DiI-ac-LDL 和 FITC-UEA-I 雙染色陽(yáng)性以被認(rèn)為是正在分化的 EPCs（圖 2）。

倒置顯微鏡觀察形態(tài)：培養(yǎng) 7 天后的 EPCs 貼壁細(xì)胞呈現(xiàn)1），培養(yǎng) 7 天后的 EPCs，用 DiI-ac-LDL 和 FITC-UEA-I免疫熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞攝取 DiI-ac-LDL 呈現(xiàn)紅色-I 呈現(xiàn)綠色熒光，DiI-ac-LDL 和 FITC-UEA-I 雙染色陽(yáng)性以被認(rèn)為是正在分化的 EPCs（圖 2）。圖 1.培養(yǎng) 7 天的 EPCs 光鏡下圖片（100x）

第 3 章 結(jié)果EPCs 體外增殖能力用 CCK8 法檢測(cè)在高糖環(huán)境下，NaHS 對(duì) EPCs 的保護(hù)作用；與正常比，高糖組的 EPCs 增殖能力明顯降低(P<0.05）。25μM、50μM、00μM NaHS 作用后 EPCs 的增殖能力呈劑量依賴性升高（P<0.05）壓對(duì)照組與 5.5mmol/L 葡萄糖組相比無(wú)顯著差異（P>0.05）。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2792981