【摘要】：目的:研究博來霉素(bleomycin,BLM)聯(lián)合野百合堿(monocrotaline,MCT)模擬的系統(tǒng)性硬化癥相關(guān)肺動(dòng)脈高壓(systemic sclerosis associated pulmonary arterial hypertension,SSc-PAH)兔模型中巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)的作用。方法:研究1:將實(shí)驗(yàn)雄性家兔50只按隨機(jī)數(shù)字表分為5組,各組10只,具體如下,A組:溶劑對照組,B組:大劑量MCT組,C組:小劑量MCT組,D組:小劑量MCT聯(lián)合BLM組,E組:單藥BLM組。B組與C組分別一次性腹腔注射1%MCT溶液60 mg/kg、40 mg/kg,D組一次性腹腔注射1%MCT溶液40mg/kg,每天腹腔注射BLM溶液100 ul/只,E組:每天腹腔注射BLM溶液100ul/只,溶劑對照組予以等體積量溶劑(采用無水乙醇與生理鹽水2:8比例混合)腹腔注射。3周后麻醉解剖取材,測量肺動(dòng)脈壓力,右心室肥大指數(shù)(Right ventricular hypertrophy index,RVHI),皮膚、肺動(dòng)脈干及肺組織石蠟切片制作及HE染色觀察病理改變。研究2:30只健康雄性家兔,隨機(jī)分為3組:分別為溶劑對照組、模型組、MIF靶向抑制組,每組10只。模型組按上述實(shí)驗(yàn)1方法造模,MIF靶向抑制組在造模的同時(shí)予以MIF靶向抑制劑ISO-1 0.66 mg/(kg·d)腹腔注射,溶劑對照組每日腹腔注射等體積溶劑,觀察動(dòng)物的一般情況,21天后,檢測所有動(dòng)物的右心室肥大指數(shù)以及肺動(dòng)脈壓力,并對皮膚、肺動(dòng)脈干及肺組組進(jìn)行HE染色,Western blotting及免疫組化檢測肺組織中MIF的表達(dá)。結(jié)果:研究1:1、一般情況:BCD三組注射藥物10天后開始出現(xiàn)毛發(fā)暗淡缺少光澤,呼吸頻率變快,活動(dòng)的范圍及次數(shù)減少,食欲有所下降。從第16天起,DE兩組相繼出現(xiàn)腹部注射區(qū)域皮膚部分增厚、變硬、彈性差,未見兔毛。A組未出現(xiàn)上述改變,毛發(fā)、活動(dòng)量、飲水進(jìn)食量、呼吸等情況同前無明顯變化,體重隨時(shí)間增加。小劑量BLM聯(lián)合MCT組共死亡2只,造模成功率為80%;2、與A、E兩組對比,B、C、D組右心室肥大指數(shù)及平均肺動(dòng)脈壓力明顯增高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;3、病理:DE兩組皮膚真皮層增厚,毛囊及附屬腺體減少、萎縮甚至消失,膠原纖維明顯增多、增粗、排列緊密,脂肪組織減少,被膠原纖維所包繞、代替,ABC組均未出現(xiàn)上述變化。與AE兩組相比,B、C、D組肺小動(dòng)脈明顯增厚、管腔狹窄,肌型肺小動(dòng)脈中膜明顯增厚,肺組織可見炎癥細(xì)胞的浸潤;AE兩組肺組織及肺動(dòng)脈干結(jié)構(gòu)正常,無上述改變。研究2:1、與對照組相比,模型組及精神狀態(tài)差、活動(dòng)量減少,飲水進(jìn)食減少,毛發(fā)無光澤,呼吸急促,注射部位皮膚局部增厚、彈性變差。MIF靶向抑制組皮毛光澤度一般,活動(dòng)有所減少,注射部位皮膚較對照組變硬,但較模型組柔軟,彈性一般。2、與對照組相比,模型組及MIF靶向抑制組右心室肥大指數(shù)及平均肺動(dòng)脈壓力明顯增高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。模型組皮膚真皮層增厚,皮膚附屬器減少,肺組織及間質(zhì)可見炎性細(xì)胞的浸潤,肺動(dòng)脈干及肺小動(dòng)脈管壁增厚,管腔狹窄,MIF靶向抑制組較正常對照組增厚,較模型組有所減輕。3、Western blotting顯示:模型組中肺組織MIF蛋白高表達(dá),與對照組及MIF靶向抑制組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,MIF靶向抑制組MIF蛋白表達(dá)下調(diào),相比對照組及模型組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4、免疫組化顯示:MIF在模型組肺組織高表達(dá),且位于肺小動(dòng)脈內(nèi)膜,MIF靶向抑制組結(jié)果顯示MIF表達(dá)下調(diào)。結(jié)論:1、博來霉素聯(lián)合野百合堿(40 mg/kg)可成功模擬兔SSc-PAH模型,較大劑量MCT(60 mg/kg),使用40 mg/kg的MCT降低了其死亡率,提高了成功率。2、MIF在兔SSc-PAH模型肺組織中高表達(dá),靶向抑制MIF后,MIF表達(dá)下調(diào),提示MIF在兔SSc-PAH模型發(fā)病機(jī)制中起重要作用。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R593.2;R544.1
【圖文】：

0 5 10 15 20 251.21.4時(shí) 間 （天）體圖 4 各組右心室肥大指數(shù)比較劑量 MCT、聯(lián)合組相比 P<0.05,*與對照組相比 P<0.01,#表示與大劑劑量 MCT、聯(lián)合組相比 P<0.01結(jié)構(gòu)變化皮膚 HE 染色病理示：DE 組皮膚真皮層增厚伴有真皮下層附屬腺體減少、萎縮甚至消失，膠原纖維明顯增多、增織減少，被膠原纖維所包繞、代替，ABC 組均未出現(xiàn)上均為 10 ）。

0 5 10 15 20 251.21.4時(shí) 間 （天）體圖 4 各組右心室肥大指數(shù)比較劑量 MCT、聯(lián)合組相比 P<0.05,*與對照組相比 P<0.01,#表示與大劑劑量 MCT、聯(lián)合組相比 P<0.01結(jié)構(gòu)變化皮膚 HE 染色病理示：DE 組皮膚真皮層增厚伴有真皮下層附屬腺體減少、萎縮甚至消失，膠原纖維明顯增多、增織減少，被膠原纖維所包繞、代替，ABC 組均未出現(xiàn)上均為 10 ）。

圖 7 C 組實(shí)驗(yàn)兔皮膚 圖 8 D 組實(shí)驗(yàn)兔皮膚 圖 9 E 組實(shí)驗(yàn)兔皮膚2.2.6 肺動(dòng)脈干結(jié)構(gòu)變化各組肺動(dòng)脈干病理如下：BCD 組肺動(dòng)脈干管腔明顯增厚、狹窄，肌型肺小動(dòng)脈中膜明顯增厚，管壁及血管周圍有大量炎性細(xì)胞浸潤。AE 組實(shí)驗(yàn)兔肺動(dòng)脈干無上述變化，結(jié)構(gòu)正常。如圖 10-14（均為 10 ）。圖 10 A 組實(shí)驗(yàn)兔肺動(dòng)脈 圖 11 B 組實(shí)驗(yàn)兔肺動(dòng)脈

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 羅妍;王遷;;系統(tǒng)性硬化癥動(dòng)物模型[J];中華臨床免疫和變態(tài)反應(yīng)雜志;2014年03期

2 馬凱;邢泉生;邢介龍;泮思林;;不同劑量野百合堿誘導(dǎo)大鼠肺動(dòng)脈高壓模型的實(shí)驗(yàn)研究(英文)[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2013年21期

3 張芳;謝悅;張昊;王偉;;結(jié)締組織病相關(guān)肺動(dòng)脈高壓模型的建立[J];中華風(fēng)濕病學(xué)雜志;2012年03期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 王為;結(jié)締組織病相關(guān)肺動(dòng)脈高壓的血清標(biāo)記物研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2010年

本文編號(hào)：2786435